蒽醌修饰物KA-4s抑制SKOV3/DDP细胞增殖并诱导铁死亡

目的:探讨蒽醌修饰物KA-4s在体外对人顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖的影响和诱导细胞铁死亡的机制。方法:将SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度(2μmol/L、5μmol/L和7μmol/L)的蒽醌修饰物KA-4s组。采用MTT法检测单药KA-4s和顺铂(DDP)对SKOV3/DDP细胞活力的影响,划痕实验检测细胞的迁移能力,线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)检测线粒体形态改变,透射电镜观察线粒体超微结构。以铁死亡诱导剂RSL3为阳性对照组,用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,比色法检测细胞内总铁蛋白含量,western blotting检测铁死亡相关蛋白GPX4、FSP1的表达情况。结果:KA-4s和顺铂作用48 h后,卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制,相比顺铂,KA-4s的抑制作用更强(P<0.001),并能抑制细胞迁移。经KA-4s处理后线粒体受损,线粒体结构改变,膜密度增大,嵴减少甚至消失。与空白对照组相比,阳性RSL3组和KA-4s组SKOV3/DDP细胞内ROS水平升高(均P<0.001),5μmol/L KA-4s组总铁离子含量显著升高(P<0.001),卵巢癌SKOV3/DDP细胞中GPX4、FSP1蛋白的表达均降低(P<0.01),但正常卵巢IOSE80细胞中GPX4表达均无改变。结论:KA-4s能抑制SKOV3/DDP细胞增殖、迁移并诱导细胞铁死亡。

蒽醌修饰物4X触发内质网应激诱导卵巢癌细胞死亡模式研究

目的:探究蒽醌修饰物4X诱导卵巢癌细胞SKOV3和顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP的死亡模式和作用机制。方法:分别将SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度(2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L)蒽醌修饰物4X组。采用MTT法检测细胞增殖率,苏木精-伊红(HE)染色观察细胞形态,线粒体绿色荧光探针观察线粒体形态,透射电镜观察细胞超微结构,western blotting法检测内质网应激相关蛋白(GRP78、PERK)、凋亡蛋白(CHOP)和铁死亡关键蛋白(GPX4)的表达。加入凋亡抑制剂Z-VAD-FMK,与蒽醌修饰物4X共处理,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:蒽醌修饰物4X作用48 h后,SKOV3和SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制(P<0.05)。经蒽醌修饰物4X处理后SKOV3和SKOV3/DDP细胞质出现明显空泡,且部分空泡累及细胞核,SKOV3和SKOV3/DDP均有明显的线粒体损伤;经蒽醌修饰物4X处理后细胞线粒体固缩,膜密度增高,嵴消失。与对照组相比,蒽醌修饰物4X组SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡率升高(P<0.05),联用ZVAD-FMK可抑制蒽醌修饰物4X对细胞凋亡的促进作用(P<0.05)。蒽醌修饰物4X可不同程度地下调SKOV3和SKOV3/DDP细胞GRP78、PERK、ATF4和CHOP的表达,上调GPX4表达(均P<0.05)。结论:蒽醌修饰物4X可能在诱导内质网应激的同时诱导SKOV3和SKOV3/DDP细胞发生凋亡和铁死亡,从而发挥抗卵巢癌作用。

蒽醌修饰物KA-4c触发内质网应激靶向ATF6抗乳腺癌细胞作用机制

目的探讨蒽醌修饰物KA-4c抗乳腺癌细胞的作用机制,并采用药物亲和力反应靶标稳定性技术(drug affinity responsive target stability,DARTS)确定其作用靶点。方法MTT法检测细胞活力;HE染色、ER-Tracker Red、电镜研究KA-4c对乳腺癌细胞形态学等的影响;流式细胞术检测KA-4c是否诱导细胞凋亡,Western blot实验检测凋亡蛋白表达;DARTS、细胞热移位分析(cellular thermal shift assay,CETSA)技术确定KA-4c的作用靶点。结果KA-4c对三阴性乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖抑制效果最为明显,并可导致内质网和线粒体空泡化而损伤细胞,凋亡率随KA-4c浓度增加而升高,凋亡相关蛋白CHOP、caspase-7随KA-4c浓度增加表达增强。DARTS结果显示,KA-4c可激活内质网蛋白加工信号通路,其中KA-4c与ATF6蛋白结合而耐受蛋白酶水解;CETSA实验结果表明,KA-4c可呈浓度依赖性增强ATF6蛋白的表达。结论KA-4c触发内质网应激诱导乳腺癌细胞凋亡,ATF6可能是KA-4c的作用靶点之一。