LncRNA DLEU2对胃癌细胞增殖、凋亡和PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)对胃癌细胞增殖、凋亡和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法通过GEPIA在线分析来自TCGA数据库和GTEx项目的胃癌组织DLEU2水平,采用实时定量PCR(QPCR)检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞和胃癌BGC-823细胞的DLEU2水平;脂质体法将3条靶向DLEU2的小干扰RNA(si-DLEU2-1、si-DLEU2-2和si-DLEU2-3)转染至BGC-823细胞中,筛选最佳si-DLEU2干扰序列进行实验。体外常规培养BGC-823细胞并分为转染si-DLEU2的干扰组、转染无义siRNA序列的阴性对照(NC)组和未转染的空白对照(Blank)组,采用MTT比色法和AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的增殖活力和凋亡率,QPCR和Western blotting检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax和caspase-3的水平,Western blotting检测磷酸化的PI3K调节亚基p85(p-p85)和Akt(p-Akt)水平。结果GEPIA在线分析显示胃癌组织的DLEU2水平高于正常组织(P<0.05);QPCR结果显示BGC-823细胞的DLEU2水平高于GES-1细胞(P<0.05),且3条si-DLEU2序列转染后,BGC-823细胞的DLEU2水平均降低(P<0.05),其中si-DLEU2-3序列的效果最佳,故选取si-DLEU2-3序列进行后续实验;干扰组的DLEU2水平及转染24、48 h后的增殖活力均低于Blank组和NC组(P<0.05)。干扰组的凋亡率为(21.529±1.320)%,高于Blank组的(9.032±0.536)%和NC组的(8.641±0.365)%(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,干扰组的Bcl-2、p-p85和p-Akt水平降低,而Bax和caspase-3水平均升高(P<0.05)。Blank组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论DLEU2在胃癌组织和细胞中均升高且发挥促癌作用,可能通过激活PI3K/Akt信号通路来增强细胞增殖能力并抑制凋亡,有望成为胃癌治疗的新靶点。

内镜胃癌黏膜下剥离术与外科手术对早期胃癌患者复发及并发症的影响

目的探究内镜胃癌黏膜下剥离术对早期胃癌患者的治疗效果和并发症以及复发率的影响。方法选取130例早期胃癌患者,按照手术方式不同分为观察组和对照组。观察组60例,采用内镜胃癌黏膜下剥离术治疗;对照组70例,采用外科胃癌根治术治疗。对比2组的术后恢复情况、并发症的发生率和患者的生存情况。结果观察组的术中出血量和手术时间低于对照组(P<0.001);治疗后,观察组的住院时间、肛门排气时间、疼痛程度均低于对照组(P<0.001),且出血、穿孔、感染、胃食管反流发生率也明显低于对照组(P<0.001)。3年生存率及术后复发率情况2组无明显差异(P>0.05)。结论相比外科胃癌根治术,内镜胃癌黏膜下剥离术治疗早期胃癌,不仅减少了术中出血量和手术时间,还减少了并发症的发生,有利于患者恢复。

MEG3对结肠癌细胞生物活性及VEGF水平影响

目的探讨母系表达基因3(Maternal expression gene 3,MEG3)对结肠癌细胞生物活性及VEGF水平影响。方法将人结肠癌细胞系SW480分为对照组(SW480细胞)、NC组(SW480细胞转染MEG3-NC)和MEG3组(SW480细胞转染MEG3mimics),采用MTT检测SW480细胞活性抑制率,Transwell小室检测侵袭,Hoechst法检测凋亡,免疫印迹检测VEGF蛋白及免疫组化检测VEGF阳性率。结果对照组和NC组SW480细胞lncRNA MEG3水平比较无意义(P>0.05),MEG3组表达升高与其余组别存在意义(P<0.05);不同时间点,对照组及NC组SW480抑制率水平相似(P>0.05),与MEG3组比较,对照组及NC组SW480抑制率均降低(P<0.05),相同时间点,MEG3组SW480抑制率均对照组及NC组(P<0.05),对照组及NC组SW480抑制率水平相似(P>0.05);对照组,NC组及MEG3组SW480细胞侵袭数目分别为(48.90±7.71)个、(44.12±6.90)个及(22.30±3.26)个,对照组、NC组细胞侵袭数目相似(P>0.05),MEG3组细胞侵袭数目低于其他两组(P<0.05);对照组、NC组及MEG3组SW480细胞凋亡率分别为(7.46±0.72)%、(8.12±1.03)%及(31.13±3.22)%,对照组、NC组细胞凋亡率相似(P>0.05);与对照组、NC组比较,MEG3组细胞凋亡率升高(P<0.05);对照组、NC组及MEG3组SW480中VEGF蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、0.91±0.04及0.48±0.05,对照组、NC组VEGF蛋白表达相似(P>0.05);与对照组、NC组比较,MEG3组VEGF蛋白相对表达水平降低(P<0.05);对照组、NC组及MEG3组SW480中VEGF阳性表达不同,对照组、NC组SW480中VEGF阳性表达相似(P>0.05),MEG3组中VEGF阳性表达低于对照组、NC组(P<0.05)。结论在结肠癌细胞中转染MEG3能够抑制活性,减少增殖及加快凋亡,可能与抑制VEGF水平相关。

微小RNA-424-5p调控OTX1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究结直肠癌组织中微小RNA-424-5p(miR-424-5p)与orthodenticle人同源盒基因1(OTX1) mRNA表达的关系,并探讨miR-424-5p对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法收集2017年6月至2018年6月在昆明医科大学第三附属医院结直肠外科收治的60例结直肠癌患者,采用实时定量PCR (RT-qPCR)检测miR-424-5p和OTX1 mRNA在60对结直肠癌组织和癌旁组织以及结直肠癌HCT116细胞中的表达情况,并分析两者表达的相关性.HCT116细胞分别转染miR-NC(miR-NC组)和miR-424-5 p-mimic(miR-424-5p-mimic组),采用CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell实验分别检测miR-424-5p对HCT116细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测过表达miR-424-5p对OTX1蛋白表达的影响.荧光素酶报告实验检测miR-424-5p对OTX1-3'UTR报告载体荧光素酶活性的影响.结果 OTX1 mRNA在结直肠癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为1.049±0.446和0.639±0.178(t=-6.583,P<0.001);miR-424-5p在结直肠癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0.865±0.261和1.329±0.387(t=7.705,P<0.001),差异均有统计学意义.结直肠癌组织中miR-424-5p和OTX1 mRNA的表达呈负相关(r=-0.439,P=0.015).HCT116细胞转染miR-424-5p-mimic后第72、96和120 h时吸光度(A)值分别为0.813 ±0.064、0.960±0.098、1.287±0.192,转染miR-NC后第72、96和120 h时A值分别为1.163 ±0.158、1.645 ±0.117、2.043±0.236,miR-424-5p-mimic组细胞增殖能力显著低于miR-NC组,差异均具有统计学意义(t=3.538,P=0.024;t=7.778,P=0.001;t=4.257,P=0.013).划痕实验结果显示,划痕24 h后miR-424-5p-mimic组与miR-NC组相比迁移能力显著减弱.miR-NC组和miR-424-5p-mimic组穿膜细胞数分别为(177.104±17.834)个和(35.667±13.634)个,差异有统计学意义(t=15.246,P<0.001).OTX1蛋白在miR-NC组和miR-424-5p-mimic组中的相对表达量分别为0.862 ±0.121、0.342±0.103,差异有统计学意义(t=16.286,P<0.001).荧光素酶实验结果显示,过表达miR-424-5p后,wt-OTX1-3'UTR和mut-OTX1-3'UTR报告载体的荧光素酶活性分别为0.305±0.095和0.898±0.080,差异有统计学意义(P<0.001).结论 miR-424-5p与OTX1mRNA在结直肠癌组织中的表达呈负相关,miR-424-5p可通过下调OTX1的表达抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.