水分胁迫对芒果成花效应及内源激素变化的影响

以３ａ生盆栽红芒６号为试材，研究水分胁迫对芒果成花的效应。发现水分胁迫能改变芒果植株梢尖内源激素的水平及激素间的平衡，使 ＧＡ减少，ＡＢＡ和 ＣＴＫ增加，ＣＴＫ／ＧＡ及ＡＢＡ／ＧＡ的比率提高，抑制营养生长，促进开花，成花率高达 ７５％；而对照（灌水）植株营养生长旺盛，萌发新梢，抽梢率３７．５％，成花率仅６．２５％。

杧果花芽分化研究进展

近年来，世界果种植面积逐年扩大，产量已成为生产者最关心的问题。而果产量与果花芽分化密切相关，因此关于果花芽分化的过程及各种影响因素的研究有很重要的意义。正因为如此，它吸引了许多研究者的兴趣，并从各方面进行深入探讨，以期达到人为调控果花芽分化...

基因编辑技术的研究进展

功能缺失(loss of function)是研究基因功能及其相关表型最重要、最直接的方法和策略。基因编辑技术从开始的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术到近年发展起来的高效酶技术都得到了广泛的应用。这些高效酶技术包括锌指核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)技术、转录激活样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nucleases,TALENs)技术和成簇的规律间隔的短回文重复序列系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9 system,CRISPR/Cas9)。除此之外,还有2016年发表的Ng Ago(Natronobacterium gregoryi Argonaute)编辑技术。近十年来,以CRISPR/Cas9为代表的基因编辑技术已经广泛应用于细胞水平和个体水平的基因功能敲除的研究。现就以上基因编辑技术的原理及最新进展进行综述,并重点介绍CRISPR/Cas9的技术原理以及该技术在建立基因敲除动物模型中的最新进展。

日粮纤维调节猪生产性能及肠道健康的研究进展

日粮纤维是猪日粮中重要的组成成分。日粮纤维在维持猪的正常肠道形态、调节肠道菌群稳态、增强肠道免疫方面具有积极作用。文章综述日粮纤维对日粮营养物质表观消化率、猪生产性能及肠道健康的影响,为日粮纤维在养猪生产中的合理利用、开发富含纤维的非粮型饲料、发展"绿色、节粮、安全"的生猪养殖提供参考。

猪血型PCR鉴定方法的建立

目的异种器官移植是解决人类器官供体短缺的有效途径,但其面临严重的免疫排斥反应,包括血型差异导致的超急性排斥反应。建立稳定、便捷、可靠的猪血型鉴定方法,可快速筛选合适血型的供体猪用于异种器官移植研究。方法选择版纳微型猪近交系、滇南小耳猪、巴马香猪为研究对象,用DNA提取试剂盒提取3种品系猪的血液、口腔颊黏膜和胎儿成纤维细胞中DNA,通过PCR法对猪ABO血型同源基因EAA第7号内含子附近的目标片段进行扩增。采用血液凝集反应检测猪前腔静脉全血加入抗A、B抗体后的溶血现象,采用免疫组织化学法检测猪心、肝、脾、肺、肾组织中A抗原表达水平,采用免疫荧光法检测猪口腔黏膜中A抗原表达水平。通过对比不同方法测定猪血型的结果,验证PCR方法的稳定性和可靠性,以此建立一种基于PCR的便捷式猪血型鉴定方法。结果首先,69头版纳微型猪近交系、7头滇南小耳猪和34头巴马香猪的血液PCR结果显示AO血型20头,AA血型66头,OO血型24头。47头滇南小耳猪的胎儿成纤维细胞PCR结果显示47个胎儿均为OO血型,其中8头基因编辑克隆猪的口腔黏膜PCR结果与供体胎儿成纤维细胞的PCR结果一致,均为OO血型;8头野生型猪(2头版纳微型猪近交系、4头滇南小耳猪和2头巴马香猪)的口腔黏膜PCR结果均与血液PCR鉴定结果一致。然后,从中随机挑选11头版纳微型猪近交系、4头滇南小耳猪和2头巴马香猪进行血液凝集反应验证,结果均与血液及口腔黏膜PCR鉴定结果一致。而且,对1头版纳微型猪近交系和2头巴马香猪的心、肝、肺、肾、脾组织进行免疫组织化学分析,结果与血液PCR鉴定和血液凝集反应结果相一致。最后,采集其中2头版纳微型猪近交系和1头巴马香猪的口腔黏膜样本进行免疫荧光检测,结果与血液PCR鉴定结果一致。结论通过采集胎儿细胞和活体猪的口腔黏膜样本进行PCR检测,可准确、高效地鉴定出猪的血型,为异种器官移植供体猪的血型筛选提供了一种简便方法。

绿茶有效活性成分EGCG诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究进展

绿茶是亚洲及中东地区最流行的饮品之一,具有抗癌、抗炎、抗菌、抗氧化、治疗心脑血管疾病、改善肥胖和糖尿病等活性。表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallo catechin-3-gallate,EGCG)是绿茶中含量最高的多酚类物质,具有抗肿瘤的功效。已知细胞凋亡是各种抗癌药物引发细胞死亡的主要方式,因此诱导癌细胞凋亡是治疗癌症的一个明确目标。大量研究报道了EGCG的抗肿瘤活性,并揭示了EGCG诱导肿瘤细胞凋亡的作用及机制,因此本文综述了近几年EGCG诱导肿瘤细胞凋亡的作用及机制,包括p53、STAT3、Akt、p38 MAPK、Wnt/β-catenin和TRAIL等与凋亡相关的途径,还综述了EGCG与天然产物、抗肿瘤药物及其它化合物协同诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制,并对EGCG的生物利用率、体内实验及临床实验的开展进行了展望,为EGCG的临床应用提供理论依据。

南阳市智慧农业发展现状、存在问题及对策与建议

随着数字经济时代的到来,智慧农业已成为发展现代农业的必由之路。目前我国有关智慧农业方面的政策支持、科技研发、创新应用等早已大规模开展并迅猛发展。南阳粮食年产量超50亿kg,是名副其实的农业大市,如何利用智慧化手段更好地推动农业现代化进程,是农业生产亟待解决的问题。本文作者以南阳市智慧农业发展为背景,综合运用实证研究方法,详细梳理了南阳市智慧农业发展的现状、存在的问题和一些针对性的对策和建议,以期为南阳市推进现代农业跨越式发展提供科学参考。

离心参数对猪卵母细胞早期去脂效果的影响

【目的】卵母细胞脂肪含量较高是影响猪卵母细胞和胚胎冷冻效果不佳的主要原因,离心去脂可以提高冷冻成功率。本研究选用不同离心参数对猪卵母细胞进行离心去脂,通过研究其对卵母细胞早期去脂效果及其去脂后克隆胚胎的体内外发育和冷冻的影响,筛选最适离心参数。【方法】设定不同离心参数对猪卵母细胞进行早期去脂,利用体细胞克隆技术构建重构胚,通过离心后卵母细胞脂肪层的分离、重构胚的卵裂率和囊胚率、冷冻—解冻后的存活率以及代孕母猪妊娠等分析重构胚玻璃化冷冻前后体内外的发育效果。【结果】离心转数为10 000 r/min、离心时间为20 min时,卵母细胞的早期去脂效果最好。早期去脂重构胚的卵裂率和囊胚率分别是65.38%和13.46%;冷冻—解冻的2~4细胞、5~8细胞、9~16细胞的重构胚的存活率和囊胚率分别为49.09%、52.75%、78.57%和12.72%、2.20%、21.42%,而且冷冻胚胎移植到代孕母猪体内后成功妊娠。【结论】本研究证明了猪卵母细胞早期去脂可直接用于胚胎冷冻,最适离心参数为10 000 r/min×20 min。

Leptin过表达对猪前脂肪细胞脂滴形成的研究

研究Leptin过表达对猪前脂肪细胞脂滴形成的影响,旨为进一步研究Leptin与脂质代谢相关的分子机制奠定理论基础。选取Leptin过表达与野生型猪皮下脂肪组织,在无菌条件下分离前脂肪细胞进行传代培养并诱导分化形成脂滴,通过油红O和Bodipy染色后观察脂滴面积并分析脂质的含量,利用Q-PCR检测脂滴形成相关基因mRNA的表达水平。诱导4 d后可分化形成脂滴,油红O和Bodipy染色的结果显示,Leptin过表达猪前脂肪细胞脂滴数量和甘油三酯含量显著低于野生型(P<0.05);且脂质合成相关基因PPARγ、SCAP、SREPB1和PLIN2的表达水平显著低于野生型(P<0.01)。结果表明,过表达Leptin可促使猪前脂肪细胞中PPARγ、SREPB1、SCAP、PLIN2基因的表达下调,进而抑制脂滴形成。

不同年龄二狼山绒山羊耳组织成纤维细胞的生物学特性

采用胶原酶消化法建立细胞系,观察细胞形态、测定细胞冻存前和复苏后的存活率、绘制细胞生长曲线,并对染色体核型进行分析,研究不同年龄的二狼山绒山羊耳组织成纤维细胞的生物学特性,分析年龄对二狼山绒山羊耳组织成纤维细胞体外培养的影响。试验结果表明,年龄对细胞形态无影响;冻存没有降低细胞的存活率(P>0.05);细胞的生长曲线呈典型的S型且年龄对细胞的生长无明显影响(P>0.05);染色体核型分析显示,不同年龄的山羊耳组织成纤维细胞系的染色体数目均为2 n=60(XY/XY),无染色体畸形。说明不同年龄,甚至年龄比较大的二狼山绒山羊个体(13岁)都可以通过胶原酶消化法建成稳定的成纤维细胞系,本试验使二狼山绒山羊种质资源在细胞水平得到保存,为二狼山绒山羊成纤维细胞系的建立以及开展其种质资源的保存提供一定的参考。

饥饿诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的自噬应答观察

目的观察饥饿诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的自噬应答情况,并探讨其相关分子机制。方法将MDA-MB-231细胞分为四组,对照组加入DMEM培养液正常培养;Baf-A1组在DMEM培养液中加入100 nM的Baf-A1;EBSS(饥饿)组加入EBSS培养液;EBSS+Baf-A1(自噬阻断)组在EBSS培养液中加入100 nM的Baf-A1,四组均处理8 h后,分别采用实时荧光定量法和Western blotting法检测各组微管相关蛋白轻链3(LC3B)、自噬相关蛋白7(ATG7)和自噬相关蛋白4A(ATG4A)的mRNA及蛋白。结果与对照组比较,EBSS组LC3B、ATG7 mRNA相对表达量升高,ATG4A mRNA相对表达量降低;与EBSS组比较,EBSS+Baf-A1组LC3B mRNA相对表达量升高、ATG7 mRNA相对表达量降低,与Baf-A1组对比,EBSS+Baf-A1组中LC3B mRNA相对表达量增加,ATG7和ATG4A mRNA相对表达量降低。与对照组比较,EBSS组LC3BⅡ/LC3BⅠ升高,ATG4A蛋白表达降低;与EBSS组比较,EBSS+Baf-A1组LC3BⅡ/LC3BⅠ增加,ATG7蛋白表达降低;与Baf-A1组相比,EBSS+Baf-A1组LC3BⅡ/LC3BⅠ增加,ATG7蛋白表达降低。结论EBSS处理的MDA-MB-231细胞自噬水平升高,细胞自噬体形成增多,在此过程中EBSS可能通过增加ATG7 mRNA的表达量增加细胞自噬水平。

饥饿诱导p53缺失猪成纤维细胞自噬促进凋亡

【目的】探究p53基因对饥饿诱导猪成纤维细胞(PFCs)形态、增殖、自噬及凋亡的影响,为进一步研究p53基因与肿瘤发生发展的分子机制提供理论依据。【方法】用EBSS、Baf A1和EBSS+Baf A1分别处理p53^(wt)和p53^(−/−)2株PFCs 2 h后,观察细胞形态变化并检测细胞的增殖、凋亡以及ATG9A和Bcl-2蛋白的表达情况。【结果】与对照组相比,EBSS和EBSS+Baf A1处理下p53^(wt)与p53^(−/−)的PFCs均发生皱缩和长出丝状伪足;在p53^(−/−)PFCs中,其细胞的增殖率明显下降,ATG9A蛋白的表达水平显著或极显著上调(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白的表达水平无显著变化(P>0.05);在p53^(wt) PFCs中,Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);EBSS处理下,p53^(−/−)PFCs的凋亡比率显著升高(P<0.05)。与p53^(wt) PFCs相比,p53^(−/−)PFCs的形态变化率极显著下降(P<0.01),其细胞的增殖率显著升高(P<0.05),ATG9A蛋白表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01)。【结论】饥饿诱导p53缺失猪成纤维细胞自噬促进了凋亡的发生,这为进一步研究p53基因与自噬、凋亡及肿瘤发生的分子机制提供了重要的理论依据。

自噬诱导、抑制的人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中ATG2A和ATG9A表达观察

目的观察自噬诱导、抑制的人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中ATG2A、ATG9A表达变化。方法人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231分为4组,对照组加入DMEM培养液正常培养,Baf-A1组在DMEM培养液中加100 nmol/L的巴弗洛霉素A1(Baf-A1)进行自噬阻断,EBSS组加入Earle's平衡盐溶液(EBSS)进行饥饿诱导细胞自噬,EBSS+Baf-A1组在EBSS培养液中加入100 nmol/L的Baf-A1,四组均培养4 h。采用实时荧光定量(Q-PCR)法检测各组细胞中ATG2A、ATG9A mRNA,采用WesternBlotting法检测各组细胞中ATG2A、ATG9A、P62、微管蛋白1轻链3(LC3)蛋白,计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ。结果与对照组、Baf-A1组相比,EBSS组、EBSS+Baf-A1组细胞中ATG2A、ATG9A mRNA相对表达量均显著升高(P均<0.05),且EBSS+Baf-A1组细胞中ATG9A mRNA相对表达量高于EBSS组(P均<0.05)。与对照组、Baf-A1组相比,EBSS组、EBSS+Baf-A1组细胞中ATG2A蛋白相对表达量均显著升高(P均<0.05);EBSS组细胞中ATG9A蛋白相对表达量均高于其余三组(P均<0.05);EBSS组细胞中P62蛋白相对表达量均低于其余三组(P均<0.05),EBSS+Baf-A1组P62蛋白相对表达量低于对照组(P均<0.05);EBSS组细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均低于其余三组(P均<0.05),EBSS+Baf-A1组LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均高于其余三组(P均<0.05)。结论EBSS成功诱导MDA-MB-231细胞发生自噬,饥饿诱导的MDA-MB-231细胞自噬过程中ATG2A、ATG9A mRNA和蛋白表达升高。

基因编辑异种移植供体猪的构建及现状

器官移植是治疗终末期器官衰竭的有效方法，在临床上得到了广泛应用。但据美国器官获取和移植网（http：／／optn．transplant．hrsa．gov／data／）2018年5月公布的数据显示，器官供求比率不到5％。

南阳市中药材种植产业分析及对策建议

为不断提升南阳市中医药文化知名度和影响力,笔者通过实地走访、开展座谈、查阅文献等方式,对南阳市中药材种植情况展开调研,了解南阳市中药材产业的种植现状,分析南阳发展中药材种植产业的优势,找准制约南阳市中药材种植产业发展的因素,对南阳市中药材种植产业的发展提出了对策与建议。

HT29和HCT116结直肠癌细胞增殖及其裸鼠移植成瘤研究

【目的】比较HT29和HCT116两株细胞系体外培养细胞增殖和在裸鼠体内移植后的成瘤情况。【方法】检测结直肠癌细胞HT29和HCT116的细胞活力,观察克隆形成细胞的形态,检测2株细胞p53和p21蛋白的表达水平;将2株细胞移植于裸鼠右侧腹股沟皮下,观察移植瘤的生长情况,记录裸鼠的体质量及移植瘤的体积。【结果】与HT29细胞相比,HCT116细胞在体外的增长率极显著升高(P<0.01),p21蛋白正常表达,p53蛋白表达水平极显著降低(P<0.01);在阿霉素存在的情况下,HCT116细胞中的p21蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。14 d内HCT116细胞移植量对裸鼠体质量无显著影响(P>0.05);单只细胞接种量为4×10^(5)和2×10^(6)个时,HT29细胞肿瘤体积显著高于HCT116细胞(P<0.05)。【结论】HCT116细胞在体外的增殖速率显著高于HT29细胞,但是在体内HT29细胞比HCT116细胞更易成瘤,其分子基础可能与HT29细胞中p53基因突变导致的p53蛋白高表达及其下游p21蛋白低表达有关;高浓度的癌细胞移植有利于肿瘤形成。本研究为结直肠癌动物模型的建立及其进一步研究奠定了基础。