僵蚕本草源流考证

目的对僵蚕的基原、产地、功效及规格修治的药用历史沿革进行本草考证。方法查阅历代本草文献,并结合现代的研究文献。结果查清了基原、产地、功效及规格修治的源流变迁。结论考证出僵蚕基原最初为"食桑者,四月头番蚕,病风自死",目前也可人工用白僵菌感染家蚕4~5龄幼虫制得;考证出除文字记载的河南颖川外,山东棣州也应为僵蚕重要历史产区,当前主产区为江浙、安徽、四川、广东等地;僵蚕不仅有平肝息风、化痰散结的功效,还有望用于抗血栓、降糖降脂及抗肿瘤;规格等级最初要求为"色白、条直、质硬",后又增加了"断面光亮"及其它显微特征分析。上述结论有利于后续借助现代分子药学及药理学技术,更好地研究僵蚕的临床应用及质量监控,使其更好的造福人类。

聚乙二醇沉淀蛋清蛋白质的规律及在卵白蛋白分离中的应用

研究3种pH值条件下4种聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)对卵白蛋白(ovalbumin,OVA)、卵转铁蛋白(ovotransferrin,OVT)与溶菌酶(lysozyme,LYZ)的沉淀效率,根据变化规律建立无需后续脱盐的OVA分离新工艺。结果表明:PEG 4000、6000、8000及10000均可有效沉淀OVA、OVT及LYZ,沉淀率受PEG质量分数及pH值影响。其中pH 7.5、PEG 4000质量分数12%时,OVA、OVT及LYZ的沉淀率相差最大,当pH值从7.5调至5.5时,3种蛋白质沉淀率的变化幅度相差也最大。由此建立如下分离工艺:首先向pH 7.5的蛋清液中加PEG 4000至质量分数为12%,离心收集上清液,即得纯度88.1%的OVA,提取率为95.1%;再将所得上清液pH值调至5.5,离心收集上清液,所得OVA纯度提高至99.7%,提取率为87.3%。该工艺简便易行,有利于OVA的大规模制备及在食品及医药领域的应用。

僵蚕药材商品规格等级标准研究

目的拟定科学合理的僵蚕商品规格等级标准,进行药理活性成分分析加以验证。方法收集荷花池、亳州、安国及玉林药材市场僵蚕样品,按《中国药典》所述"条直、粗壮"要求测定蚕体长度、重量及直径数据并进行统计分析,制定僵蚕商品规格等级标准。测定本标准划分下各等级僵蚕的草酸铵、氨基酸、蛋白质含量种类以验证标准合理性。结果市售僵蚕长度、重量、直径99%置信区间分别为3. 13,3. 93cm、0. 48,0. 79g、0. 52cm,0. 69cm,按长度30%及70%分界线(3. 8cm、3. 3cm),重量30%及70%分界线(0. 7g、0. 5g),直径30%及70%分界线(0. 6cm、0. 5cm),可将僵蚕划分为一等选货、二等选货及统货。验证实验表明,一等选货中草酸铵含量为4. 22%,高于二等选货(4. 1%)及统货(2. 7%)。一等选货中非极性氨基酸含量高于二等选货及统货,极性氨基酸含量低于二等选货及统货。Tricine-SDS-PAGE指纹图谱表明一等选货中35. 3KDa蛋白质含量高于二等选货及统货,19. 8KDa及以下分子量蛋白质含量低于二等选货及统货。结论市售僵蚕可依据其长度、重量、直径划分为一等选货、二等选货及统货三个等级,验证实验结果表明其活性成分含量、种类与上述等级划分相吻合。

聚乙二醇沉淀联用双水相萃取法纯化蛋清溶菌酶的研究

研究以聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)沉淀法联用PEG-硫酸铵双水相萃取体系纯化蛋清溶菌酶的工艺。结果表明,向预处理的鸡蛋清液中加PEG 4000至质量分数为16%时,可选择性沉淀除去蛋清中98.1%的杂蛋白,随后向上清液中加硫酸铵溶液至其质量分数为4.32%,可以构建PEG-硫酸铵双水相体系,分离上相即得高纯度溶菌酶。该法所得产物中96.34%为溶菌酶,其余为PEG 4000,不含有其它杂蛋白,溶菌酶总回收率达70.2%,比活为25 000 U/mg。该法简便易行,易于放大,每毫克精制溶菌酶中仅残留36.6μg PEG 4000,生物安全性较高。

化学-渗透压法温和破碎处理下大肠杆菌细胞胞内蛋白质的释放率

恰当的细胞破碎工艺是获取胞内蛋白质的必需环节,然而现有细胞破碎技术仍有较多不足。为了研究合适的细胞破碎方法,拟通过化学法与渗透压法的联用,建立化学-渗透压法温和高效破碎大肠杆菌细胞的新工艺。结果表明:(1)单用化学法处理大肠杆菌细胞,最高仅能释放37.3%的胞内蛋白质,而化学-渗透压法最高可以释放84.2%的胞内蛋白质;对渗透压处理环节进行优化后,胞内蛋白质释放率提高至93.1%及以上;(2)以优化的化学-渗透压法释放重组原动蛋白2β(PK2β)工程菌细胞的胞内蛋白质,其中70.5%~80.2%重组PK2β呈可溶性,而超声法处理的样品中不含有可溶性重组PK2β,表明化学-渗透压法不仅简便高效、成本低廉,而且有利于保留可溶性重组蛋白质,而超声破碎法会导致可溶性蛋白发生变性沉淀而增加蛋白质分离的难度。综合分析可知,化学-渗透压法在基因工程及生物工程中具有良好的应用前景。