谷子SWI3基因鉴定及其在盐和干旱胁迫下的表达分析

SWI/SNF染色质重塑因子在植物的生长发育及逆境应答过程中起重要作用。本研究首先通过序列比对,从谷子基因组中鉴定出6个候选SiSWI3基因,分别命名为SiSWI3A、SiSWI3B、SiSWI3C1、SiSWI3C2、SiSWI3D1和SiSWI3D2。然后对上述基因的结构、编码蛋白、启动子元件、亚细胞定位等进行生物信息学分析和预测,结果表明:SiSWI3蛋白都含有SANT Motif,且亚细胞定位预测显示SiSWI3成员主要被定位在细胞核中;SiSWI3基因启动子区域含有大量与光响应、激素类应答、逆境应答、代谢调控等相关的顺式作用元件。最后采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测这些基因在谷子苗期盐胁迫和干旱胁迫下的表达量变化,检测结果表明:SiSWI3基因受盐和干旱不同程度的诱导,说明SiSWI3基因参与谷子苗期盐胁迫和干旱胁迫应答。本研究所得结论为进一步探究SiSWI3染色质重塑因子在抗逆作物谷子的逆境响应中的功能和机制奠定了基础。

优化的密度梯度离心法提取质粒DNA

质粒常被用做基因的载体．纯化质粒DNA的方法可以分为3种：碱裂解法、煮沸裂解法和SDS碱裂解法．这些方法可以纯化共价闭合环结构质粒DNA，而大量获得高纯度的闭环结构质粒DNA最经典方法是氯化铯．溴化乙锭密度梯度离心法．该方法经过我们的实践与优化，减少了质粒中蛋白质和基因组DNA的污染，提高了质粒的纯度和得率，所得到的质粒用于拟南芥原生质体转化，效率高达60％～70％，明显高于普通的质粒小量抽提试剂盒所提取的质粒DNA．

拟南芥ch1-4的图位克隆以及参与光形态建成分析

拟南芥通过光受体对外界光信号进行感知并将信号进一步传递,通过影响相关基因的表达,进而调控其生长发育.通过正向遗传筛选分离到一株在蓝光下发育缺陷的突变体,随后对其进行了图位克隆,发现是由CH1蛋白267位半胱氨酸突变为精氨酸引起的发育缺陷.通过等位突变体分析证实,ch1突变体在蓝光和红光下分别表现为下胚轴缩短和伸长的表型,说明CH1影响拟南芥的光形态建成.文章不仅揭示了叶绿素酸酯加氧酶CH1参与光形态建成,也为光信号网络的完善提供了重要信息.

拟南芥DA1-Related Protein2基因参与调控植物对盐胁迫的响应

土壤盐渍化是目前农业生产面临的主要问题之一,同时种子萌发转绿作为植物幼苗形态建成的基础对盐胁迫最为敏感。本研究以Col-0、Ler野生型拟南芥和osr1短根突变体拟南芥为试验材料,通过图位克隆方法得到调控根生长的DAR2(DA1-Related Protein 2)基因。本研究利用RT-PCR方法,发现生长10 d的Col-0幼苗在200 mmol·L 1氯化钠条件下处理6 h和12 h,DAR2基因受盐胁迫诱导;200 mmol·L 1氯化钠处理后,组织化学染色结果显示,萌发1 d的根尖韧皮部和3 d的叶片pDAR2::GUS的表达上升,进一步表明DAR2基因受到盐胁迫的诱导。统计不同MS培养基[0(CK)、100 mmol·L 1氯化钠、150 mmol·L 1氯化钠、200 mmol·L 1氯化钠、150 mmol·L 1氯化钾、200 mmol·L 1甘露醇]上Col-0和dar2-3的萌发率和转绿率发现:随着氯化钠浓度的逐渐增大,突变体无论萌发还是转绿时间明显比野生型晚。在150 mmol·L 1氯化钾和200 mmol·L 1甘露醇培养条件下,萌发和转绿的时间也比野生型要晚。这些结果表明突变体在萌发和转绿期对盐胁迫的敏感性比野生型明显增强,进一步证明了突变体对盐胁迫的敏感性并不是对离子的特异响应。这些研究结果为深入了解逆境胁迫下植物早期生长发育的可塑性调控机制奠定了基础,同时也为通过生物技术改良作物抗逆性提供了理论依据。

拟南芥NF-YC9重组蛋白的制备

NF-YC9是模式植物拟南芥核因子Y家族成员之一,在开花调控等过程中发挥重要作用,但其蛋白的特性及其作用的分子机制尚待探究。本文首先扩增获得了NF-YC9基因的序列,采用重组技术构建了与麦芽糖结合蛋白MBP编码基因融合的重组表达载体,将其转化到大肠杆菌BL21中,进行了MBP-NF-YC9融合蛋白的诱导表达,并借助直链淀粉亲和层析介质纯化技术获得了电泳纯的MBP-NF-YC9重组蛋白,以备进一步对NF-YC9蛋白的生化特性进行全面检测。

lncRNA的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是指长度大于200个核苷酸的不参与蛋白质编码过程的DNA转录产物。近年来,这类lnc RNA在表观遗传、转录及转录后水平上调控基因表达方面的研究比较广泛,已获得较为深刻的认知。最近人们认识到lnc RNA在许多的生理、病理途径中发挥着一定的作用,比如干细胞全能性、神经生长分化与肿瘤发生等。本文主要介绍lnc RNA在人及动物中的功能及相关的研究进展。

多媒体在幼儿教学中的应用

如何让多媒体在幼儿教育教学中得到经常化应用,特别是课堂教学中发挥不可替代的作用,是每个教师值得研究思考的重要课题。教师应当在遵循幼儿教育规律、幼儿认知规律的基础上,以更加积极的心态深入广泛开展多媒体在幼儿教育教学,特别是日常课堂教学中的应用和实践,这对办好人民满意的幼儿教育,促进幼儿教育质量提高大有裨益。基于此,笔者从三个方面进行了详细的阐述。

拟南芥lfr突变体盐胁迫表型分析

土壤盐渍化是影响农作物生长、发育及产量的非生物胁迫之一,对参与盐胁迫响应的功能基因的研究将有助于揭示植物胁迫响应的分子机制。本实验室前期报道的拟南芥LFR(Leaf and Flower Related)是一个表达广泛、编码细胞核定位蛋白、影响叶和花发育的重要功能基因。本文以lfr功能缺失突变体为实验材料,观察了不同浓度盐处理下的种子萌发、子叶转绿、主根生长及成苗生长表型,结果表明lfr突变体对盐胁迫敏感;定量RT-PCR检测表明在Na Cl处理下,盐胁迫SOS信号通路中的SOS1在lfr中的受诱导程度显著低于野生型,这与lfr突变体盐敏感表型相吻合,可能是导致lfr突变体对盐胁迫敏感的诱因之一。上述结果预示着LFR可能通过调控SOS1基因的转录表达,参与植物对盐胁迫的响应。