基于核酸适配体的SYBR Green I qPCR法检测鳗弧菌(Vibrio anguillarum)

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)可感染鲈鱼、鳗鲡等多种水产养殖动物,是水产养殖中的重要病原菌,对其进行快速检测是病害防控的基础。利用鳗弧菌与其核酸适配体间较强的亲和特异性,通过核酸适配体来识别、结合鳗弧菌,然后以结合的核酸适配体为模板,进行SYBR Green I实时荧光定量PCR(qPCR)扩增,通过Ct值来定量检测鳗弧菌的浓度,从而建立了鳗弧菌的适配体-qPCR定量检测方法。从特异性、标准曲线、灵敏度、重复性和应用效果对该方法进行分析,表明该方法具有很强的特异性,能特异性地扩增鳗弧菌,且对哈维氏弧菌、溶藻弧菌、变形假单胞菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌均无扩增;在10^(3)~10^(11) CFU/L的检测范围内有较好的线性关系,可用于鳗弧菌的定量检测;同时,该方法有较高的灵敏度和稳定性,其最低检测限为10^(3) CFU/L,组内和组间变异系数分别小于0.17%和1.98%;最后采用该方法对鱼体组织样品进行了应用检测,证明了该方法具有较好的可行性和应用性,可用于水产品或食品中鳗弧菌的定量检测。

心肌超声造影定量分析辅助诊断左心房非活动性黏液瘤一例

1病例资料患者女性,51岁,因“发现血压升高6年余,反复头晕1年余”于2022年1月25日入院。患者6年前诊断为“高血压1级,低危组”,规律服用硝苯地平缓释片,20 mg/d,血压控制平稳。近1年来反复出现头晕,无头疼、恶心呕吐,无视物旋转,无肢体麻木等。既往无特殊。查体:血压135/80 mmHg,体温36.5℃,神志清楚,步行入院,双肺未闻及干湿啰音;心界不大,心率76次/min,心律齐,未闻及病理性杂音;腹软,无压痛,肝脾肋下未触及;双下肢无水肿,生理反射正常,病理反射未引出。头部CT检查未见异常。

5.8S rDNA-ITS区片段的序列分析在坛紫菜种质鉴定中的应用

为探讨DNA序列标记技术在坛紫菜种质鉴定中的应用,对10个野生坛紫菜种质材料的5.8S rDNA-ITS区进行PCR扩增和序列分析,结果发现扩增的片段长度在1208～1219bp之间,可以分为ITS1区,5.8S区和ITS2区3个部分,其中5.8S区片段的长度完全一致,均为160bp;ITS1区和ITS2区片段的长度也非常接近,只有几个碱基的差异。多重序列比对发现10个种质材料的ITS区(包括ITS1和ITS2)序列都存在一定差异,序列同源性在95.82%～99.73%之间,而5.8S区序列则完全一致,但与其它种紫菜的5.8S区序列有很大差异,序列同源性在79.7%～95.0%之间。由此认为5.8S rDNA-ITS区这种高度保守区和高变区交替排列的形式可以成为坛紫菜种质鉴定及系统进化分析的强有力工具。

菘蓝的4种有效成分及配伍组合抗腺病毒作用的研究

目的从菘蓝中提取出4种有效成分(编以代码为6号,7号,8号,9号),观察4种有效成分及其配伍抗腺病毒活性。方法通过观察细胞病变效应(CPE),噻唑兰(MTT)比色法检测细胞活性,以确定4种有效成分及其配伍抗腺病毒的作用。结果菘蓝的4种有效成分及其配伍组合对腺病毒生物合成都有抑制作用。随着药物浓度的增加,CPE逐渐减弱,病毒的抑制率增加。结论菘蓝的4种有效成分及其配伍组合能在体外通过抑制生物合成发挥抗腺病毒作用。

菘蓝的4种单体成分抗柯萨奇病毒作用的研究

目的 :了解菘蓝 4种有效单体 (6 ,7,8,9号 )抗柯萨奇病毒B组 3型 (CVB3 )的活性。方法 :通过观察细胞病变效应 (CPE) ,噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞活性 ,用半定量RT PCR检测不同药物浓度下病毒核酸含量 ,以确定有效单体抗CVB3 的作用。结果 :菘蓝的 4种单体成分对CVB3 生物合成均有抑制作用 ,且强于阳性对照药物病毒唑。表现在随着药物浓度的增加 ,CPE程度逐渐减弱 ,病毒核酸的含量逐渐下降。结论 :菘蓝的 4种单体能在体外通过抑制生物合成发挥抗CVB3 作用。

水产健康养殖中病害防控研究进展

水产健康养殖理论近年来被提出、认可、发展、完善和推广应用。水产健康养殖中,健康管理和病害控制技术是病害综合防治的关键技术。对国内外如何从采取合理的水质管理和调控技术来进行健康管理和如何采用病害的生态防治、药物防治和免疫防治进行病害的控制做一综述,为水产动物病害的综合防治提供思路。

坛紫菜耐高温品系选育及经济性状的初步研究

将人工杂交选育的坛紫菜新品系Z-26，Z-61，Z-81，Z-17的子3代（F3）与野生型对照组进行遗传性状的比较，旨在筛选耐高温品系。实验结果表明：（1）在高温29℃下培养40 d，人工选育的4个新品系丝状体均能正常生长发育，其中Z-26丝状体生长较快，Z-61在29℃下较易成熟，95%的营养藻丝发育成孢子囊枝，Z-17只有30%形成孢子囊枝；（2）Z-26和Z-61品系的叶状体在30℃下培养10 d，虽然藻体变白，但没有死亡，此时将其移至21℃下恢复培养3-4 d，藻体逐渐恢复为原有的色泽；（3）Z-81和Z-17的叶状体在29℃下培养7-10 d，虽然藻体发白但尚未死亡，移至21℃下培养基本可恢复正常，但在30℃下培养10 d，藻体腐烂不可恢复；（4）野生型对照组不耐高温，藻体在27℃下培养5 d就腐烂死亡，人工选育的4个品系耐受高温的幅度比野生型对照组高1-3℃；（5）4个品系叶状体在26-28℃温度下培养10 d后，其主要的藻胆蛋白和叶绿素a的含量与21℃培养下的含量差异不显著，说明短时间的高温培养并不影响其品质。

坛紫菜薄叶新品系选育及经济性状的比较

对坛紫菜人工杂交和选育的Z-26、Z-61和Z-81品系的F2、F3代的经济性状进行比较,旨在选育优良的薄叶新品系。实验结果表明,(1)Z-61新品系藻体薄,厚度约为26～32μm,培养期间经两次剪收,厚度增长不明显,日平均增厚0.32～0.35μm/d;Z-81藻体厚度为36～40μm,比Z-61厚38～50%,剪收后厚度增长明显,日平均增厚0.60～0.70μm/d,经两次剪收后藻体厚度可达52μm;Z-26新品系厚度为30～42μm,剪收后厚度日增长介于Z-61和Z-81新品系之间,为0.37～0.55μm/d;(2)Z-61的F3代在低氮、磷培育液培养8d,藻体虽然发黄但未死亡,移至含有氮、磷的正常培养液中培养2～3d,色泽和生长均可恢复正常;Z-81F3代和Z-26F3代在低氮、磷下生长较Z-61F3代慢,恢复时间需要3～5d;(3)Z-61F2代第1次剪收时的藻胆蛋白含量较Z-26、Z-81品系高30.2%～34.4%,叶绿素a含量比Z-81高13.8%～44.7%。以上研究结果可为选育薄叶型坛紫菜,提高坛紫菜的质量和经济效益奠定基础。

坛紫菜氨基酸提取工艺影响条件的优化与分析

以坛紫菜(Porphyra haitanensis)为实验材料,采用盐酸水解法和浸提法,以日立L-8900型高速全自动氨基酸分析仪为测定仪器,分别研究了坛紫菜总氨基酸(TAA)和游离氨基酸(FAA)在提取过程中各条件的不同水平对提取结果的影响.实验结果表明:(1)利用正交设计L9(34)对影响TAA提取的4个条件(藻体质量、稀释倍数、干燥温度、空白值)在3个水平上进行优化实验,藻体质量、稀释倍数对测定结果影响显著,干燥温度影响不显著;通过实验筛选出各条件的最佳水平为:藻体质量为0.050 0g,稀释3倍,干燥温度为60℃.(2)利用正交设计L16(45)对影响FAA测定的5个条件(藻体质量、提取液、提取温度、提取时间、空白值)在4个水平上进行优化实验,结果表明藻体质量、提取液、提取温度、提取时间的不同水平对测定结果均有显著影响,其中藻体质量对结果的影响最大;通过实验筛选出各条件的最佳水平为:藻体质量为0.010 0 g,提取液为去离子水,提取温度为60℃,提取时间为4 h.

坛紫菜优质新品系(Q-1)主要经济性状的研究

对杂交选育的坛紫菜优质品系(Q-1)和人工养殖的坛紫菜(对照组)进行叶状体生长、藻体厚度、4种色素含量、粗蛋白、氨基酸含量的测定以及丝状体的生长发育等实验。结果表明,(1)(Q-1)F2、F3叶状体生长迅速,不易成熟;3～4cm的F3叶状体经过10～15d的培养,平均日增长量高达(8.33±1.01)cm,分别为父、母本的1.4和2.7倍;(2)F3叶状体在第1次剪收时藻体厚度为(21.0±1.5)μm,仅为对照组厚度的52%,第2次剪收时为(25.6±1.9)μm,为对照组的56%;F2剪收1次后藻体的长度、宽度和鲜重平均日增长量分别为对照组的2.1、2.4和2.2倍;(3)F2叶状体的总藻胆蛋白含量为(109.52±0.94)mg/g,为对照组的1.6倍;粗蛋白的含量高达(41.71±.11)g/100g,比对照组高27%;F3叶状体第1次剪收时叶绿素a的含量高达(7.66±0.19)mg/g,比对照组高13%;(4)F3叶状体第1次剪收时呈味氨基酸中鲜味氨基酸与甜味氨基酸的总量为2.49g/100g,为对照组的1.8倍;必需氨基酸含量为15.66g/100g,比对照组高13%;(5)(Q-1)和对照组的丝状体在29℃分别培养30～40d时,90%的营养藻丝发育成孢子囊枝。

3项指标联合检测在2型糖尿病早期肾损害的诊断价值

目的探讨联合检测同型半胱氨酸(Hcy)、血清胱抑素C(Cys C)和尿微量清蛋白(UmAlb)与尿肌酐(UCr)比值在2型糖尿病(T2DM)肾损害早期诊断和治疗意义。方法依据24h尿微量白蛋白的定量测结果将182例T2DM患者分为3组:A组为糖尿病无肾病组(UmAlb<30mg/24h)60例,B组为早期糖尿病肾病组(EDN)(UmAlb≧30mg～300mg/24h)62例,C组为糖尿病明显肾病组(ADN)(UmAlb>300mg/24h)60例。对这3组患者进行血清Cys C、Hcy、UmAlb/UCr、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)含量检测,并与50例健康对照组进行比较。结果 B组CysC、Hcy、UmAlb/UCr水平分别为(1.95±0.52)mg/L、(17.18±2.57)μmol/L、(142.5±31.47)mg/g,C组分别为(2.43±0.65)mg/L、(19.28±3.66)μmol/L、(387.2±61.48)mg/g,均高于健康对照组和A组,差异有统计学意义(P<0.05);C组血清Cys C、血清Hcy、UmAlb/UCr水平高于B组,差异有统计学意义(P<0.05);以单一指标阳性作为诊断标准,血清Cys C、血清Hcy、UmAlb/UCr对2型糖尿病肾损害的阳性率分别为85.2%、80.3%、86.9%,3项联合检测阳性率达96.7%,明显高于单项检测(P<0.05)。结论联合检测血清Hcy、血清Cys C、UmAlb/UCr对2型糖尿病肾病早期诊断及病情监测具有重要价值。

大黄茶抗柯萨奇病毒B_3(CVB_3)的实验研究

目的:观察大黄茶抗CVB3的作用。方法:通过活细胞计数评价了大黄茶对Hep一2细胞的细胞毒作用;通过观察病毒感染后的细胞病变效应计算病毒抑制率,并且用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测药物作用后细胞冻融液中的病毒核酸(CVB3-RNA),评价了大黄茶在细胞培养中的抗CVB3作用。结果大黄茶对Hep-2细胞的半数细胞毒性浓度在0.4mg/ml以上,对CVB3的半数抑制浓度在90μg/ml以内。结论:大黄茶安全性较高并能有效的抑制柯萨奇病毒B3在Hep-2细胞中的增殖。

50味中药及其复方与抗生素对河流弧菌的体外抑菌作用

用牛津杯法选择大黄、黄柏、黄连等50种单味中药进行河流弧菌、金黄色葡萄球菌体外抑菌试验,并以抗菌活性较好的药物组成二联、三联复方,药物质量浓度分别为60和240 mg·mL^-1,进行中药复方抗菌活性研究,同时用抗生素进行河流弧菌药敏试验。目的是筛选出对河流弧菌敏感的中草药、抗生素及其复方。结果表明,黄连、诃子等单方对河流弧菌抑菌作用明显,为极敏感;在60 mg·mL^-1低药物浓度时,黄柏、黄连组成的复方对河流弧菌抑菌作用为极敏感;在240 mg·mL^-1药物浓度时,黄柏、黄连等组成的9个复方中药对河流弧菌抑菌作用属极敏感,黄连、板蓝根、黄柏等4个复方中药对河流弧菌的抑菌作用明显,为极敏感。河流弧菌对恩诺沙星、盐酸多西环素、氟苯尼考、土霉素及甲氧苄啶/磺胺甲噁唑5种药物高度敏感。部分中药对河流弧菌抑制作用不明显,黄连、板蓝根、黄柏等4个三联复方中药药效最强。可组成多种三联复方中药或中西药联用复方,均有良好的抑制作用。

穿心莲提取物体外抗呼吸道合胞病毒作用的研究

目的:了解穿心莲提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)的体外抑制作用。方法:通过光镜观察不同药物浓度下RSV对Hep2的致病作用(CPE),四甲基偶氮唑盐(MTT)比色检测穿心莲提取物对RSV的抑制和对RSV感染Hep2细胞的保护作用。结果:穿心莲提取物对RSV无直接灭活作用,亦不能阻止RSV的吸附,各药物浓度均出现典型的CPE;穿心莲提取物有抑制RSV生物合成的作用,其半数抑制浓度(IC50)是1.52μg/ml,治疗指数为36,且随着药物浓度的增加,CPE特征明显逐渐减弱,病毒滴度逐渐降低,而病毒抑制率则明显增高。结论:穿心莲提取物在体外可能是通过抑制生物合成来发挥抗RSV作用。

坛紫菜新品系(Z-17)F_2、F_3的经济性状的研究

以人工杂交选育的坛紫菜新品系（Z-17）的F2、F3和对照组（YSX-3）的叶状体及丝状体为材料，进行高温、低氮磷实验，测定藻体的生长、4种色素含量及不同剪收次数后藻体厚度的变化等经济性状．结果表明：（1）在高温29℃下，F2和F3叶状体耐高温时间长，腐烂程度轻，其平均增长率分别为11．70％、11．55％；30℃时藻体开始腐烂；（2）在低氮磷条件下，F2适应性较强，F3次之．F2培养到第15d颜色褪为浅黄色，移至含氮磷的培养液中培养3d后部分藻体颜色恢复，细胞正常；F3在培养到第12d颜色褪为黄绿色，移至正常培养液3d可恢复正常；（3）新品系F2和F3剪收2次后，藻体厚度增长不明显，实际厚度为26～31μm；（4）4种色素蛋白含量中，F2总藻胆蛋白含量最高为89．12mg／g，叶绿素含量高达6．29mg／g；（5）F2与F3的吸收光谱值相近；（6）在25、27、29℃培养温度下，对照组的丝状体生长发育较好，但新品系丝状体成熟晚，较耐高温．

建立新的道德教育的措施

依据道德教育实效性差的现状,深入到德育内部,从教育与心理学相结合的角度入手,分析传统道德教育忽视对人的内在需要,造成道德教育中人的主体地位的缺失这一当前道德教育中突出重要的问题。提出社会需要与个人需要辩证统一的观点,以及构建新的道德教育的措施。

变形假单胞菌灭活疫苗研究

选取甲醛、苯酚、和氯仿三种化学灭活剂在不同的条件下对变形假单胞菌进行灭活处理,确定了0.2%甲醛溶液28℃处理12 h;0.5%苯酚溶液28℃处理24 h;3.5%氯仿溶液28℃处理12 h的灭活条件。分别用三种灭活剂制备的疫苗免疫斜带石斑,测定斜带石斑的血清抗体效价和感染后的免疫保护率。结果显示:接种甲醛灭活疫苗组的血清抗体效价最高,接种苯酚灭活疫苗组的抗体效价次之,接种氯仿灭活疫苗组的抗体效价最低;三种灭活疫苗的免疫保护率分别为甲醛灭活疫苗46.67%,苯酚灭活疫苗30%,氯仿灭活疫苗20%。选择甲醛灭活疫苗与弗氏佐剂、白油佐剂、氢氧化铝、206佐剂、蜂胶等5种佐剂分别配伍后注射免疫斜带石斑,结果显示:添加佐剂组斜带石斑血清抗体效价全都大幅高于未添加佐剂组,其中白油的效果最好;添加佐剂组免疫保护率也全都大幅高于未添加佐剂组,也是白油佐剂的效果最好,免疫保护率高达91.67%,其余各组分别为氢氧化铝83.33%、206佐剂80.56%、弗氏佐剂72.22%、蜂胶66.67%。研究表明研制出了具有良好免疫保护效果的变形假单胞菌灭活疫苗,为进一步的中试试验奠定了基础。

职业学校“入口”和“出口”问题分析

职业学校的"入口"和"出口"问题,即招生和就业问题是当前职业教育面临的一个严峻的普通问题,要把好职业学校的"入口"和"出口"关,职业教育才能得到进一步发展。只有抓好这两个环节的基地建设,逐步提高人才培养质量,扩大市场占有率,从而在激烈的市场竞争中占据有利位置。

教育信息化与初中语文的深度融合

随着信息技术的运用,我国教育行业也逐渐的信息化,主要为了提高教学合理性。但是教育信息化需要信息设备的支持,才能为学生营造良好的学习环境。基于此,本文首先简要分析了教育信息化在初中语文教学当中遇到的问题,随后从三个方面分析了教育信息化与语文教学深度融合的具体措施,以此来供相关人士交流参考。

如何让习作在学生心中“热”起来

作文教学向来为教师所难,用教师的话说就是总也'热'不起来,难就难在如何指导,如何有效地评改上。几年的作文教学实践中,我曾在以下几方面进行过尝试。实践说明,在教学中切实可行,较为有效,愿与大家共享。一、教师与学生一道习作,多做'下水文'在教师枯燥的布置讲解某次习作内容与要求时,学生似乎在麻木地等待回家后如何应对、抄袭了。其实原因很简单,理论上的东西学生似乎已经明确了。