POR相关基因多态性对华法林维持剂量的影响

目的:探讨POR相关基因多态性对华法林维持剂量个体差异的影响。方法:2017年1月至2019年3月,在中山市人民医院、中山大学附属第一医院进行复查的188名机械瓣膜置换术患者被纳入研究,国际化标准比值及华法林维持剂量由患者的电子病历获得。POR A503V基因型检测采用直接测序法,POR 831-35C>T的基因型检测采用PCR-RFLP法。统计分析POR A503V、POR 831-35C>T各基因型对华法林剂维持剂量的影响。结果:POR A503V各基因型的平均华法林维持剂量分别为CC型(2.75±1.42)mg/d、CT型(2.78±1.41)mg/d、TT型(3.10±1.46)mg/d,组间差异无统计学意义;排除混杂因素后,组间差异仍无统计学意义。POR 831-35C>T各基因型的平均剂量为CC型(2.55±1.36)mg/d、CT型(2.90±1.40)mg/d、TT型(3.05±1.55)mg/d,CT型、TT型的剂量均显著高于CC型(P <0.05);排除混杂因素后,CT型、TT型组的剂量分别比CC型组高10.7%、16.0%(P<0.05)。结论:POR 831-35C>T突变后与华法林维持剂量升高相关,患者在制定华法林个体化用药方案时应参考POR 831-35C>T基因型。

PagKNAT2/6a与PagKNAT2/6b在木质部发育中存在功能保守性

[目的]通过比较分析PagKNAT2/6a与PagKNAT2/6b在木质部发育中的功能差异,解析KNOX基因在木材形成过程中的生物学功能。[方法]利用相关软件进行基因序列比对分析;通过对转基因植株进行GUS染色和实时荧光定量(qRT-PCR)等实验进行基因表达模式分析,随后对茎部解剖学分析,进而解析PagKNAT2/6a对木质部发育的影响;最后,对次生壁合成相关基因(如纤维素合成相关基因CESA4、CESA7A、CESA7B等;半纤维素合成相关基因GUX1a、GUX1b、PARVUS;木质素合成相关基因COMT、CAD、LAC4等)的表达分析探究PagKNAT2/6a对次生壁合成的调控机制。[结果]PagKNAT2/6a与PagKNAT2/6b序列高度相似,在‘84K’不同组织中均有表达,在杨树茎、茎尖以及幼嫩叶片中表现出较高的表达量。对PagKNAT2/6a转基因植株的茎部解剖分析表明,与野生型相比,PagKNAT2/6a过表达抑制木质部发育;同时qRT-PCR分析表明PagKNAT2/6a基因通过调控次生壁合成相关基因的表达影响木质部发育。[结论]PagKNAT2/6a与PagKNAT2/6b均负调控木质部发育,同时存在功能保守性。

银杏叶提取物对细胞色素P450酶CYP1A2实验研究

目的 研究银杏叶提取物对大鼠细胞色素P450酶CYP1A2活性的影响。方法 银杏叶提取物10, 100mg·kg-1 2个剂量,分别经1, 5, 10天灌胃处理大鼠,以未经处理者为对照组,测定CYP1A2的酶活性。同剂量灌胃处理10天后,再单次灌胃盐酸普萘洛尔10mg·kg-1,测定普萘洛尔和N-去异丙基普萘洛尔在大鼠体内的血药浓度。结果 银杏叶提取物处理后,大鼠肝微粒体的CYP1A2酶活性显著升高,且能显著降低普萘洛尔在大鼠体内的AUC和Cmax,使N-去异丙基普萘洛尔的AUC和Cmax显著升高。结论 银杏叶提取物能显著诱导大鼠CYP1A2的酶活性,并显著影响普萘洛尔及其代谢物在大鼠体内的血药浓度。故银杏叶提取物可能影响与之同时服用、经CYP1A2代谢的药物临床疗效。

北京、河北地区荆芥挥发油的GC特征图谱

目的建立北京、河北地区不同品种荆芥挥发油的GC特征图谱。方法 GC-FID法测定挥发油的乙酸乙酯萃取液,并对其进行相似度评价、聚类和主成分分析。结果 40批荆芥样品的GC特征图谱中有10个共有峰,通过欧式距离可归为4类,即中荆1号、中荆2号、安国荆芥和玉田荆芥。结论该图谱能可靠地鉴定荆芥的品种,可用于其质量控制。

柴胡种子质量分级标准

为了建立柴胡种子质量分级标准,以便控制其质量,规范其供需市场。采用柴胡种子检验方法,测定不同来源的柴胡种子的发芽率、千粒重、净度、含水量和生活力等指标;根据K类中心聚类分析原理,使用SPSS17.0统计分析软件对数据进行了分析。最终确定了以发芽率和千粒重2项指标为主要标准,净度和含水量为参考标准的4项指标3个等级的柴胡种子质量分级标准。除去发芽率低于50%的不合格种子,25份试样中Ⅰ级有8个,Ⅱ级有11个,Ⅲ级有6个。此标准可为柴胡种子品质检验提供参考。

LC/MS/MS测定大鼠血浆中普萘洛尔及其代谢物4-羟普萘洛尔、N-去异丙基普萘洛尔的浓度

目的:用高效液相色谱-质谱联用方法同时测定大鼠血浆中普萘洛尔及其代谢物4-羟普萘洛尔、N-去异丙基普萘洛尔的浓度。方法:大鼠血浆用乙醚萃取法处理后,采用 LC/MS/MS 方法,测定大鼠血浆中普萘洛尔及其代谢物4-羟普萘洛尔、N-去异丙基普萘洛尔的浓度。HPLC 条件:大连依利特 Hypersil BDS C_(18)柱(2.1 mm×50 mm,3μm),流动相:水(含0.1%甲酸)-乙腈(39:61,v/v),柱温:12℃,流速:200 μL·min^(-1),进样量:10 μL;质谱检测参数为电喷雾电离源(ESI);喷雾电压:3500 V;碰撞压力:0.1333 Pa;源内碰撞诱导电压:普萘洛尔,10 V;4-羟普萘洛尔,15 V;N-去异丙基普萘洛尔,15 V;扫描时间:0.3 s;检测离子:普萘洛尔 m/z 260[M+H]^+;4-羟普萘洛尔 m/z 276[M+H]^+;N-去异丙基普萘洛尔218[M+H]^+。结果:普萘洛尔线性范围2—1000 ng·mL^(-1),最低定量限为2 ng·mL^(-1)。4-羟普萘洛尔和 N-去异丙基普萘洛尔的线性范围1～200 ng·mL^(-1),最低定量限为1 ng·mL^(-1)。普萘洛尔的萃取回收率在90%以上,4-羟普萘洛尔和 N-去异丙基普萘洛尔的萃取回收率均为50%以上,日内、日间 RSD 皆小于15%。结论:适用于测定大鼠血浆中普萘洛尔及其代谢物4-羟普萘洛尔、N-去异丙基普萘洛尔的浓度及药动学的研究。

中药荆芥最新研究进展

荆芥为唇形科荆芥属一年生草本植物,其应用历史悠久,为中国传统的常用大宗类中药材之一。本研究归纳了近年来有关荆芥的研究报道,总结了荆芥在种质资源、栽培方法、炮制加工、化学成分、药理作用和临床应用等方面的研究,分析了目前研究的进展和不足。指出现有荆芥研究多集中在化学成分、药理作用和临床应用等方面,有关种质资源多样性、不同种质之间鉴定等方面研究尚属空白。笔者认为今后应该加强种质鉴定和质量控制方面的研究,为提高中药材质量,保证临床用药安全和有效提供保障。

头孢丙烯片在健康人体的药代动力学和生物等效性

目的研究2种国产头孢丙烯片(头孢类抗生素)在健康人体内的药代动力学过程,并评价这2种制剂的生物等效性。方法20例健康成年男性受试者随机分组,自身对照,单次口服头孢丙烯片1 g后,用高效液相色谱法测定头孢丙烯顺式及反式异构体的血浆浓度,用非房室模型法计算各主要药代动力学参数,并进行方差分析和生物等效性评价。结果顺式异构体:参比制剂与受试制剂的tm ax分别为(2.4±1.0),(2.3±0.8)h;Cm ax分别为(15.4±3.5),(14.8±2.8)μg.mL-1;t1/2分别为(1.4±0.1),(1.4±0.1)h;MRT分别为(3.4±0.6),(3.4±0.6)h;AUC0-t分别为(61.2±10.6),(60.3±11.4)μg.h.mL-1;AUC0-∞分别为(64.7±11.2),(64.5±11.7)μg.h.mL-1;受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为(99.3±14.5)%。反式异构体:参比制剂与受试制剂的tm ax分别为(2.4±0.9),(2.4±0.9)h;Cm ax分别为(1.6±0.3),(1.5±0.3)μg.mL-1;t1/2分别为(1.2±0.2),(1.5±0.6)h;MRT分别为(3.2±0.7),(3.2±0.7)h;AUC0-t分别为(6.1±1.4),(5.6±1.3)μg.h.mL-1;AUC0-∞分别为(6.1±1.4),(5.6±1.3)μg.h.mL-1;受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为(94.0±17.5)%。结论受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

奈韦拉平片在健康人体的药代动力学和生物等效性

目的研究2种国产奈韦拉平片(抗病毒药)在健康人体内的药代动力学,并评价这2种制剂的生物等效性。方法20例健康成年男性受试者随机分组,按自身对照单次口服奈韦拉平片200 mg后,采用HPLC法测定奈韦拉平的血浆浓度,非房室模型法计算各主要药代动力学参数,并进行方差分析和生物等效性评价。结果参比制剂与受试制剂奈韦拉平的tmax分别为(3.5±2.1)、(3.0±1.9)h;Cmax分别为(2.6.±0.5)、(2.6±0.5)mg·L-1;t1/2分别为(57.6±10.4)、(58.6±10.2)h;MRT分别为(55.6±6.5)、(56.8±5.0)h;AUC0-t分别为(167.6±36.1)、(171.8±32.7)mg·L-1.h;AUC0→∞分别为(169.9±36.6)、(174.2±33.1)mg·L-1.h;CL/F分别为(1.2±0.3)、(1.2±0.2)L.h-1;Vd/F分别为(100.3±20.4)、(99.4±20.8)L;受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为(103.7±11.6)%。结论受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

银杏叶提取物诱导大鼠肝脏细胞色素P450酶蛋白的表达

【目的】研究银杏叶提取物对大鼠肝脏细胞色素 P450酶 CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1蛋白表达的影响。【方法】银杏叶提取物10mg/kg 和100mg/kg 两个剂量,大鼠经灌胃处理10d 后,取出肝脏,称重,制备肝微粒体,以未经处理者为对照组,测定 CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYF3A1的蛋白表达。【结果】CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达在给药后比对照组显著升高,且存在明显的剂量依赖性。【结论】银杏叶提取物能显著诱导大鼠CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达水平,故有可能影响与之同时服用的药物的疗效。

我国中药材新品种选育进展与建议

本文总结近十年来中药材新品种选育和推广、新品种认证体系建设等方面取得的新成绩,在此基础上提出亟待加强的几方面工作:加快完成人工栽培200种中药材品种选育的全覆盖;尽快完成中药材新品种全国认证体系建立;建立全国或省级中药材新品种区试体系,探索生物技术在中药材育种领域的应用;开展品质性状遗传规律研究等。本文是近年第一次对我国中药材新品种选育现状的全面总结。

Caco-2细胞模型的建立及意义

目的建立C aco-2细胞模型,探讨其在药物吸收研究方面的可靠性及作用。方法建立C aco-2细胞单层模型,采用几种标准的标记物在模型中行转运试验,对模型的完整性、通透性以及P-糖蛋白(P-gp)的表达进行验证,将结果与文献报道值比较。结果细胞旁转运及跨细胞被动转运的标记物荧光黄和普奈洛尔的表观渗透系数(Papp)值均与文献报道一致;P-gp的标准底物维拉帕米在模型中的外排能被P-gp的强抑制剂酮康唑抑制。结论本实验室建立的C aco-2细胞模型在模型完整性、通透性以及P-gp的表达方面能够满足胃肠道吸收化合物机制研究的需要。

银杏叶提取物及其萜类单体对人孕烷X受体介导CYP3A4转录的调节作用

目的研究银杏叶提取物(GBE)及其萜类单体白果内酯(BB)、银杏内酯A(GA)和银杏内酯B(GB)是否能通过孕烷X受体(PXR)的活化而诱导CYP3A4转录。方法采用脂质体瞬时转染的方法,在人肝肿瘤细胞株HepG2细胞中转入PXR表达质粒、CYP3A4报告基因质粒和内参质粒,与不同浓度的银杏叶提取物及其萜类单体(BB、GA和GB)共同孵育24h后,检测细胞中荧光素酶。结果GBE(100ng/mL、500ng/mL、5μg/mL和25μg/mL)分别通过活化PXR诱导CYP3A41.32、1.57、1.71和1.92倍,BB(10ng/mL、100ng/mL和1μg/mL)分别通过活化PXR诱导CYP3A41.52、1.79和1.89倍,GA和GB则不能通过活化PXR诱导CYP3A4。结论GBE和BB能通过PXR的活化而诱导CYP3A4转录,GA和GB不能活化PXR,对CYP3A4转录无诱导作用,提示在GBE或BB与CYP3A底物合用时要注意药物之间的相互作用。

NR1I2基因多态性对华法林维持剂量个体差异的影响

目的探讨NR1I2相关单核苷酸多态性对华法林维持剂量个体差异的影响。方法共179名机械瓣膜置换术后患者纳入研究。NR1I2-25385C>T,NR1I2 7635G>A基因型检测采用直接测序法,VKORC1-1639 G>A,CYP2C9*3基因型检测采用PCR-RFLP法;判断患者是否入选的INR值、及华法林维持剂量均通过查阅患者定期复诊的电子病历获得;统计分析NR1I2-25385C>T,NR1I2 7635G>A的基因分布频率,及其与华法林维持剂量的相关性。结果 179名机械瓣膜置换术患者中,NR1I2-25385C>T的基因型频率分布为CC型62.6%、CT型31.3%和TT型6.1%;NR1I2 7635G>A的基因型频率分布为GG型30.7%、GA型49.2%和AA型20.1%。NR1I2-25385 C>T各基因型组的剂量分别为:CC型(3.0±1.2)mg,CT型(3.0±1.2)mg,TT型(2.8±0.8)mg;各组间的剂量无统计学差异。NR1I2 7635G>A各基因型组的剂量分别为:GG型(2.7±1.0)mg,GA型(3.1±1.1)mg,AA型(3.1±1.4)mg;GA与AA型组的华法林维持剂量显著高于GG型(P<0.05)。结论 NR1I2 7635G>A突变后与华法林维持剂量上调相关,患者在制定个体化给药方案时应参考NR1I2 7635G>A基因型。

以睾酮为探针测定大鼠CYP3A酶活性的实验研究

目的建立一种简便、快速、可靠的以睾酮作为探针药物,评价大鼠CYP3A酶活性的高效液相色谱检测方法。方法色谱柱为HypersilBDSC18柱(4.6mm×150mm,5μm),柱温为25℃,检测波长为254nm,内标为氢化可的松,流动相为甲醇-10mmol·L-1Na2HPO4水溶液(pH8.25)(55∶45),流速为1mL·min-1。睾酮以大鼠肝微粒体温孵后,用乙酸乙酯萃取,离心取上清液挥干后用甲醇-水(1∶1)复溶进样分析。结果睾酮和氢化可的松的保留时间分别为17.74min和6.05min;睾酮的孵育产物6β-羟基睾酮的保留时间为4.72min,回归方程为Y=0.0756X-0.0214(r=0.9980),线性范围为0.3125～20μg·mL-1,检测限下限质量浓度为(0.078±0.016)μg·mL-1(S/N≥3),提取回收率为79.3%～95.1%,方法回收率为98.0%～104.0%,低、中、高三个浓度日内、日间RSD均小于10.4%;温孵体系中其他内源性物质不干扰测定。结论所建立的HPLC稳定、高效,适合睾酮及其代谢产物6β-羟基睾酮的测定,可应用于药物对大鼠CYP3A酶活性的评价。

柴胡种子检验规程研究

对柴胡种子扦样、真实性、净度、含水量、重量、发芽率、生活力及健康度8项指标的研究,确定了各指标的标准检验方法,供建立柴胡种子检验规程参考。

参与抗癌新药F318体外代谢的大鼠细胞色素P450酶

目的:体外研究大鼠肝微粒体中F318代谢的酶促动力学．及利用选择性细胞色素(CYP)酶抑制剂明确参与F318代谢的CYP亚型。方法:优化F318在大鼠肝微粒体中孵育的条件,并进行酶促动力学研究;探讨CYP酶的选择性抑制剂α-萘磺酮(CYP1A2),磺胺苯吡唑(CYP2C9),噻氯匹定(CYP2C19),查尼丁(CYP2D6),4-甲基吡唑(CYP2E1),酮康唑(CYP3A1)对其代谢的影响及参与其代谢的CYP亚型。结果:F318代谢的酶促动力学参数:最大反应速率(V_(max))为(1．40±0．03)μmol·min^(-1)·mg^(-1),米氏常数(K_m)为(19．36±2．30)μmol·L^(-1)。酮康唑可以显著地抑制F318代谢(抑制效果≈70％),而其他CYP特异性抑制剂对F318的代谢没有明显的影响。结论: CYP3A1主要参与了F318的代谢,CYP1A2,2C19和2D6也起到了部分代谢作用。

北柴胡细胞色素P450酶基因的克隆及其植物过量表达载体的构建

目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的细胞色素P450酶基因,构建其过量表达载体,为通过转基因验证其功能奠定基础。方法:在454高通量测序获得5'和3'端部分cDNA序列的基础上,利用LD-PCR方法获得全长cDNA,根据全长cDNA序列设计含有酶切位点的PCR引物,利用高保真酶,以RNA反转录产物为模板PCR扩增细胞色素P450酶基因的开放读框,扩增产物与pEASY-T1 Simple载体连接,转化大肠杆菌DH5α;重组质粒pT1-P450经菌液PCR和酶切方法验证后测序,采用NCBI在线Blastx、DNAman和MEGA4软件对序列进行生物信息学分析,随后将pT1-P450的酶切产物插入双元载体pCAMBIA-SUPER 1300,菌液PCR和酶切验证重组质粒p1300-P450。结果:扩增到了北柴胡细胞色素P450酶基因BcCYP87E,构建了这一基因的过量表达载体。结论:细胞色素P450酶基因的克隆和转基因载体的构建,为后续开展转基因研究,验证其生物功能奠定了基础。

Sprague-Dawley大鼠肝微粒体蛋白浓度检测方法学研究

目的建立Sprague-Dawley(SD)大鼠肝微粒体蛋白浓度测定的紫外分光光度检测法。方法SD大鼠尾静脉连续3d注射0.9%氯化钠注射液2ml,第4d解剖大鼠,取肝脏,应用差速离心法提取大鼠肝微粒体,用Lowry法测定肝微粒体蛋白浓度。结果牛血清蛋白标准曲线范围为0～500μg/ml,回归方程为:Y=0.0007X+0.0161(r=0.9982),低、中、高浓度的回收率分别为95.85%、102.69%、101.28%,日内和日间精密度分别为3.83%、1.73%、0.57%及10.25%、2.22%、0.98%。结论本实验建立的Lowry蛋白测定法准确可靠,重复性和稳定性均良好,可为进一步研究用药后肝微粒体酶活性的改变提供依据。

治疗药物监测概况及研究进展

通过查阅有关书籍和近年国内外的文献资料,回顾治疗药物监测(TDM)的发展与现状,介绍目前进行TDM的药物种类和常用技术方法,展望遗传药理学在个体化用药中的应用前景。未来的治疗药物监测模式是传统模式和药物遗传学监测相结合,进一步完善个体给药方案的制定。