利福平耐药与敏感肺结核患者痰液样本微生物菌群多样性对比分析

目的:利用16S高通量测序技术,探索利福平耐药与利福平敏感肺结核患者呼吸道菌群的差异。方法:收集北京市疾病预防控制中心(70份)和湖南省胸科医院(10份)确诊的肺结核患者的痰液(共80份)进行前瞻性研究,通过痰液样本GeneXpert MTB/RIF检测、靶向rpoB高通量测序(tNGS测序)和利福平药物敏感性试验,将80例患者分为利福平耐药组(RFP-R组,41例;利福平耐药决定区突变)和利福平敏感组(RFP-S组,39例;利福平耐药决定区无突变)。对痰液微生物16S V4区域进行高通量测序,测序结果进行生物信息学分析及统计分析。结果:RFP-R组和RFP-S组共获得41950224个原始16S rRNA序列。RFP-R组的平均操作分类单元(operational taxonomic units,OTU)为344个,RFP-S组的平均OTU为342个。厚壁菌门(47.72%)、拟杆菌门(22.36%)、变形菌门(14.67%)、放线菌门(7.57%)、梭杆菌门(6.46%)是肺结核患者痰液中检出的主要细菌门,占微生物群落的98.78%。与RFP-S组相比,RFP-R组梭杆菌门(7.531%vs.5.167%;t=2.218,P=0.030)和螺旋体门(0.596%vs.0.246%;t=2.128,P=0.038)相对丰度显著增加。与RFP-S组相比,RFP-R组颤杆菌克属(0.690%vs.0.326%;t=3.112,P=0.003)、产线菌属(0.135%vs.0.030%;t=2.171,P=0.035)、Allisonella菌属(0.046%vs.0.006%;t=3.237,P=0.002)、假单胞菌属(0.205%vs.0.054%;t=2.040,P=0.046)和密螺旋体属(0.601%vs.0.242%;t=2.155,P=0.036)相对丰度显著增加;二氧化碳噬纤维菌属(0.351%vs.0.772%;t=―2.044,P=0.046)和Pauljensenia菌属(2.314%vs.3.706%;t=―2.660,P=0.010)相对丰度显著减少。结论:利福平耐药与敏感结核分枝杆菌感染不影响肺结核患者呼吸道菌群的整体结构,但利福平耐药与敏感患者在2个门(梭杆菌门、螺旋体门)和7个属(颤杆菌克属、产线菌属、Allisonella菌属、假单胞菌属、密螺旋体属、二氧化碳噬纤维菌属、Pauljensenia菌属)的丰度中存在差异,其中二氧化碳噬纤维菌属和Pauljensenia菌属在利福平敏感患者中丰度较高,其余在利福平耐药患者中丰度较高。

利福平耐药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物表型耐药与其基因突变的一致性研究

目的:研究利福平耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)耐药基因突变特征与FQs最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的关系。方法:选取2016—2021年北京市结核病防治机构及定点医院收治的利福平耐药结核病(rifampicin resistant tuberculosis,RR-TB)患者分离培养阳性菌株进行微孔板法药物敏感性检测,总结RR-TB患者菌株对左氧氟沙星(levofloxacin,Lfx)和莫西沙星(moxifloxacin,Mfx)的MIC值;同时进行一代测序。分析FQs耐药相关基因gyrA和gyrB突变特征与FQs MIC之间的关系;以表型药物敏感性试验(phenotypic drug susceptibility testing,pDST)结果为参照标准,评价基因型药物敏感性试验(genotypic drug susceptibility testing,gDST)对FQs耐药的检测效能;探讨RR-MTB对FQs表型耐药与基因型耐药差异的原因。结果:303株RR-TB患者菌株中,FQs pDST耐药率为27.7%(84/303),gyrA基因突变检出率为25.1%(76/303),未检测到gyrB基因突变。以pDST结果为参照标准,gDST检测RR-MTB的FQs耐药性的敏感度和特异度分别为84.5%(71/84;95%CI:74.6.1%~91.2%)和97.7%(214/219;95%CI:94.5%~99.1%)。两种方法结果不一致的菌株有25株,不一致率为8.3%(25/303)。FQs耐药菌株的MIC主要为2μg/ml,最常见的突变位点发生在第94位点(53.9%,41/76),gyrA基因在第88和94位点突变与pDST耐药完全一致,而第90和91位点突变的pDST耐药一致率分别为95.8%(23/24)和3/5。第88位点的突变与Lfx pDST耐药相关,与Mfx pDST高浓度耐药相关;第90位点的突变以丙氨酸转变为缬氨酸为主(92.3%,24/26),该突变发生的Lfx和Mfx最低MIC为临界浓度(1μg/ml和0.25μg/ml)。第94位点天冬氨酸突变为天冬酰胺均为Lfx和Mfx高浓度耐药(1/1),该位点天冬氨酸突变为酪氨酸与Lfx耐药(1/1)相关,与Mfx高浓度耐药相关(1/1)。结论:北京地区RR-MTB的FQs耐药的主要机制是gyrA基因突变,不同gyrA基因突变提示FQs耐药水平存在差异。FQs pDST和gDST检测RR-MTB的结果高度一致,可及早应用gDST检测RR-TB患者的FQs的耐药性,以指导临床制定合理治疗方案。

17种抗生素对北京地区快速生长分枝杆菌体外抑菌效果分析

目的:分析17种抗生素对北京地区快速生长分枝杆菌(rapidly growing mycobacteria,RGM)临床分离株的抑菌效果,为RGM引起的非结核分枝杆菌病的临床治疗提供可靠的理论依据。方法:收集北京市疾病预防控制中心结核病实验室2016年1月至2020年12月五年间分离保存的130株非结核分枝杆菌菌株,对其进行菌种鉴定。对鉴定出的RGM临床分离株和相应标准株复苏后,采用微量肉汤稀释法进行17种药物(阿米卡星、环丙沙星、磺胺甲噁唑-甲氧苄啶、克拉霉素、利奈唑胺、莫西沙星、多西环素、米诺环素、头孢西丁、替加环素、妥布霉素、亚胺培南、美罗培南、阿莫西林/克拉维酸、贝达喹啉、德拉马尼和氯法齐明)的敏感性试验,记录其最低抑菌浓度(MIC)及抑制50%或90%受试菌的MIC值(MIC90和MIC50)。结果:经菌种鉴定且复苏成功的RGM为37株,包括19株脓肿分枝杆菌、17株偶发分枝杆菌和1株龟分枝杆菌。已明确耐药折点的14种抗生素中,所检测的3种RGM临床分离株对替加环素均敏感,龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌临床分离株对克拉霉素均敏感,脓肿分枝杆菌临床分离株对利奈唑胺敏感。另外,偶发分枝杆菌临床分离株对阿米卡星、环丙沙星、磺胺甲噁唑-甲氧苄啶、莫西沙星对均敏感。脓肿分枝杆菌临床分离株对阿米卡星的敏感率为73.7%(14/19),偶发分枝杆菌临床分离株对利奈唑胺、美罗培南敏感率分别为82.4%(14/17)、88.2%(15/17)。所检测的19株脓肿分枝杆菌对多西环素、阿莫西林/克拉维酸均耐药,偶发分枝杆菌临床分离株对妥布霉素均耐药。此外,贝达喹啉和氯法齐明对RGM临床分离株的MIC90均小于药敏板最低检测限值,而德拉马尼的MIC90均高于药敏板最大检测限值。结论:替加环素、阿米卡星、利奈唑胺、贝达喹啉和氯法齐明对RGM均具有较好的体外抑菌活性,而多西环素、阿莫西林/克拉维酸、德拉马尼几乎没有体外抑菌活性。非结核分枝杆菌种间耐药谱差异较大,建议用药前进行菌种鉴定和药物敏感性试验,以选择合适的抗菌药物。

四种方法联合检测对病原学阴性肺结核的诊断价值

目的:分析结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核抗体(antibody,TB-Ab)、血红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、超敏C-反应蛋白(high-sensitivity C-reaction protein,hs-CRP)联合检测在病原学阴性肺结核诊断中的价值。方法:收集2020年7月至2022年7月北京市疾病预防控制中心结核病门诊收治的初治且病原学检查阴性的肺结核患者216例(病原学阴性肺结核组),以及同期收治的病原学阳性的初治肺结核患者147例(病原学阳性肺结核组)和其他肺部疾病患者455例(其他肺部疾病组)。均行T-SPOT.TB、TB-Ab、ESR、CRP检测,以临床诊断为标准,分析四种方法单独及联合检测的诊断效能。结果:T-SPOT.TB在病原学阴性肺结核组中检测阳性率为82.4%(178/216),与病原学阳性肺结核组阳性率[87.8%(129/147)]相比较,差异无统计学意义(χ2=1.917,P=0.166),与其他肺部疾病组阳性率28.6%(130/455)相比较差异有统计学意义(χ2=160.746,P=0.000)。T-SPOT.TB对病原学阴性肺结核诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为82.4%(178/216)、71.4%(325/455)、57.8%(178/308)、89.5%(325/363)、75.0%(503/671);四种方法联合诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为91.7%(198/216)、53.4%(243/455)、48.3%(198/410)、93.1%(243/261)、65.7%(441/671)。T-SPOT.TB、TB-Ab、ESR、hs-CRP检测ROC曲线下面积(AUC)分别为0.764、0.600、0.529、0.515,联合检测的AUC为0.804。结论:T-SPOT.TB检测病原学阴性肺结核的敏感度、阴性预测值及准确度较好,四种方法联合检测的敏感度、阴性预测值和AUC较高,联合检测可提高病原学阴性肺结核的诊断效能。

初治病原学阳性肺结核患者细菌学与免疫学指标动态变化分析

目的分析初治病原学阳性且利福平敏感肺结核患者不同阶段T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核抗体与痰涂片+培养检测动态变化及临床意义。方法收集2020年8月至2021年5月北京结核病控制研究所门诊收治的肺结核患者34例,分别于治疗前、治疗2月和6月行以上方法检测。结果34例患者,疗前痰涂片+培养、T-SPOT.TB、结核抗体阳性检出率分别为85.29%、100%、76.47%;治疗2月阴转率分别为89.66%、5.88%、11.54%;治疗6月阴转率分别为100%、23.53%、26.92%。治疗前、治疗2月和6月之间T-SPOT.TB试验结核特异性抗原与植物血凝素(TBAg/PHA)比值差异均有统计学意义(P值均<0.05),治疗前与治疗2月或6月痰涂片+培养差异有统计学意义(P值均<0.05),结核抗体差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论在有效抗结核治疗6月后,肺结核患者的T-SPOT.TB试验TBAg/PHA比值显著降低;结核抗体不能很好地反映疗效情况;痰涂片+培养亦能够很好地反映疗效。

荧光PCR探针熔解曲线技术检测痰标本结核分枝杆菌利福平耐药性的研究

目的:评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescent polymerase chain reaction probe melting curve,MeltPro)技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的临床应用价值。方法:收集2021年5月至2022年5月北京市疾病预防控制中心结核病门诊收治的GeneXpert MTB/RIF检测阳性的初治肺结核患者的痰标本,对每份标本同时进行涂片镜检、分枝杆菌分离培养、MeltPro技术利福平耐药性检测。分析痰标本荷菌量对MeltPro技术耐药性检测结果的影响;培养阳性菌株行利福平比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”),比较比例法药敏试验、GeneXpert MTB/RIF和MeltPro技术检测利福平耐药率的差异;并以培养阳性菌株利福平比例法药敏试验结果为参考标准,评价MeltPro技术耐药性检测的效能。结果:研究共收集结核分枝杆菌阳性合格痰标本158份(例),经分枝杆菌分离培养获得阳性菌株130株。MeltPro技术检测痰标本结核分枝杆菌利福平耐药的成功率为79.1%(125/158),且随着痰涂片结果等级的升高,检测成功率由“阴性”的59.3%(32/54)上升至“+++”标本的100.0%(18/18);同时,随着GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌等级的升高,检测成功率也由“极低”的64.5%(20/31)上升至“高”的92.9%(26/28),各等级间差异均有统计学意义(H=22.271,P=0.001;H=15.637,P=0.001)。MeltPro技术的利福平耐药检出率为17.6%(22/125),GeneXpert MTB/RIF方法的利福平耐药检出率为12.7%(20/158),比例法药敏试验的利福平耐药检出率为13.1%(17/130),三者比较差异无统计学意义(χ^(2)=1.537,P=0.464)。以培养阳性菌株比例法药敏试验结果为参考标准,MeltPro技术和GeneXpert MTB/RIF方法检测利福平耐药的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别为100.0%(17/17)、94.6%(88/93)、77.3%(17/22)、100.0%(88/88)、0.845和100.0%(17/17)、97.3%(110/113)、85.0%(17/20)、100.0%(110/110)、0.906。结论:MeltPro技术检测肺结核患者痰标本结核分枝杆菌利福平耐药性的敏感度和特异度均较高,可快速准确筛查患者利福平耐药情况,但在基层实验室推广应用时需注意痰标本的质量。

荧光PCR探针熔解曲线技术检测痰标本中结核分枝杆菌异烟肼耐药性的研究

目的评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescence polymerase chain reaction probe melting curve,Melt Pro)技术检测痰标本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)异烟肼耐药性的应用价值。方法收集2021年5月至2022年5月在北京市疾病预防控制中心结核病门诊Gene Xpert MTB/RIF检测为MTB的(简称MTB阳性)患者痰标本,对每份标本同时进行涂片镜检、分枝杆菌分离培养、Melt Pro技术和线性探针技术(Geno Type MTBDRplus,简称Hain试验)异烟肼耐药检测。分析Melt Pro技术检测痰标本MTB异烟肼的耐药性,痰标本荷菌量对检测结果的影响;以培养阳性菌株异烟肼比例法药敏结果为参考标准,评价Melt Pro技术耐药检测效能。结果收集MTB阳性的合格痰标本157例,经分枝杆菌分离培养获得阳性菌株130株。Melt Pro技术痰标本MTB异烟肼耐药性检测成功率为84.1%(132/157)。不同痰涂片结果等级间,Melt Pro技术检测异烟肼耐药成功的比例差异存在有统计学意义(H=24.169,P=0.000),随痰涂片结果等级的升高,检测成功率由“阴性”标本的64.8%(35/54)升高到“3+”“4+”标本的100%(17/17,6/6);该比例也随Gene Xpert MTB/RIF检测MTB等级的升高而升高,由“极低”标本的54.8%(17/31),到“高”标本的96.4%(27/28),各等级间差异有统计学意义(H=27.763,P=0.000)。Melt Pro技术、Hain试验和药敏试验的异烟肼耐药检出率分别为22.0%(29/132),15.3%(19/124),和14.6%(19/130),三者差异无统计学意义(χ^(2)=2.997,P=0.223)。以培养阳性菌株比例法药敏试验结果为参考标准,Melt Pro技术检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:84.6%(11/13)、91.2%(93/102)、55%(11/20)、97.9%(93/95),Kappa值为0.614;Hain试验检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:55.6%(10/18)、92.3%(84/91)、58.8%(10/17)、91.3%(84/92),Kappa值为0.490。结论Melt Pro技术可直接检测痰标本MTB耐药性,快速准确筛查患者耐药情况,缩短耐药筛查时间。

1156株结核分枝杆菌临床分离株耐药情况分析

目的分析北京市结核病防治机构(简称"结防机构")管理的肺结核患者结核分枝杆菌临床分离株耐药情况,为北京市结核病防治工作提供依据。方法对2019年1—12月北京市各结防机构收集的1241株分枝杆菌培养阳性临床分离株采用对硝基苯甲酸/噻吩-2-羧酸肼(PNB/TCH)生长试验法进行初步菌种鉴定,使用比例法进行8种抗结核药物的药物敏感性试验,药品包括异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(Sm)、乙胺丁醇(EMB)、左氧氟沙星(Lfx)、阿米卡星(Am)、卷曲霉素(Cm)、对氨基水杨酸(PAS)。结果 1241株分枝杆菌培养阳性临床分离株中,结核分枝杆菌(MTB)1156株,占93.15%,非结核分枝杆菌(NTM)85株,占6.85%。1156株MTB分离株总耐药率为24.83%(287/1156),RFP耐药率为7.27%(84/1156),多耐药率为6.75%(78/1156),耐多药率为5.28%(61/1156),准广泛耐药率为1.73%(20/1156),广泛耐药率为0.17%(2/1156)。8种抗结核药物的耐药顺位依次为Sm(17.91%,207/1156)>INH(11.76%,136/1156)>RFP(7.27%,84/1156)>EMB(4.84%,56/1156)>Lfx(4.76%,55/1156)>PAS(2.16%,25/1156)>Cm(1.47%,17/1156)>Am(0.69%,8/1156)。耐药谱共有43种,包括单药耐药7种、耐多药6种、准广泛耐药8种、广泛耐药1种、多耐药21种。结论北京市结防机构管理的结核病患者临床分离株耐药谱呈现复杂性和多样性,应重视结核病患者的耐药筛查,加强耐药结核病患者的治疗管理。

免疫学检测联合痰涂片和痰培养检测在活动性肺结核临床诊断中的价值

目的分析结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核抗体、痰涂片与痰培养联合检测在活动性肺结核诊断中的临床意义。方法收集2014年1月至2019年12月北京结核病控制研究所门诊收治的疑似活动性肺结核患者715例,最终诊断为活动性肺结核患者412例(肺结核组),非结核病患者303例(非结核组)。715例患者均行T-SPOT.TB检测、结核抗体检测及痰涂片、痰培养检查;以临床诊断结果为标准,分析4种方法单独及联合检测的临床意义。结果肺结核组患者中,T-SPOT.TB阳性检出率为83.7%(345/412);非结核组患者中,T-SPOT.TB阳性检出率为20.8%(63/303);两组阳性检出率差异有统计学意义(χ^(2)=2.823,P=0.000)。T-SPOT.TB对活动性肺结核检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为83.7%(345/412)、79.2%(240/303)、84.6%(345/408)、78.2%(240/307)、81.8%[(345+240)/715];4种方法联合诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为93.7%(386/412)、50.8%(154/303)、72.1%(386/535)、85.6%(154/180)、75.5%[(386+154)/715]。T-SPOT.TB检测、结核抗体检测及痰涂片、痰培养检查的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.815、0.575、0.593、0.715,四项联合检测的AUC为0.894。结论 T-SPOT.TB检测的敏感度、阴性预测值较好,T-SPOT.TB检测联合结核抗体、痰涂片和痰培养检测的敏感度、AUC较高,联合检测可提高对肺结核的诊断效能。

881例疑似耐多药肺结核患者的耐药性分析

目的分析北京市结核病防治机构（简称“结防机构”）和结核病定点医院疑似耐多药肺结核患者的耐药状况，为耐多药肺结核的临床诊断、治疗和防控工作提供参考。方法采用回顾性调查方法，对2014年1月至2016年12月北京市14家结核病防治机构和6家定点医院收治的881例疑似耐多药肺结核患者痰培养阳性的临床分离株进行初步菌种鉴定和药物敏感性试验（简称“药敏试验”）（INH、RFP、Sm、EMB、Lfx、Am、Cm、Pro、PAS），耐药患者对各种抗结核药物的耐药情况采用SPSS17．0统计软件进行统计分析；并分析、归纳北京市3年间疑似耐多药肺结核患者的耐药情况。结果881例疑似耐多药肺结核患者菌株中，分离出结核分枝杆菌复合群占88．6％（781／881），非结核分枝杆菌群占11．4％（100／881）。结核分枝杆菌复合群临床分离株的总耐药率为33．3％（260／781），耐多药率为17．2％（134／781）；耐药菌株药敏试验显示对4种一线抗结核药物（INH、RFP、Sm、EMB）的高耐药百分比（〉67．0％）分别为69．0％（127／184）、57．1％（92／161）、60．5％（107／177）、31．7％（19／60）。结论对北京市疑似耐多药肺结核患者进行药敏试验非常必要，北京市面临的耐药结核病疫情仍十分严峻。

564例肺结核患者痰标本质量对检测结果的影响

目的 分析初诊肺结核患者留取痰标本的质量对于细菌学检查结果的影响,为临床诊断及指导留取高质量痰标本提供参考。方法 采用回顾性调查方法,对2016年1月至2017年12月就诊于北京结核病控制研究所的564例初诊肺结核患者的痰标本进行抗酸杆菌涂片镜检和分枝杆菌培养检查（包括固体培养和液体培养）,不同性状痰标本的阳性率、阳性分级情况及不同培养方法的阳性率均采用SPSS 17.0软件进行统计学分析,计数资料的比较采用χ 2检验,以P〈0.05为差异有统计学意义。 结果 每例初诊肺结核患者留取3份痰标本进行抗酸杆菌涂片检查,并选取2份性状较好的痰标本同时进行分枝杆菌培养检查,564例患者共留取痰标本1692份,标本合格率67.3%（1138/1692）;确诊242例,占42.9%（242/564）;3份留取的痰标本均合格者311例,占55.1%（311/564）。涂片、固体培养、液体培养检测在合格痰标本中的阳性率分别为21.1%（240/1138）、37.4%（258/690）和68.0%（68/100）;在不合格痰标本中的阳性率分别为3.4%（19/554）、16.2%（49/302）和27.8%（10/36）;在合格与不合格痰标本中各类检测技术阳性率比较,差异均有统计学意义（χ 2值分别为89.64、44.04、17.51,P值均〈0.001）。 结论 初诊肺结核患者痰标本合格率较低,合格痰标本的分枝杆菌检出率明显高于不合格痰标本,故重视并提高留取痰标本的质量显得十分重要。

北京市结防机构结核病患者耐药情况对比分析

目的分析2009年2019年北京市结防机构结核病患者临床分离株耐药情况变化。方法对2009年2019年北京市结防机构分枝杆菌培养阳性临床分离株进行初步菌种鉴定及药物敏感性试验。结果2009年1554株分枝杆菌阳性分离株中,结核分枝杆菌(MTB)1506株(96.9%),非结核分枝杆菌(NTM)48株(3.1%)。2019年1241株分枝杆菌阳性分离株中,MTB1156株(93.2%),NTM85株(6.8%)。2019年NTM分离率明显高于2009年,差异有统计学意义(χ^(2)=21.530,P<0.001)。2019年MTB感染者中60岁以上患者,外地户籍患者,初治患者比例较2009年有所增加,差异有统计学意义(χ^(2)=36.952、7.054、19.719,P值均<0.05)。2019年异烟肼、利福平、乙胺丁醇、卷曲霉素耐药率均低于2009年,差异均有统计学意义(χ^(2)=7.526、4.165、45.212、10.178,P值均<0.05)。2019年总耐药率为24.8%、耐多药率为5.3%,较2009年的31.6%、7.6%均有所下降,差异有统计学意义(χ^(2)=14.702、5.598,P值均<0.05)。结论北京市总耐药率与耐多药率均有下降,今后应在NTM与MTB的鉴别,流动人口防控,老年结核病防治,疗前药物敏感性检测等方面加以重视。

白细胞介素6与结核分枝杆菌感染和诊断的研究进展

结核病仍然困扰着人类健康,我国是22个结核病高负担国家之一,早期正确的诊断以及及时有效的治疗对于控制我国结核病流行是必不可少的。传统的结核病实验室诊断方法都存在着许多不足,新的诊断方法由于没有良好的生物标志物而受到了限制。国内外许多研究表明,白细胞介素6(IL-6)在结核病中具有潜在的诊断价值。在此就IL-6与结核分枝杆菌感染和诊断的研究进展做一综述。

RANTES和Eotaxin与结核病

结核病仍然是困扰人类健康的常见传染病之一。我国是22个结核病高负担国家之一,早期准确的诊断以及及时有效的治疗对于控制结核病流行是必不可少的。结核病传统的实验室诊断方法存在许多不足之处,新的诊断方法由于没有良好的生物标志物而受到了限制。随着国内外对调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子(RANTES)及嗜酸细胞活化趋化因子(Eotaxin)研究的日益增多,越来越多的研究显示,RANTES及Eotaxin对于结核病具有潜在的诊断和监测价值。

四种结核分枝杆菌检测方法临床诊断效能的评价

目的评估痰涂片抗酸染色镜检(简称“涂片法”)、L-J培养基(Lowenstein-Jenden medium)固体培养(简称“L-J法”)、BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960法”)及GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert法”)等4种结核分枝杆菌检测方法检出结核病病原菌的能力。方法搜集2018年1月1日至2018年12月31日北京结核病控制研究所451例疑似肺结核患者的痰标本,同时使用涂片法、L-J法、MGIT 960法及GeneXpert法进行检测。对上述4种方法的检测结果以临床诊断情况(总体分为“肺结核患者”与“非肺结核患者”)为参考标准,计算各种检测方法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、一致率;同时计算4种方法联合检测结果的病原学阳性率(其中任何一种方法检测结果为阳性,即判断为联合检测结果为阳性)。结果 451例疑似肺结核患者中,临床最终诊断依据《WS 288—2017肺结核诊断》标准进行,诊断为肺结核患者227例(肺结核225例、肺结核并发结核性胸膜炎2例),非肺结核患者224例[非结核分枝杆菌(NTM)肺病11例,陈旧性肺结核6例,肺部阴影待查181例,胸腔积液3例,肺纤维化1例,肺炎3例,肺癌1例,密切接触者筛查18例]。以临床诊断结果为参考标准,涂片法、L-J法、GeneXpert法、MGIT 960法检测敏感度分别为22.5%(51/227)、32.2%(73/227)、37.9%(86/227)、43.2%(98/227),特异度分别为96.0%(215/224)、96.4%(216/224)、100.0%(224/224)、95.1%(213/224),一致率分别为59.0%(266/451)、64.1%(289/451)、68.7%(310/451)、69.0%(311/451)。涂片法和L-J法联合检测,以及涂片法、L-J法和GeneXpert法联合检测,4种方法联合检测的敏感度分别为34.8%(79/227)、43.6%(99/227)、49.8%(113/227),特异度分别为96.0%(215/224)、96.0%(215/224)、93.8%(210/224),一致率分别为65.2%(294/451)、69.6%(314/451)、71.6%(323/451)。结论以临床诊断为参考标准,MGIT 960法检测的敏感度最高;GeneXpert法检测的特异度最高;4种方法联合检测能够显著提高诊断敏感度,与临床诊断的一致率也显著提高。

2019年北京市老年与非老年肺结核患者耐药性差异分析

目的了解2019年北京市结核病防治机构老年肺结核患者与非老年患者结核分枝杆菌的耐药特征差异。方法选取2019年1-12月收集的北京市14家结核病防治机构和6家定点医院收治的1168例肺结核患者痰培养阳性的结核分枝杆菌临床分离株,统计分析老年肺结核患者(老年组)与非老年肺结核患者(非老年组)的药物敏感性试验情况。结果老年组和非老年组在户籍分类构成和治疗史分类构成间的差异有统计学意义(P<0.01);老年组男性、本地患者、初治患者的总耐药率显著低于非老年患者(P均<0.05);在不同耐药类型的比较中,老年组总耐药率20.5%显著低于非老年组总耐药率28.1%(P<0.05),老年组耐多药率3.1%及利福平耐药率3.8%显著低于非老年组的耐多药率6.6%及利福平耐药率9.0%(P均<0.05)。结论2019年北京市老年肺结核患者总耐药率低于非老年组,提示北京地区在现有结核病防控力度下,老年结核病防控取得了一定的效果。同时也要进一步关注非老年肺结核患者的耐药情况,持续加强非老年患者的耐药监测力度。

新诊断2型糖尿病患者GADA 和 ZnT8A 自身抗体检测意义研究

目的：分析新诊断2型糖尿病患者中谷氨酸脱羧酶自身抗体（GADA）和锌转运子8自身抗体（ZnT8A）阳性情况。方法通过 ELISA 法检测2014年5月-10月收集的101例新诊断2型糖尿病患者血清样本 GADA 和 ZnT8A 水平。结果GADA 阳性率为21.78％，ZnT8A 阳性率为17.82％，两种自身抗体共同阳性率为8.91％，且 GADA 和 ZnT8A 阳性与否与患者的性别（t＝－0.724，－0.550；0.903，1.359，P 值均＞0.05）、年龄（r ＝－0.185，－0.158；0.367，0.084，P 值均＞0.05）、血糖（r＝0.290，0.110；－0.264，－0.047，P 值均＞0.05）、胆固醇（r＝－0.047，0.004；0.154，－0.138，P 值均＞0.05）、三酰甘油（r ＝－0.092，－0.054；－0.217，－0.023，P 值均＞0.05），以及低密度脂蛋白（r ＝－0.045，－0.027；0.202，－0.025，P 值均＞0.05）水平不存在明显相关性。结论为了早期诊断成人迟发型自身免疫性糖尿病患者，应该对新诊断的2型糖尿病患者及时进行自身抗体的筛查。

2009和2019年北京市非结核分枝杆菌流行特征比较

目的 分析北京市非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)分离率及菌种分布情况,为科学制订北京地区分枝杆菌病的预防和控制策略提供理论依据。方法 采用回顾性调查方法,采用微阵列基因芯片法对本实验室2009和2019年度经对硝基苯甲酸(PNB)鉴别培养基鉴定为非结核分枝杆菌的菌株进行菌种鉴定,基因芯片检测技术与表型方法检测结果不同的菌株,经传代分离纯化后提取核酸对16SrRNA基因测序进行最终鉴定,两个年度非结核分枝杆菌分离率、菌种分布及流行病学情况均采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。结果 2009年分枝杆菌培养阳性菌株1 552株,鉴定出非结核分枝杆菌45株,分离率为2.90%,共分离出9个分枝杆菌菌种,2019年分枝杆菌培养阳性菌株1 254株,鉴定出非结核分枝杆菌81株,分离率为6.46%,共分离出9个分枝杆菌菌种;2009年缓慢生长型占86.67%,快速生长型占13.33%,2019年缓慢生长型占59.26%,快速生长型占40.74%,2009和2019年两年NTM分离率(χ^(2)=21.065,P﹤0.001)、菌种分布(χ^(2)=19.602,P=0.014)比较,差异均有统计学意义。2009年感染者中年龄在40岁以上人群占77.78%,2019年感染者中,年龄在40岁以上人群占67.90%;两个年份的年龄分布比较,差异具有统计学意义(χ^(2)=10.527,P=0.015),NTM分离率在0~19岁、20~39岁及60岁以上年龄段差异无统计学意义,在40~59岁年龄段差异有统计学意义(χ^(2)=9.800,P=0.002)。结论 北京地区非结核分枝杆菌分离率呈显著增高趋势,菌种分布从缓慢生长型占绝对优势向快速生长型、缓慢生长型趋于平均化转变,北京市40岁以上患者为高危人群,应积极开展分枝杆菌菌群、菌种鉴定。

北京市肺结核病人耐药筛查实施效果的研究

目的分析北京市利福平耐药结核病(RR-TB)诊断流程实施效果,为进一步完善耐药结核病的快速筛查和治疗提供依据。方法选取2019年1月至2019年12月在北京市结核病防治机构及定点医院就诊的表型药物敏感性试验为利福平耐药的86例肺结核患者,评价其诊疗过程中北京市耐药筛查工作的开展情况,并分析其临床分离株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)、左氧氟沙星(LFX)的表型药敏试验的耐药情况。结果2019年86例RR-TB中Xpert检出62例利福平耐药,Hain检测补充检出3例,另外3例阳性培养物直接进行了表型药敏试验,通过耐药筛查工作RR-TB患者的发现率为79.07%(68/86),漏诊率为20.93%(18/86)。其中,8例Xpert为利福平敏感而表型药敏为利福平耐药,漏筛率为11.63%(10/86)。RR-TB中准广泛耐药率为23.26%(20/86),初复治在3种不同耐药类型中差异无统计学意义。结论北京市耐药筛查工作在RR-TB诊断中具有快速高效的特点,存在一定的分子耐药与表型不一致现象,且实施中工作落实有待提高,需进一步加强督促管理。pre-XDR-TB处于较高水平,应尽早开展氟喹诺酮的分子诊断。

人羧基肽酶 H不同区段抗原的克隆表达及其初步应用

目的：构建人羧基肽酶 H 不同区段抗原的原核表达载体，诱导表达获得重组蛋白，初步验证人羧基肽酶 H 不同抗原区段在羧基肽酶 H 自身抗体检测中的应用价值。方法应用 RT-PCR 方法调取目的基因，构建相应的原核表达质粒，转化大肠埃希氏菌诱导表达重组蛋白，用重组蛋白作为包被抗原建立人羧基肽酶 H 自身抗体的间接 ELISA 方法，评价羧基肽酶 H 抗原在检测新诊断2型糖尿病患者抗羧基肽酶 H 自身抗体中的应用价值。结果获得了羧基肽酶 H 三种不同区段抗原，其中42～476氨基酸区段为较理想的抗原。以该全长抗原作为包被抗原检测95例新诊断2型糖尿病患者，羧基肽酶 H 自身抗体阳性率为8.42％。结论原核克隆表达的人羧基肽酶 H 42～476氨基酸区段抗原具有良好的抗原性，可作为成人隐匿性自身免疫性糖尿病鉴别诊断的候选抗原。