莲子心米曲霉发酵物对特应性皮炎缓解效果的研究

该研究旨在探究莲子心经米曲霉发酵后其产物在细胞层面对特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)的潜在治疗作用。通过HPLC监测莲子心米曲霉发酵过程,并采用液相色谱-飞行时间-质谱联用技术鉴定了其特征转化产物结构。在肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)/干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)双炎症因子诱导的AD细胞模型中,对米曲霉莲子心发酵前后的不同组分,进行了白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、巨噬细胞来源趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)、胸腺激活调节趋化因子(thymus and activation-regulated chemokine,TARC)和氧化应激(谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和丙二醛)水平的考察。结果表明,通过米曲霉发酵能有效分解莲子心中的异莲心碱及甲基莲心碱,生成小分子苄基异喹啉类生物碱衍生物。在细胞层面的评价结果表明,相比于发酵前,莲子心发酵产物不仅可以更好的缓解模型中HaCaT细胞的氧化应激反应,而且对MDC、TARC和IL-6的分泌具有更强的负调控作用。综上,米曲霉可对莲子心中的特征性生物碱进行转化,且产物在TNF-α/IFN-γ双炎症因子诱导的AD细胞模型中表现出更强的抗炎效果。该研究为后续开发发酵来源的功能性食品、化妆品以及药品提供理论依据和新思路。

基于网络药理学探究解毒消癥饮改良方抗炎机制

目的为了研发一种适用于皮肤的中药复方药物,本研究运用网络药理学和分子对接技术,旨在深入探讨中药复方解毒消癥饮改良方(MJXY)在抗炎作用中的机制。方法通过数据库收集组方活性成分,并利用Uniprot数据库查询靶点蛋白对应基因。收集炎症相关的靶点作为候选基因,Cytoscape软件构建网络图,STRING数据库获取候选靶点基因蛋白相互作用网络,分析出核心靶点基因并进行基因本体(GO)功能富集与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析;采用分子对接软件进行对接验证成分与靶点的亲和力。结果收集285个成分对应靶点以及1522个炎症相关靶点,筛选后得到候选靶点141个;发现涉及细胞迁移、信号受体活性、癌症通路、炎症因子通路等方面。并验证MJXY核心成分与炎症关键靶点具有良好的亲和力。结论本研究表明其潜在的抗炎作用机制可能涉及调控免疫炎症、细胞转录、增殖与凋亡等过程。作用机制具有多化合物、多靶点、多途径的特点,为进一步研究炎症治疗提供了新的方向与思路。

[苄基三甲基铵][芥酰胺苯甲酸]离子液体表面活性剂的合成及性能

以菜籽油加工过程中的下脚料芥酸(二十二碳-13-烯酸)为原料,制备了一种超长碳链的脂肪酸离子液体表面活性剂[苄基三甲基铵][芥酰胺苯甲酸](ErBBTA)。通过傅里叶红外光谱仪与核磁波谱确认了其分子结构。研究结果表明,超长碳链和苯环结构的引入可赋予ErBBTA极强的自组装能力,临界胶束浓度仅为0.0035 mmol/L,胶束化自由能达到-67.90 kJ/mol。当浓度达到临界交叠浓度(1.19 mmol/L)时,ErBBTA可以在水溶液中自组装形成蠕虫状胶束,赋予体系显著的黏弹性,能作为流变调节剂应用于日用化学品、石油开采等领域。

螺旋藻源血管紧张素转化酶抑制肽的筛选及生物活性研究

血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)在血压调控中发挥着重要作用。从食源蛋白中筛选具有ACE抑制活性的多肽已经成为研究热点。螺旋藻作为最早被食用的藻类,目前其蛋白质含量在藻类食物中最高,因此该研究利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶水解螺旋藻蛋白制备ACE抑制肽。首先,通过水解度、DPPH清除率、ACE抑制率筛选得到最佳水解酶为碱性蛋白酶。联合肽组学与计算模拟发现水解组分中2条新型ACE抑制肽分别为His-Ile-Ile-Ala-Arg-Pro-His(HIIARPH,IC_(50)=461.5μmol/L)和Leu-Arg-Leu-Lys-Glu(LRLKE,IC_(50)=155.8μmol/L),其酶抑制动力学表现形式为非竞争抑制模式。进一步采用分子对接分析其非竞争性抑制的分子机制,发现HIIARPH和LRLKE与ACE的S_(1)、S_(2)口袋形成氢键发挥抑制作用,此外,LRLKE能与S_(3)口袋以及Zn^(2+)结合,表现出更佳的抑制活性。最后,评价了HIIARPH和LRLKE的稳定性和细胞毒性。其中,LRLKE具有较好的热稳定性,在酸性和弱碱性条件下都能保持较高的活性。HIIARPH和LRLKE在≤1 mmol/L时对HUVEC细胞无明显毒性。综上,该研究提供了一种快速筛选ACE抑制肽的方法,为开发螺旋藻源降血压肽提供理论参考。

木犀草素对铜绿假单胞菌上清液诱导RAW264.7炎症反应的作用

目的研究木犀草素对铜绿假单胞菌上清液(PA-SUP)诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的作用。方法采用MTT法测定细胞毒性,荧光酶标仪测定细胞内ROS水平,ELISA法测定炎症因子NO、iNOS、IL-6、IL-1β、TNF-α和COX-2水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白相对表达。结果与对照组比较,PA-SUP和5、10、20μmol/L木犀草素对RAW264.7细胞均无毒性(P>0.05)。与PA-SUP刺激组比较,不同浓度木犀草素均可以下调PA-SUP诱导产生的ROS、NO、iNOS、IL-6、IL-1β和COX-2(P<0.05),10、20μmol/L木犀草素可以抑制炎症因子TNF-α的分泌和NF-κB p65的核移位(P<0.05)。结论木犀草素可以抑制PA-SUP所诱导的巨噬细胞RAW264.7的炎症反应,下调细胞氧化应激水平。

十二烷基硫酸钠胁迫下的黏膜乳杆菌XWL功效及安全性

该研究旨在探究十二烷基硫酸钠(sodium lauryl sulfate,SLS)胁迫对益生菌外用功效的影响。通过比较自由基清除率和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性筛选具有高抗氧化活性的益生菌,将筛选出的黏膜乳杆菌用1 mmol/L SLS胁迫培养,代谢组学分析差异代谢物判断潜在功效并在细胞内进行进一步功效验证及体外毒理学安全性评估。通过代谢组学分析,鉴定出192种差异代谢物,并发现包括泛酸、甲基补骨脂黄酮等抗氧化应激相关产物在SLS胁迫的黏膜乳杆菌XWL溶胞物(LM+)中含量明显大于未胁迫样品(LM)(P<0.001)。且证实了LM+对HaCaT细胞毒性和对SLS诱导产生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)清除效果优于LM。鸡胚绒毛尿囊膜试验与Ames试验证明两种溶胞物在体积分数40%以下无刺激性和致突变性。综上,黏膜乳杆菌XWL在SLS胁迫下会分泌更多益生物质来应对胁迫环境,从而加强对SLS导致的HaCaT细胞损伤的针对性保护作用,该研究为益生菌的功效提升提供思路。

大豆发酵液的抗氧化活性

利用枯草芽孢杆菌制备大豆发酵液(soybean fermentation broth,S-FB)并研究了其抗氧化活性。通过分析抗氧化活性物含量得到S-FB中总酚和总肽的质量浓度比大豆发酵前提取液(soybean extract,SE)分别提高了187%和229%。抗氧化测试结果显示,1%S-FB对2,2′-联氨双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)[2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]阳离子自由基的清除效果接近10%SE。因此,发酵提高了S-FB中的活性物含量并增强了其抗氧化活性。试验进一步研究了S-FB在人永生化角质形成细胞(HaCaT)内的抗氧化作用。结果表明,S-FB(5%、10%和20%)对活性氧的诱导作用随其体积分数的提高而增强。H 2O 2+S-FB(5%、10%和20%)提高的活性氧水平均低于H 2O 2或5%S-FB。因此,当活性氧水平提高,S-FB对活性氧的清除效果增强,诱导作用减弱。5%S-FB处理后,核因子E2相关因子2上调,并且超氧化歧化酶活力在36和48 h分别提高了32.5%和32.1%,对应的过氧化氢酶活力分别提高了19.6%和17.5%,同时该细胞被紫外线B损伤后的存活率是常规HaCaT细胞的1.3倍。因此,S-FB能够通过降低氧化应激反应和激活抗氧化通路来保护HaCaT细胞。

丹栀龙胆逍遥汤成分复配物的抗炎作用

目的研究丹栀龙胆逍遥汤中抗炎成分獐牙菜苦苷、京尼平苷酸、没食子酸复配物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症以及2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导小鼠特应性皮炎的保护作用。方法采用MTT法检测细胞活力,Griess法检测NO水平,ELISA法检测IL-6、TNF-α、PGE_(2)、iNOS、COX-2水平,Western blot法和免疫荧光染色检测NF-κB p65核易位,采用HE染色、甲苯胺蓝染色以及IgE试剂盒检测小鼠特应性皮炎皮损情况。结果 0~200μg/mL质量浓度的复配物对细胞活力无明显影响(P>0.05)。在细胞炎症模型中,复配物处理可以降低NO、IL-6、TNF-α、PGE_(2)、iNOS和COX-2水平(P<0.05,P<0.01);复配物可抑制LPS诱导的NF-κB p65核易位。在小鼠特应性皮炎模型中,外用复配物可以降低小鼠皮肤的表皮增厚、肥大细胞增多以及血清总IgE水平(P<0.05,P<0.01)。结论獐牙菜苦苷、京尼平苷酸、没食子酸复配物在体外细胞炎症和体内小鼠特应性皮炎中都具有很好的抗炎效果。

用于组合活性物透皮共递送的环糊精复合物传质体的制备与表征

以卵磷脂、胆固醇、表面活性剂为壁材制备传质体,通过薄膜水合法分别将苯乙基间苯二酚(PR)与白藜芦醇/羟丙基-β-环糊精(RSV/HP-β-CD)复合物包封在传质体的磷脂双分子层和水性隔室中,获得环糊精复合物传质体(DCTs)。研究了膜软化剂及其添加量、添加方式对DCTs粒径、PDI、Zeta电位、包封率的影响。结果表明,使用0.012 mol/L的T20制得的DCTs粒径较小,为112.43 nm,PDI为0.16,Zeta电位为-34.90 mV,PR与RSV包封率最高,分别为77.07%和60.67%。通过对DCTs体外释放、透皮、细胞毒性及B16-F10细胞内黑色素含量研究,发现DCTs实现了活性物缓释并防止活性物降解,减小了组合活性物透皮递送的渗透性差异,降低了游离活性物的细胞毒性,增强了组合活性物的协同效果,从而减少了B16-F10细胞的黑素生成。

基于蛋白质组学的透明质酸寡聚糖抗炎活性研究及验证

透明质酸(hyaluronic acid,HA)广泛地分布在人体组织中,是一种具有重要生理功能的多糖,且已被国家卫生健康委员会批准作为“新食品原料”,可用于普通食品添加剂中。对于HA寡聚糖(oligo-HA)抗炎功效的相关研究目前尚存在争议,为明确oligo-HA的抗炎作用机理,同时探索其潜在应用价值,该文对oligo-HA预处理与未处理的经脂多糖刺激的RAW264.7细胞进行蛋白质组学检测,经过数据非依赖采集技术获得数据并筛选,通过GO和KEGG数据库富集分析,对蛋白数据进行处理,并采用斑马鱼刺激模型验证oligo-HA的抗炎功效。结果表明,共鉴定出124个显著差异表达的蛋白,其中显著上调76个,显著下调48个,涉及的生物学过程包括T细胞受体信号通路,癌症相关信号通路,以及多种活性分子的生物合成等。0.5%与1%质量分数的oligo-HA对斑马鱼的处理显著性降低了中性粒细胞的数量,缓解了炎症作用。该文基于对蛋白质组学的分析,可以为oligo-HA在食品原料中的应用提供方向。

透明质酸寡聚糖的安全性研究

透明质酸(Hyaluronic acid,HA)又被称为玻尿酸,是一种广泛存在于动物组织细胞间质液中的天然粘性多糖,其主要单体结构为一个N-乙酰氨基葡萄糖与一个D-葡萄糖醛酸通过β-1,4-糖苷键连接而成的双糖,并由多个双糖结构连接,形成大分子多糖[1]。HA因其较强的保水能力,作为保湿功效成分被广泛应用于化妆品中。