益气化瘀化痰法对肺纤维化大鼠TGF-β_1、PAI-1的影响

目的探讨益气化瘀化痰法对肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)及纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的影响。方法采用气管内一次性注射博来霉素5mg/kg诱导生成肺纤维化大鼠模型。将105只SD大鼠分为:正常对照组、模型组、益气组、化瘀组、化痰组、益气化瘀化痰组、激素组。正常对照组和模型组采用生理盐水灌胃,其余各组于造模后28d分别给予益气汤、化瘀汤、化痰汤、益气化瘀化痰汤30g.kg-1.d-1灌胃,激素组给予皮下注射氢化可的松20mg.kg-1.d-1干预,2个月后处死各组大鼠,ELISA法检测各组大鼠血浆PAI-1含量,Western blot法检测各组大鼠肺组织TGF-β1蛋白表达。结果益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰组大鼠血浆PAI-1含量水平较模型组均降低(P<0.05),其中益气化瘀化痰组降低最显著(P<0.05);益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰组大鼠肺组织TGF-β1蛋白表达较模型组均减弱(P<0.05),尤以益气化瘀化痰组减弱最明显(P<0.05)。结论益气、化瘀、化痰法能显著改善博来霉素所致大鼠肺纤维化的程度,其机制可能与抑制TGF-β1及PAI-1的表达有关。

固有免疫信号因子MyD88在CCl_4致大鼠肝纤维化模型中的表达

目的观察固有免疫信号因子MyD88在肝纤维化大鼠肝脏中的表达特点,探讨MyD88与肝纤维化发生发展的关系。方法将40只SD大鼠随机分成正常对照组和实验组,以四氯化碳皮下注射和高脂低蛋白饮食复制大鼠肝纤维化模型。在制备模型实验过程中的第6个月根据不同检测目的进行取材。石蜡切片常规HE染色和免疫组化实验,另一部分标本直接进行RT-PCR实验和Western blot实验检测。结果 HE结果显示,正常组大鼠肝小叶结构罗列规则有序,未见大量炎性细胞等异构细胞出现。而MyD88在内皮细胞轻度表达,而在星形细胞并未见明显表达。模型组肝小叶结构明显破坏,数量明显减少,结构紊乱无序,代之以大量异常细胞浸润,纤维增生等特点。内皮细胞、星形细胞等MyD88都有强烈高表达,并且以胞核表达为主,亦见胞浆表达。而基因和蛋白表达都明显升高,与正常对照组相比,呈现显著性差异(P<0.01)。结论 MyD88在肝纤维化中表达显著增强,可能在纤维化形成中起到重要作用。

固有免疫信号因子TRIF在肝纤维化中的表达

目的初步探讨TOLL样受体下游重要信号因子TRIF与肝纤维化发生发展的病理机制关系。方法以四氯化碳皮下注射+低蛋白高脂饮食+酒精饮料的方法复制大鼠肝纤维化模型。将SD大鼠随机分成正常对照组和模型组,在完成制备模型实验后进行取材。部分实验鼠进行心脏生理盐水和多聚甲醛灌注后,取肝脏组织制备石蜡切片,进行常规HE染色和免疫组化实验;另一部分实验鼠脱颈安乐死后,取新鲜肝组织进行电镜标本的制备和Western Blot实验检测。结果 HE染色结果显示与而正常对照组大鼠相比,模型组大鼠肝小叶结构明显破坏,肝细胞数量明显减少和肝纤维化程度等特点明显;电镜结果也显示,肝纤维化组可见大量胶原纤维沉积现象,胞质可见明显的溶解现象,在狄氏腔内,肝星状细胞的细胞核溶解,血窦内皮细胞胞质、胞核皆溶解;免疫组化模型组大鼠肝组织均显示内皮细胞、星形细胞等TRIF都有强烈高表达,并且以胞核表达为主,亦见胞质表达,而正常组呈现弱阳性表达;与正常对照组相比,模型组大鼠肝组织TRIF蛋白表达都明显升高,呈显著性差异(P<0.01),与形态学的表达特点相一致。结论 TRIF在肝纤维化中表达显著增强,说明在肝纤维化过程中,TOLL样受体明显激活,并且通过下游信号转导途径,在机体内产生一系列的免疫应答反应。通过该现象的观察,我们初步证实了TOLL样受体固有免疫信号因子TRIF在纤维化形成中起着重要的作用。

电针联合隔物灸治疗膀胱过度活动综合征(肾阳亏虚证)的研究

目的观察电针联合隔物灸治疗膀胱过度活动综合征(肾阳亏虚证)的临床疗效。方法患者60例随机分为对照组与治疗组。两组均配合一线常规疗法(包括行为治疗、改变生活方式和患者教育)。治疗组予电针联合隔物灸治疗,每日1次,每次15 min,5 d为1个疗程,共3个疗程,对照组予缩泉胶囊治疗。结果两组患者症状与治疗前相比均减轻(P<0.05);治疗组在膀胱过度活动症评分(OABSS评分)、白天排尿次数、夜间排尿次数、尿失禁次数、尿急次数、每次排尿量方面优于对照组(P<0.05);治疗组总有效率为93.33%,显著高于对照组的70.00%(P<0.05)。结论电针联合隔物灸治疗膀胱过度活动综合征疗效显著,具有重要临床价值。

益气化瘀化痰法对肺纤维化大鼠肺组织结构及血清MMP-9、TIMP-1的影响

目的观察益气化瘀化痰法(YHH)对肺纤维化大鼠肺组织结构、血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)水平的影响,探讨其防治肺纤维化的可能机制。方法健康SD大鼠采用博来霉素建立肺纤维化模型,随机分成7组:正常对照组(Z组)、模型组(M组)、氢化可的松组(QK组)、益气组(YQ组)、化瘀组(HY组)、化痰组(HT组)、益气化瘀化痰组(YHH组)。HE、Masson染色光镜观察肺组织病理形态变化;电镜观察肺组织超微结构变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清MMP-9、TIMP-1含量。结果 1)与M组比较,各治疗组均能减少肺间质胶原沉积,减轻肺纤维化程度,尤以YHH组较为明显2)与Z组比较,M组血清MMP-9水平有所升高,TIMP-1水平显著升高,MMP-9/TIMP-1比值降低(P<0.05);与M组比较,各治疗组均能升高血清MMP-9水平,降低TIMP-1水平,升高MMP-9/TIMP-1比值,以YHH组作用更显著(P<0.05)。结论益气化瘀化痰法可能在一定程度上通过调整MMP-9/TIMP-1的比值,使其趋于平衡,从而延缓肺纤维化的进程。

抑癌基因DKK2过表达对人膀胱癌细胞增殖和迁移的抑制作用及其机制探讨

目的 :分析dickkopf 2(DKK2)基因在人膀胱癌细胞系及膀胱癌组织中的表达水平,以及DKK2过表达对人膀胱癌细胞增殖与迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法:通过RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测人膀胱癌细胞系及组织中DKK 2基因的相对表达水平。选用DKK2低表达的膀胱癌细胞系T24,进行DKK2过表达质粒转染后,采用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证DKK2过表达效果;然后采用CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室法和FCM法分别检测DKK2过表达对细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭及细胞周期的影响;进一步采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测DKK2过表达后膀胱癌细胞中增殖和迁移相关分子表达水平的变化。结果:人膀胱癌细胞系5637、T24、SW780、J82、HT-1197和HT-1376中DKK2 mRNA及蛋白表达水平均明显低于正常膀胱上皮细胞SVHUC-1(P值均<0.01);同时与正常膀胱组织及配对的癌旁组织相比,膀胱癌组织中DKK2 mRNA及蛋白的表达均明显下调(P值均<0.001)。DKK2过表达质粒转染后,膀胱癌T24细胞中DKK2 mRNA及蛋白的表达水平明显上调,而细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均受到明显抑制(P值均<0.05),同时细胞周期被阻滞于G0/G1期(P<0.001)。而且DKK2过表达的膀胱癌T24细胞中,p21和E-cadherin表达水平明显升高(P值均<0.001),cyclin D1、vimentin和N-cadherin表达水平明显降低(P值均<0.001)。结论:DKK2在人膀胱癌细胞及组织中低表达。DKK 2可能作为一个潜在的抑癌基因,参与膀胱癌进展。