罗氏沼虾雌激素相关受体(ERR)基因原核表达与纯化

根据已知罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)雌激素相关受体基因序列(Gen Bank登录号KU899089),设计含有酶切位点的特异性引物,PCR扩增得1 374 bp的开放阅读框序列,构建原核表达载体p ET-32a-ERR,并优化诱导浓度、诱导时间、诱导温度等表达条件。结果表明,ERR蛋白在温度35℃、IPTG浓度0.1 mmol/L条件下,诱导4 h时表达量较佳。

红花黄色素对糖尿病肾病小鼠肾的保护作用及机制研究

目的探讨红花黄色素(safflower yellow,SY)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠的肾保护作用及作用机制。方法采用C57BL/6J雄性小鼠,经腹腔注射STZ(50 mg/kg),连续5 d建立糖尿病小鼠模型。36只造模成功的小鼠随机分为模型组、SY低中高剂量组(10 mg/kg、30 mg/kg、90 mg/kg)。给药组小鼠分别给予不同剂量的SY,每日1次,连续给药10周。监测糖尿病小鼠的体重、血糖,分析血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,HE染色观察肾组织病理形态变化,Western检测PKC、P-Raf、Raf、P-ERK、ERK蛋白的表达水平,ELISA试剂盒检测MDA、SOD、GSH的含量和TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平。结果与正常组比较,模型组的小鼠进食、饮水量增加、体态消瘦、血糖升高。与模型组相比,给药组小鼠的体重上升、血糖下降、BUN、Scr的水平降低;肾小球肥大、基底膜增厚和肾小管空泡样病变得到改善;SOD、GSH含量上升,MDA含量下降;TNF-α、IL-6和IL-1β的表达下降;PKC、P-Raf、P-ERK蛋白的表达减少。结论红花黄色素可以减弱DN炎性损伤和氧化应激损伤,其机制可能与调控PKC/Ras-Raf-MEK-ERK通路有关。

EGCG对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制研究

目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-Epigallocatechin gallate, EGCG)对链脲佐菌素(Streptozocin, STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其作用机制。方法 30只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、EGCG剂量组(10、20、40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),后4组大鼠一次性腹腔注射STZ(65 mg·kg^(-1))建立糖尿病大鼠模型。于造模成功后第一天开始,EGCG各给药组大鼠按上述剂量灌胃给药,正常对照组和模型组大鼠均给予三蒸水10 mL·kg^(-1)·d^(-1)。药物治疗后第6周和第12周测量各组大鼠的体重、饮水量和摄食量。12周后,测量大鼠双肾质量,计算肾指数,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察大鼠肾脏病理变化,全自动生化分析仪检测大鼠24 h尿蛋白及血清中血肌酐(Serum creatinine, Scr)、尿素氮(Blood Urea Nitrogen, BUN)水平,按照试剂盒说明书分别检测大鼠血清中空腹血糖(fasting blood glucose, FBG)、甘油三酯(Triglyceride, TG)、胆固醇(Cholesterol, CHO)、白介素-6(Interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα, TNF-α)水平,免疫组化法检测大鼠肾组织中转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、细胞间粘附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白的表达。结果 给予糖尿病大鼠EGCG 12周,10、20 mg·kg^(-1)·d^(-1)的EGCG可使其饮水量降低(P<0.01)、肾小管上皮细胞空泡样病变有所改善;40 mg·kg^(-1)·d^(-1)的EGCG可使其体重升高(P<0.01),饮水量、摄食量降低(P<0.01)、肾小管上皮细胞空泡样病变明显得到改善;20、40 mg·kg^(-1)·d^(-1)的EGCG可使其血清中Scr下降(P<0.01);10、20、40 mg·kg^(-1)·d^(-1)的EGCG可使糖尿病大鼠血清中FBG、TG和CHO水平降低(P<0.01),肾重和肾脏指数下降(P<0.01),24 h尿蛋白、血清中BUN、IL-6和TNF-α水平下降(P<0.05),肾组织中TGF-β1、ICAM-1蛋白表达下降(P<0.01)。结论 EGCG对糖尿病大鼠肾脏损伤具有改善作用,其机制可能与抑制致纤维化因子TGF-β1、促炎因子IL-6、TNF-α及粘附因子ICAM-1有关。

三七总皂苷对糖尿病肾病小鼠的肾保护作用机制研究

目的研究三七总皂苷(PNS)对糖尿病肾病小鼠的肾保护作用机制。方法按照体重将雄性C57BL/6小鼠随机分为5组:正常组、模型组和低、中、高3个剂量实验组,每组10只。除正常组以外各组小鼠连续5 d腹腔注射链脲佐菌素50 mg·kg^(-1)建立糖尿病小鼠模型。造模后第2天,实验组灌胃相应剂量药物(PNS:50,100,200 mg·kg^(-1)),正常组和模型组灌胃生理盐水,持续8周。检测血肌酸酐(SCr)和尿素氮(BUN);酶联免疫吸附法检测各组小鼠肾组织谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,蛋白质印迹法测定小鼠肾组织中核因子E-2相关因子(Nrf2)、血红素加氧合酶1(HO-1)蛋白的表达。结果正常组、模型组和低、中、高3个剂量实验组SCr水平分别为(8.24±2.02),(25.10±3.67),(23.41±3.33),(18.81±1.49)和(16.00±2.78)μmol·L^(-1);BUN水平分别为(10.64±2.37),(31.25±1.93),(28.53±3.23),(22.90±2.84)和(18.04±2.94)mmol·L^(-1);SOD水平分别为(32.17±4.48),(13.05±4.90),(18.38±4.91),(23.34±3.46)和(24.65±5.83)U·mg^(-1);GSH水平分别为(13.56±0.71),(4.58±0.66),(5.66±0.34),(7.02±0.22)和(9.21±0.72)mmol·g^(-1);IL-6水平分别为(66.56±13.41),(115.68±7.93),(99.28±20.19),(82.33±9.27)和(76.49±10.14)pg·mL^(-1);TNF-α水平分别为(89.59±15.45),(152.86±26.64),(149.03±17.97),(123.31±13.42)和(111.99±6.49)pg·mL^(-1);Nrf2/β-actin比值分别为0.29±0.14,0.34±0.19,0.70±0.35,0.81±0.34和0.95±0.34;NQO1/β-actin比值分别为0.22±0.12,0.30±0.10,0.45±0.15,0.51±0.16和0.64±0.16。上述指标:模型组与正常组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);中、高2个剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PNS对STZ诱导的糖尿病小鼠肾组织损伤具有保护作用,其机制可能与PNS激活Nrf2/HO-1信号通路达到的抗氧化应激、抗炎作用有关。

基于网络药理学探讨瘀血痹片的抗炎作用机制

目的:以网络药理学探讨瘀血痹片的抗炎作用机制,并进行实验验证。方法:经由Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform(TCMSP)数据库、SwissTargetPrediction数据库、Uniprot数据库确定瘀血痹片11味中药的活性成分及作用靶点;于GeneCards数据库获取炎症相关靶点;将瘀血痹片作用靶点及炎症靶点在Venny 2.1中得到的交集靶点,通过STRING 11.0数据库建立蛋白质相互作用(PPI)网络模型,并于DAVID数据库对靶点富集分析;采用Cytoscape 3.7.2构建“瘀血痹片-潜在活性成分-靶点”网络图及“炎症靶点-通路”网络图。通过角叉菜胶致炎小鼠模型证明瘀血痹片抗炎作用,通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6的含量,蛋白印迹(Western Blot)法检测ERK1/2、JNK、p38以及NF-κB p65蛋白的表达,进一步验证其作用机制。结果:通过网络药理学分析,瘀血痹片抗炎的核心成分包括槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、山柰酚、木犀草素等,关键靶点包括PTGS2、RELA、TNF、MAPK1、MAPK14等,可能通过RNA聚合酶Ⅱ启动子对转录的正调控、炎症反应、一氧化氮生物合成过程的正调控、细胞对脂多糖的应答、脂多糖介导的信号通路等;T细胞受体信号通路、NOD样受体信号通路、类风湿关节炎、Toll样受体信号通路、TNF信号通路等发挥抗炎作用。在动物实验方面,与正常对照组相比,模型对照组小鼠足肿胀度显著增加,血清TNF-α、IL-1β及IL-6含量显著升高,小鼠足爪组织ERK1/2、JNK、p38及NF-κB p65蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,瘀血痹片1.5 g/kg组小鼠在致炎后第6 h足肿胀度显著降低,血清炎症因子IL-1β及IL-6含量显著降低,小鼠足爪组织ERK1/2、JNK、p38及NF-κB p65蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论:瘀血痹片可以降低角叉菜胶致炎小鼠模型足肿胀度及血清炎症因子水平,可能通过下调足爪组织ERK1/2、JNK、p38以及NF-κB p65蛋白表达,发挥抗炎作用。