丹参酮ⅡA对内毒素血症小鼠心肌损伤的预防作用及机制

目的观察脂多糖诱导小鼠内毒素血症发生时的心肌损伤情况,及丹参酮ⅡA(TⅡA)对心肌损伤有无预防保护作用,是否与RhoA/Rock(Rho激酶)通路激活有关。方法雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠40只,SPF级,体重(20±2)g,依据随机数字表法将小鼠随机分成空白对照组(CON组)、模型组(LPS组)、丹参酮预处理组(TL组)以及丹参酮组(T组)(n=10)。利用腹腔注射脂多糖(LPS)建立内毒素血症模型。TL组和T组,注射丹参酮10mg/(kg·d)共7d;CON组,LPS组生理盐水等体积注射7d。LPS组、TL组末次注射1h后,腹腔注射LPS(10mg/kg)。LPS注射6h后,超声心动图测定小鼠心功能。12h后,心肌组织做HE染色,光镜下观察小鼠心肌形态结构的变化;酶联免疫吸附实验,检测心肌组织白介素-1β(IL-1β)的蛋白水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测小鼠心肌组织RhoA和Rock1的蛋白含量。结果超声心动图结果表明,与CON组比,LPS组和TL组,心率(HR)、射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、每搏输出量(SV)和心输出量(CO)均下降(P<0.05),与LPS组相比,TL组HR、SV、EF、FS和CO均升高(P<0.05);HE染色显示,LPS组心肌组织横纹模糊,胞浆淡染,有炎细胞浸润,TL组未见心肌组织形态学明显改变;与CON组相比,LPS组心肌组织IL-1β、RhoA和Rock1蛋白含量均升高(P<0.05),与LPS组相比,TL组可以降低IL-1β、RhoA和Rock1蛋白含量(P<0.05)。结论内毒素血症引起的小鼠心肌损伤,在丹参酮ⅡA预处理下,可以降低炎性因子,减轻损伤,其作用可能与抑制RhoA/Rock(Rho激酶)通路激活有关。

结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统与生物膜

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)是引起结核病的病原菌。其处于持续生存的休眠状态时,可导致长期无症状感染,称为结核潜伏感染。研究显示,结核分枝杆菌染色体中存在大量"毒素-抗毒素系统"(toxin-antitoxin system,TAS),某些TAS在潜伏感染中发挥作用,可调节细菌生长和诱导细菌进入休眠状态;某些TAS参与生物膜形成和应激反应,但其影响生物膜形成的机制尚未阐明。生物膜中的结核分枝杆菌对多种抗结核药物耐药,且能抵抗宿主免疫系统防御;休眠状态的结核分枝杆菌对抗结核药物通常也是耐受的,给结核病治疗带来了巨大挑战。本文就近年来结核分枝杆菌TAS与生物膜的研究及抗结核药物对生物膜形成的影响进行综述。

qRT-PCR检测结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统mazE F的表达

目的探讨结核分枝杆菌毒素基因mazF3,6,9及抗毒素基因mazE3,6,9的表达差异。方法运用实时定量PCR检测结核分枝杆菌单耐药株20株,耐多药株20株和标准株H37Rv毒素基因mazF3,6,9及抗毒素基因mazE3,6,9的表达水平;组间基因表达水平的差异用one-way ANOVA进行统计分析。结果与对照株相比较,毒素基因mazF6,9在单耐药组(11.151 9±22.317 21;8.430 6±17.978 97)及耐多药组(4.601 6±1.290 18;6.962 7±6.929 48)表达均上调且差异有统计学意义(P<0.01),mazF3基因在单耐药组及耐多药组差异无统计学意义(P>0.05),抗毒素基因mazE3在单耐药(0.360 6±0.125 27)及耐多药组(0.201 6±0.165 42)中表达均下调,差异有统计学意义(P<0.01),mazE6均无统计学意义,mazE9只有在耐多药组(0.398 9±0.376 79)中表达下调,差异有统计学意义,(P<0.01)。结论毒素基因mazF6,9抗毒素基因mazE3,9可能参与了结核分枝杆菌的耐药形成,具体机制尚待进一步的研究。

急性冠状动脉综合征病人小而密低密度脂蛋白、游离脂肪酸与Gensini评分的相关性研究

目的:探讨血浆小而密低密度脂蛋白(sdLDL)、游离脂肪酸(FFA)水平与急性冠状动脉综合征(ACS)的关系,评估sdLDL、FFA与Gensini评分的关系。方法:选取282例疑似ACS病人,经冠状动脉造影确诊,分为急性心肌梗死(AMI)组92例,不稳定心绞痛(UAP)组110例、冠状动脉硬化组30例和冠状动脉正常组50例;择同期100名健康体检者作为健康对照组;并根据Gensini评分将冠状动脉异常者分为:≤20分组81例、21～50分组71例和>50分组80例。测定各组血浆sdLDL、FFA、血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白水平,并进行统计分析。结果:AMI组和UAP组sdLDL水平明显升高(P<0.05～P<0.01),2组间差异无统计学意义(P>0.05);健康对照组、冠状动脉正常组、冠状动脉硬化组、UAP组及AMI组FFA水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05～P<0.01);ACS病人sdLDL水平与Gensini评分无相关性(r=0.117,P>0.05);ACS病人FFA水平与Gensini评分呈弱正相关(P<0.05);冠状动脉异常者FFA水平随着Gensini评分的升高而升高,差异有统计学意义(P<0.05～P<0.01);AMI组和UAP组各Gensini组间FFA水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:sdLDL与FFA与ACS的发生密切相关,FFA可能是一个判断冠状动脉狭窄程度潜在指标。

北京和非北京基因型结核分枝杆菌生长曲线及mazEF系统的研究

目的研究北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达有无差异。方法测绘上述菌株及其mazEF3,6,9基因缺失和过表达菌株在标准、低氧和营养饥饿培养条件下的生长曲线。使用qRT-PCR技术检测各菌株的mazEF3, 6, 9、mazF3, 6,9和mazE3, 6,9基因mRNA表达水平;利用Western Blot技术检测MazF9蛋白表达水平。结果在标准和低氧条件下培养的第4、6、8、10 d,营养饥饿条件下培养的第2、4、6、8 d,北京基因型菌株的OD值(细菌数量)均高于非北京基因型菌株,差异有统计学意义(P<0.05);在上述3种培养条件下,北京和非北京基因型mazEF3,6,9缺失突变株和过表达株菌数均低于其亲本株。在mRNA、蛋白水平上,与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株mazEF3高表达9.55倍、mazF3高表达4.86倍、mazF6高表达2.64倍、mazF9高表达5.27倍和mazE9低表达0.16倍;mazF9蛋白高表达1.62倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达存在差异,mazEF系统与北京基因型菌株流行相关。

mazEF系统及生物膜对北京基因型结核分枝杆菌生存能力的影响

目的探索生物膜形成能力、mazEF3,6,9系统的表达与北京基因型结核分枝杆菌生存力的相关性。方法检测北京、非北京基因型菌株与标准毒力株H37Rv在不同培养条件下的生存力、生物膜形成能力。采用PCR技术扩增上述菌株的mazE3,6,9系统,并进行基因测序;使用荧光定量PCR检测所有菌株的mazEF3,6,9基因、mazF3,6,9毒素基因和mazEF3,6,9抗毒素基因的mRNA表达水平;利用WesternBlot技术检测MazF9蛋白表达水平。结果北京基因型菌株在不同培养条件下的生存力、生物膜形成能力高于非北京基因型菌株。北京、非北京基因型菌株mazF3基因193bp处发生碱基突变,由C突变为T。在mRNA表达水平上,与H37Rv相比,北京、非北京基因型菌株中mazE3低表达;非北京菌株中mazE6低表达,mazE9高表达(P<0.05)。与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株中mazEF3高表达、mazE9低表达、mazF3、mazF6、mazF9高表达,mazF9蛋白高表达(P<0.05)。结论北京基因型菌株具有较强的生存力和生物膜形成能力。mazEF系统的差异表达、生物膜成膜能力强可能与北京基因型菌株生存能力强相关。

结核分枝杆菌标准株H37Rv mazEF3基因过表达菌株的构建及初步鉴定

为构建H37Rv mazEF3基因的过表达菌株,检测过表达菌株mazEF3 mRNA表达水平。使用穿梭质粒pMV361,把mazEF3基因连入其中,构建重组质粒pMV361-mazEF3;利用电穿孔技术,将穿梭表达质粒导入H37Rv中,并将该菌涂在卡那霉素培养基上初步筛选,提取阳性菌株质粒进行PCR、双酶切后送公司测序进一步验证;检测不同电转电压下mazEF3 mRNA表达水平,寻找最佳电转电压。结果显示,成功构建H37Rv mazEF3基因的过表达菌株,PCR、双酶切后目的基因,测序结果与已知mazEF3基因比对,同源性100%。实时荧光定量检测,电转电压为2300V时,构建的过表达菌株mazEF3 mRNA表达量最高。由此可知,成功构建及初步鉴定了mazEF3 mRNA过表达菌株,电转电压为2300V时,构建的过表达菌株mazEF3 mRNA表达量最高。

蚌埠市医务人员对医疗废物认知情况的调查分析

研究安徽省蚌埠市医务人员对于医疗废物处理相关知识的认知情况及其影响因素,为相关部门对医疗废物的管理提供理论依据。方法:采用自制调查问卷的形式,探究蚌埠市28家医疗卫生机构医务人员对医疗废物的认知情况及相关影响因素。共发放问卷114份,回收有效问卷111份,问卷有效回收率 97%。结果:单因素分析结果显示,从学历分布来看,硕(博)士知晓率最高,为93.75%((2=7.046,P=0.030);从医年限16年以上的医务人员知晓率最高,为95.31% ((2=11.109,P=0.025);从岗位角度来看,医技人员知晓率91.88%为最高((2=11.508,P=0.021);医技和后勤人员Q4知晓率分别是97.50%和100%,明显高于其他组别((2=12.85,P=0.012)。经培训的医务人员知晓率为89.47%,高于未经培训组的84.64%((2=4.222,P=0.040)。多因素Logistic回归分析显示,医疗废物处理相关法律和专业技术、安全防护以及紧急处理等知识培训经历[OR值及其95%CI为2.90(1.19~7.10)]、学历[OR值及其95%CI为4.28(0.92~20.00)]是医务人员对医疗废物认知程度的影响因素。结论:学历较高、从医年限较长及经过培训的医务人员对医疗废物认知水平较高,各医院仍应加强对医疗废物的管理,积极开展医疗废物处理相关知识培训。

父母控制同伴关系与初中生攻击行为的关系

目的了解父母控制水平、同伴关系和初中生攻击行为的关系,为预防青少年攻击行为的发生提供理论依据。方法于2022年6—7月,采用方便整群随机抽样方法,选取安徽省宿州市、宣城市6所初中学校中初一至初三的2564名学生为研究对象,采用父母控制问卷、Buss和Perry攻击问卷中文版和初中生同伴关系量表进行问卷调查。结果男生在父母控制、父亲心理控制、母亲心理控制、父亲行为控制、母亲行为控制中得分(185.31±27.49,21.65±7.43,21.77±8.18,69.50±11.41,72.39±11.53)均高于女生(178.21±25.13,20.08±7.09,20.61±7.62,66.56±11.14,70.95±11.84)(t值分别为8.63,5.47,3.70,6.60,3.12),女生的同伴关系得分(48.41±11.26)高于男生(47.13±10.84)(t=2.95);初一年级学生在父母控制、父亲心理控制、母亲心理控制、父亲行为控制、同伴关系和攻击行为维度的得分(184.67±27.18,21.83±7.29,22.15±8.07,68.81±10.95,50.21±9.57,80.23±17.66)均高于初二(180.98±25.46,20.16±7.82,20.21±7.55,68.29±11.69,45.47±11.67,74.08±17.70)和初三(179.21±26.79,20.53±7.22,21.17±8.06,66.81±11.39,47.54±11.43,75.75±16.29)年级(F值分别为9.44,12.87,13.61,6.84,42.85,30.40)(P值均<0.01)。父母控制、同伴关系得分均与攻击行为得分呈正相关(r值分别为0.22,0.47,P值均<0.01)。同伴关系在父母控制和攻击行为之间起部分中介作用,中介效应值为0.04,占父母控制对攻击行为总效应的26.39%。结论父母控制高及同伴关系差与攻击行为水平均呈正相关。应通过建立良好的家庭教养模式,抵制校园暴力、维护良好社会准则等方式改善初中生的同伴关系,以减少攻击行为的发生。

lncRNA在结核病患者外周血的差异性表达

目的比较活动性肺结核患者、潜伏感染者与健康对照者外周血结核分枝杆菌特异性抗原刺激前后lncRNA1和lncRNA2的差异性表达,探讨其作为诊断结核分枝杆菌感染生物标志物的可能性。方法收集活动性肺结核患者、潜伏感染者和健康对照者全血,分别在特异性抗原刺激前后提取RNA,利用实时荧光定量PCR方法检测lncRNA1和lncRNA2的mRNA表达水平。应用ELISA检测血浆中IFN-γ和IL-2含量。结果结核分枝杆菌特异性抗原刺激前,结核病组、潜伏感染组全血lncRNA1相对表达量较健康对照组分别下降32%和64%;lncRNA2结核病组相对表达量是健康对照组的6.10倍;抗原刺激后,结核病组、潜伏感染组lncRNA1相对表达量较健康对照组分别下降33%和77%,lncRNA2潜伏感染组相对表达量较健康对照组下降84%。与刺激前相比,抗原刺激后健康对照组、结核病组lncRNA1相对表达量分别提高1.80倍和2.80倍,lncRNA2健康对照组、潜伏感染组分别提高3.50倍和1.86倍(P<0.05)。健康组与潜伏感染组、结核病组与潜伏感染组、健康组与结核病组lncRNA1ROC曲线下面积(AUC)分别为0.700、0.752和0.400,lncRNA2的AUC分别为0.702、0.465和0.762。在结核特异性蛋白刺激前,结核病组IFN-γ、IL-2含量均高于健康组(P<0.05),刺激后,结核病组及潜伏感染组与健康组相比较、潜伏感染组与结核病组相比较IFN-γ均增高(P<0.05)。与刺激前相比,刺激后3组IFN-γ、IL-2诱导表达量均显著增高(P<0.05)。结论活动性结核病、潜伏感染和健康对照者全血结核特异性抗原刺激前后lncRNA1和lncRNA2均出现差异性表达,结核病及潜伏感染者血浆IFN-γ含量增高。lncRNA1和lncRNA2可能是诊断肺结核感染的潜在生物标志物。

实时荧光定量PCR对结核病潜伏感染快速诊断的研究

目的探讨7种细胞因子的mRNA表达水平作为诊断结核分枝杆菌潜伏感染生物标志物的可能性。方法健康对照64人,活动性肺结核50人,结核分枝杆菌潜伏感染60人,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结核特异性抗原刺激的外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-10、IFI35、CXCL10及Foxp3的mRNA表达水平。结果 7种因子相对表达量在活动性肺结核组分别为2.33±0.09、4.94±0.45、150±17.82、2.02±0.55、9.53±5.96、5.56±0.97、1.24±0.17,潜伏感染组分别为3.2±0.61、10.04±1.89、202±17.6、21.89±10.25、29.17±11.19、41.35±11.46、2.14±0.67,健康组分别为1.2±0.08、2.92±0.03、53±17.82、1.48±0.17、1.28±0.77、1.63±0.25、1.03±0.67。潜伏感染组与健康组相比7种细胞因子的mRNA表达水平,差异均有统计学意义(P<0.01),相应细胞因子检测的敏感性、特异性分别为95.1%、82.5%,92.5%、88.7%,91.9%、90.1%,88.2%、51.5%,74.2%、61.2%,81.8%、73.4%和80.4%、51.3%;潜伏感染组和活动性结核组比较除IFI35因子外,其余6种细胞因子的mRNA表达水平差异均有统计学意义(P<0.05),相应细胞因子检测的特异性、敏感性分别为90.6%、80%,88.6%、92.7%,91.9%、86.2%,57.6%、60%,50%、58%,76%、72.2%和66.7%、67.1%;健康对照组和活动性结核组相比较,7种细胞因子的mRNA表达水平差异均有统计学意义(P<0.01),相应细胞因子检测的敏感性、特异性分别为92.3%、90%,88.6%、86.7%,94.4%、86.7%,89.7%、65.8%,82.4%、63.3%,88.2%、70%和92.9%、72.1%。结核病密切接触者潜伏感染率为48.97%,健康组潜伏感染率为36%。结论结核病患者血清TNF-α、IFN-γ、IL-2mRNA水平升高,以潜伏感染者升高更显著,因此可作为诊断结核分枝杆菌潜伏感染的生物标志物。