苦丁冬青苷D对人HCC-1806乳腺癌细胞增殖、凋亡、自噬的影响及机制研究

目的探讨苦丁冬青苷D(KD-D)对人HCC-1806乳腺癌细胞增殖、凋亡、自噬的影响及机制。方法将人HCC-1806乳腺癌细胞作为研究对象,给予不同浓度KD-D处理后,采用CCK-8法检测细胞存活率;EdU法检测细胞增殖能力;结晶紫染色法检测细胞克隆形成能力;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI法)检测细胞凋亡;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位;免疫荧光法检测细胞Cleaved Caspase-3、LC3、P62蛋白表达;Western Blot法检测细胞Cleaved Caspase-3、Pan-AKT、Phosp-AKT、LC3Ⅱ蛋白表达;自噬双标mRFP-EGFP-LC3腺病毒感染实验检测细胞自噬流。结果与对照组比较,12.5、25、50、100、200、400μmol·L^(-1)KD-D处理HCC-1806细胞24、48 h后,随着给药浓度增大和处理时间延长,细胞活性显著降低(P<0.001),细胞内吸光度值显著降低(P<0.001),细胞增殖受到抑制;60、80μmol·L^(-1)KD-D组的细胞克隆形成计数显著减少(P<0.001);50、100、150μmol·L^(-1)KD-D组细胞的早期及晚期凋亡比例均显著升高(P<0.05,P<0.001);40、60、80μmol·L^(-1)KD-D组的红色荧光比例显著下降(P<0.001),绿色荧光比例显著升高(P<0.01,P<0.001),HCC-1806细胞线粒体膜电位下降;60、80、100μmol·L^(-1)KD-D组细胞的Cleaved Caspase-3蛋白表达均显著上调(P<0.001),60μmol·L^(-1)KD-D组细胞的Pan-AKT、Phosp-AKT蛋白表达均显著上调(P<0.001);60μmol·L^(-1)KD-D组细胞的LC3蛋白荧光小点数量显著增加(P<0.001),P62蛋白平均荧光强度显著降低(P<0.001),LC3Ⅱ蛋白表达显著上调(P<0.001),自噬小体及自噬溶酶体数量显著增加(P<0.01,P<0.001),自噬流激活。与60μmol·L^(-1)KD-D组比较,KD-D+AKT抑制剂(Afuresertib)组细胞的Cleaved Caspase-3、Pan-AKT蛋白表达显著下调(P<0.01,P<0.001),Phosp-AKT蛋白表达显著上调(P<0.001)。结论KD-D能抑制人乳腺癌HCC-1806细胞增殖,并诱导其发生凋亡和自噬,KD-D诱导HCC-1806细胞凋亡可能与激活AKT信号影响Cleaved Caspase-3表达有关。

白山毛桃根提取物对非小细胞肺癌细胞的抑制效果及机制研究

目的:探讨白山毛桃根提取物对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探究其潜在分子调控机制。方法:设置白山毛桃根提取物各浓度(0 mg/mL、10 mg/mL、20 mg/mL、40 mg/mL、60 mg/mL)实验组进行MTT实验,观察白山毛桃根提取物对肺癌H1299细胞增殖的影响。根据MTT实验结果,再设置分组为对照组(无白山毛桃根提取物)、白山毛桃根提取物组(浓度40 mg/mL)、白山毛桃根提取物+miR-NC组、白山毛桃根提取物+miR-182-5p组进行实验。采用脂质体法,分别将miRNC、miR-182-5pmimics、anti-miR-NC、anti-miR-182-5p转染至H1299细胞。Transwell检测各组细胞的侵袭和迁移;实时荧光定量PCR(qPCR)检测H1299细胞中miR-182-5pmRNA和PCDH10 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测PCDH10蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果:各浓度白山毛桃根提取物组细胞抑制率均高于0 mg/mL组,并呈剂量依赖性(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-182-5p组WT-PCDH10非小细胞肺癌细胞的荧光素酶活性低于miR-NC组(P<0.05);而miR-182-5p组与miR-NC组的MUT-PCDH10荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05),白山毛桃根提取物组细胞迁移和侵袭数量低于对照组(P<0.05);白山毛桃根提取物组H1299细胞中miR-182-5p mRNA表达低于对照组;PCDH10 mRNA及蛋白表达高于对照组(P<0.05),白山毛桃根提取物组H1299细胞中miR-182-5p表达水平、细胞迁移和侵袭数量低于对照组;白山毛桃根提取物+miR-24-3p组H1299细胞中miR-182-5p表达水平、细胞迁移和侵袭数量高于白山毛桃根提取物+miR-NC组(P<0.05);白山毛桃根提取物组H1299细胞中PCDH10蛋白表达水平、细胞抑制率高于对照组;白山毛桃根提取物+miR-182-5p组H1299细胞中PCDH10蛋白表达水平、细胞抑制率低于白山毛桃根提取物+miR-NC组(P<0.05)。结论:白山毛桃根提取物可抑制非小细胞肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-182-5p调控PCDH10基因表达有关。

中药调节间充质干细胞治疗膝骨性关节炎研究进展

膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)属于临床中常见的关节退行性疾病[1]。目前我国膝关节骨性关节炎总体患病率约为15%,40岁以上的患病率为15%~17%,60岁以上达50%,70岁以上高达80%[2]。骨关节炎是一种慢性关节疾病,主要特征为关节软骨原发性或继发性退行性病变和软骨下骨骨质增生,其病理核心是关节软骨的损伤及骨赘形成[3-4]。软骨下骨的降解与合成过程动态平衡的打破在膝关节骨性关节炎的发展进程中起到重要的作用[5]。中医认为本病属于“骨痹”范畴,最早见于《黄帝内经》,是中医病理学理论的根源,而且膝关节骨性关节炎与体内长期慢性劳损,年龄增长体内器官退变,外感风寒湿邪有很大的关联。近年来应用中医药治疗膝关节骨性关节炎的作用机制逐渐明朗,如中药对基质金属蛋白酶、软骨降解酶、氧自由基、一氧化氮、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)等的影响。近年来,组织工程化软骨为关节软骨退变的临床治疗提供了新的契机种子细胞、生长因子及支架材料,这三点构成了组织化软骨的基本要素[6]。在构建组织工程化软骨中,不同组织来源的间充质干细胞具有强大的研究前景[7]。随着中医药在治疗膝关节软骨损伤方法中的逐步完善,对膝关节骨性关节炎治疗机制的不断深入,越来越多的研究结果显示,中医药复方制剂对机体内的间充质干细胞具有不同程度的调节和刺激再生功能。本文就中医药对间充质干细胞功能调节及膝关节骨性关节炎的治疗和研究进行综述。

浅谈石决明的煅制法

石决明的炮制多采用“煅制法”．般制是一种对药材进行高温处理的方法。使药材质地酥脆．便于粉碎。利于煎出有效成份，增强疗效．本文就石决明炮制方法的沿革；现用制法的优缺点。以及煅制温度与时间对其外观性状．酥脆度的影响谈谈浅见．

谈谈如何提高汤剂的质量和疗效

目的 探讨如何提高中药汤剂的质量和疗效。方法 从严把中药材及饮片质量关 ,加强中药炮制、调剂工作 ,严格汤剂制备各过程 ,不断改革、发展汤剂等方面进行分析研究。结果 提高中药内在质量 ,使之生产、销售规范化管理 ,重视影响汤剂质量的各因素 ,并不断进行改革和发展 ,汤剂的质量和疗效会得到保证和提高。结论 提高汤剂的质量和疗效 。

从《伤寒论》《金匮要略》探析张仲景用芍药之精髓

芍药首载于《神农本草经》,是古往今来中医临床之常用药,若究其辨证之严谨,组方之精良,用药之灵活,则非张仲景莫属,在《伤寒论》中有33个方出现芍药,《金匮要略》的205方中34个出现芍药,占全部方剂的21%^([1]),可见芍药应用范围之广,“去”“留”之多变。本文将基于中医历代医家古籍探求张仲景应用芍药的内在机理,为临床应用提供借鉴。

构建和谐团场需要解决好的几个问题

构建和谐团场,应以解决职工群众最关心、最直接、最现实的利益问题为重点。要不折不扣地执行党的方针政策,畅通诉求表达渠道,建立法律服务体系,在基层领导干部中加强八个方面的良好风气建设,进一步密切党群干群关系。

关于加强党的执政能力建设与统一战线关系的思考

统一战线是我们党革命、建设和执政兴国的重要法宝,在巩固党的执政地位和执政能力中有不可替代的作用,要进一步深化对新时期统一战线作用的认识,加强党对统一战线的领导,提高统一战线对党的执政能力的支持力、影响力、凝聚力、公信力．为实现中华民族的伟大复兴做出独特的贡献。

全面建设小康社会新阶段做好非公有制经济人士统战工作的思考

十届全国人大二次会议通过的宪法修正案将“国家鼓励、支持和引导非公有制经济的发展”写入宪法,为非公有制经济的发展奠定了法律基础,其法律、经济、政治、心理特征己经凸现。要把发展非公有制经济作为做好新时期非公有制经济人士的工作的出发点和落脚点,把他们的利益维护好、把发展非公有制经济的愿望实现好、把非公有制经济发展好。

减负——农一师落实“1+3”文件情况的调查与思考

兵团政委陈德敏、司令员张庆黎在去年12月18日召开的兵团党委五届二次全委(扩大)会议上一再强调,一定要大力发展经济。要把发展壮大兵团与致富职工群众统一起来,让老百姓真正安居乐业,过上好日子!职工群众是兵团履行屯垦戍边历史使命的主力军,不提高职工群众的收入,改善职工群众的物质文化生活水平,就不可能发展壮大兵团。那么。怎样才能"发展壮大兵团,致富职工群众"呢?农一师党校的赵泽义、巩发云同志的这篇调查与思考,为我们提供了一种思路,请读者注意阅读。

贿赂犯罪中污点证人作证存在的问题及对策

本文对贿赂犯罪案件侦查中的污点证人、污点证人的特点、污点证人的作证意义作了阐述,对贿赂案件中污点证人作证存在的问题作了分析,提出了完善污点证人作证的对策。