临床分子生物学检验实习的带教体会

随着医学科学的进步,临床对疾病的诊断和鉴别诊断越来越离不开检验医学,而传统的检验医学技术已不能满足临床的需要,分子生物学检验已成为检验医学重要的组成部分,并发挥着越来越重要的作用。分子生物学检验以聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术为核心,广泛地运用于临床,如感染性疾病的诊断、白血病融合基因检测、

四川东北地区女性生殖道感染沙眼衣原体、淋球菌和解脲脲原体的结果分析

目的分析川东北地区2005~2012年女性生殖道沙眼衣原体(CT)、淋球菌(NG)和解脲脲原体(UU)感染状况及变化趋势,为该类患者的诊断和治疗提供实验室依据。方法应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术对1 386例女性生殖道标本进行CT、NG、UU病原体DNA检测,并对结果进行统计分析。结果 3种病原体的总阳性率为62.8%(871/1 386)。单纯感染中以UU阳性率最高,为48.0%(665/1 386);CT、NG阳性率为仅为2.2%。混合感染以CT+UU阳性率最高,为6.5%(90/1 386);UU+NG阳性率为2.5%(35/1 386);CT+NG阳性率为0.4%(5/1 386);CT+UU+NG阳性率为1.1%(15/1 386)。不同年龄段中,小于20岁组阳性率为49.3%,而大于20岁组中均超过60%。2005~2012年间,女性CT、NG、UU病原体阳性率持续高水平且总体呈上升趋势。结论 CT和UU是该地区女性生殖道感染的主要病原体,并以20岁以上生殖道感染者阳性率均较高,3种病原体感染率呈逐年上升趋势,应该重视该人群CT和UU的检测以指导临床医师对患者的诊断和治疗。

四川东北部地区女性高危型人乳头瘤病毒感染情况分析

目的分析四川东北部地区女性人群高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染情况、基因型分布及患者年龄特征,为预防HPV感染和治疗提供理论依据。方法采用实时荧光定量PCR技术,对川北医学院附属医院6 959例女性筛查者进行高危型HPV亚型检测,并对患者年龄进行分析。结果 6 959例筛查者中共检出HPV阳性患者1 135例,阳性率为16.31%。不同年龄段女性中,30~<40岁和40~<50岁两个年龄段感染率较高,分别为41.76%、42.91%,与20~<30岁年龄段相比,差异均有统计学意义(χ~2=136.2、P<0.05,χ~2=148.9、P<0.05)。所检测的13种HPV亚型中,HPV16、HPV52和HPV58型最常见,分别占24.85%、26.34%和21.59%。结论四川东北地区女性人群高危型HPV感染率高,以HPV16、HPV52和HPV58型最高,患者易感年龄为30~<50岁,临床医师应该重视此类人群的筛查,对降低女性宫颈癌的发生有重要的意义。

川东北地区泌尿生殖道感染女性患者人乳头瘤病毒感染情况分析

目的了解川东北地区泌尿生殖道感染女性患者人乳头瘤病毒(HPV)感染状况及其基因亚型。方法选取来自南充、遂宁、广安、达州等四川东北地区的女性泌尿生殖道感染患者1 193例,采集其宫颈脱落组织,应用基因芯片技术进行HPV分型检测。结果 HPV总阳性检出率为49.12%(586/1 193),其中高危型HPV、低危型HPV、混合型HPV感染率分别为31.43%、30.60%、18.86%;高危型HPV检出率最高的是HPV16(14.17%),其他高危型HPV的感染率从高到低依次为HPV58、HPV33、HPV18、HPV52、HPV56、HPV35、HPV31/HPV59、HPV45/HPV68、HPV53、HPV66、HPV73、HPV83/HPVMM4、HPV51;低危型HPV检出率最高的是HPV6(15.00%),其他低危型HPV的感染率从高到低依次为HPV11、HPV43、HPV42;而HPV39、HPV44未检测到。HPV阳性患者中,41～50岁年龄段的高危型HPV感染比例最高,≤20岁年龄段低危型HPV的感染比例最高。结论川东北地区女性HPV感染率高,HPV的感染率与年龄有一定关系;HPV16、HPV58和HPV33是最主要的高危型感染型别,HPV6、HPV11是最主要的低危型感染型别。

实时荧光PCR法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的应用实时荧光PCR法检测临床标本中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。方法收集40份分离鉴定含有MRSA的临床标本,应用实时荧光PCR法检测标本中的mecA基因和nuc基因,并与vitek2-compact细菌快速培养和药敏检测系统、MRSA鉴定培养基结果进行比较。结果实时荧光PCR法检测出36份mecA基因、nuc基因均为阳性的含有MRSA的临床标本。实时荧光PCR法与vitek2-compact细菌鉴定、MRSA鉴定培养基检测临床标本中的MRSA具有较好的一致性,MRSA检出率分别为90%、100%和95%,三者差异无统计学意义(χ2=7.62,P>0.05)。结论实时荧光PCR法检测临床标本中的mecA基因和nuc基因,可以直接、有效地筛查MRSA,可免去培养、常规生化鉴定,为临床上MRSA的检测提供一种快速、有效的方法。

乙型肝炎病毒YMDD变异株的检测及其临床意义

目的：探讨慢性乙型肝炎患者 HBV YMDD变异的情况、相关影响因素及临床意义，为临床诊断和治疗提供依据。方法对100例慢性乙型肝炎患者采用实时荧光PCR法检测血清中HBVYMDD变异及HBVDNA载量。结果100例乙肝患者中检出HBV YMDD变异共13例（阳性率13％），其中YIDD变异7例，YVDD变异5例，YIDD／YVDD共生变异1例。13例YMDD变异患者 HBV DNA在（1．77×105～1×108） IU／mL ，丙氨酸转氨酶（ALT ）水平18．1～273．5 U／L。结论未发现慢性乙型肝炎患者的性别、年龄、乙型肝炎E抗原（HBeAg）状态、HBV DNA载量及ALT水平与 HBV YMDD变异检出率之间存在相关性，差异无统计学意义（P＞0．05）。

3种实时荧光PCR试剂在结核分枝杆菌核酸检测中的临床应用评价

目的评价不同结核分枝杆菌核酸(TB-DNA)试剂盒的性能和应用。方法本文通过采用中山达安、德国凯杰及上海之江TB-DNA检测试剂盒平行检测抗酸染色阳性的临床标本,并用非结核病患者标本来验证假阳性率。结果 44例抗酸染色阳性标本中,中山达安试剂盒检测出44例TB-DNA阳性,德国凯杰试剂盒检测出43例阳性,上海之江试剂盒检测出40例阳性;3种试剂盒检测20例非结核患者的标本,TB-DNA均为阴性。3种试剂盒的阳性检出率分别为100%、97.7%和90.9%,差异无统计学意义(χ2=5.40,P>0.05)。结论各实验室可灵活选择临床检测试剂盒。

某地区女性泌尿生殖道感染患者人乳头瘤病毒感染现状调查

目的研究该地区女性泌尿生殖道感染患者人乳头瘤病毒(HPV)感染状况及HPV阳性患者HPV基因型分布状况,确定该地区HPV感染的优势型别。方法采用基因芯片技术对591例女性泌尿生殖道感染患者进行HPV检测。结果检出HPV阳性者288例,检出率为48.73%;低危型感染116例,占40.28%,高危型141例,占48.96%,混合型感染31例,占10.76%;低危型感染以HPV6、11型为主,分别占48.28%、42.24%;高危型感染以HPV16型为主,占43.26%。HPV易感年龄阶段为20～<40岁,占所有感染者的63.54%。结论该地区女性泌尿生殖道感染患者HPV感染率较高,以高危型感染为主,且存在与低危型混合感染的可能。

男性患者泌尿生殖道感染病原体调查分析

目的：检测川东北地区男性泌尿生殖道沙眼衣原体（CT ）、淋菌（NG）和解脲脲支原体（Uu）感染，为该类患者的诊治提供实验室依据。方法收集2005年1月－2013年3月医院男性泌尿生殖道标本1557份，采用实时荧光定量聚合酶链反应对标本中 CT 、NG 、Uu 3种病原体进行 DNA 检测，并对标本来源和患者年龄进行分析。结果 3种病原体中至少一种感染503例阳性，阳性率为32．3％；单独感染 Uu 233例 ，阳性率为15．0％，CT 感染127例，阳性率为8．2％，NG 感染35例，阳性率为 2．2％；混合感染中 CT ＋ Uu 阳性率最高为3 ．8％；不同来源的标本中，尿道分泌物阳性率最高为42．6％；各种类型感染患者均以20～40岁年龄段为主。结论 CT 和 Uu 感染是川东北地区男性泌尿生殖道炎症的原因之一，并且以青壮年为主，应重视该人群的检测与治疗。

四川东北部地区孕妇MTHFR C677T基因多态性分布研究

为了研究四川东北部地区孕妇亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR）基因C677T多态性的分布情况,从而指导孕妇的叶酸补充,我们从我国四川东北部地区收集了2 544例孕妇血液样本,并运用PCR-基因芯片技术检测了MTHFR C677T基因多态性,我们发现这些孕妇的MTHFR基因中突变型CT和TT比野生型CC高22.24%,其中野生型CC占38.88%,杂合突变型CT占47.13%,纯合突变型TT占13.99%（χ2=251.85,p〈0.05）。结合现有对MTHFR基因多态性与流产、不孕、畸胎瘤、神经管缺陷、胚胎停止发育等的研究,我们对MTHFR C677T基因多态性的调查将对相关疾病的临床诊疗有一定指导意义。