猫血型荧光PCR检测方法的建立及应用

猫的AB型血型系统由A型、B型和AB 3种血型组成。配型不合可能导致急性溶血性输血反应和新生儿溶血。根据TaqMan探针荧光定量分析原理,通过对猫血型决定基因胞苷-磷酸-N-乙酰神经氨酸羟基酶(CMAH)基因的4个血型相关的位点进行序列比对,设计相应引物以及探针,建立猫血型荧光PCR检测方法。该研究建立的猫血型荧光PCR检测方法与商品化的血型检测试纸条检测结果符合度达100%。此外,研究发现在北京及周边地区采集的269个猫样本中,A型血型占94.05%、B型占5.58%、AB型占0.37%。

猪支原体肺炎血清学检测技术及其应用

猪支原体肺炎是目前流行最广、损失最大的猪病之一,本文介绍了目前常用的血清学诊断技术及其在猪肺炎支原体控制中的应用。

西宁市猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了西宁市8个规模养殖场和部分散养户的161份猪血清样品的猪圆环病毒2型(PCV2)抗体。结果显示,所有被检猪场均有PCV2抗体阳性猪存在,161份血清样品中PCV2抗体阳性率为86.95%。从上述样品中随机抽取28份样品,用PCR方法检测了PCV2 ORF1基因;结果,从13份血清中扩增到了特异性PCV2 ORF1基因,阳性率为46.42%。证实,西宁市猪场和散养猪群中存在PCV2感染。

牛布鲁氏菌抗体荧光快速检测试纸卡的研制

为研制一种快速检测牛布鲁氏菌抗体的便捷试纸卡,采用间接荧光免疫层析技术,以荧光微球为标记物,与兔抗牛IgG偶联,以布鲁氏菌脂多糖(LPS)抗原包被硝酸纤维素膜,通过反应条件优化,研制牛布鲁氏菌抗体荧光微球快速检测试纸卡。结果显示:该试纸卡灵敏度可达0.8 IU/mL,与牛口蹄疫病毒O型、牛口蹄疫病毒A型、牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒的抗体阳性血清均无交叉反应;对469份临床牛血清进行检测,同时与荧光偏振方法进行比较,发现两种方法的符合率为100%。结果表明,本次研制的牛布鲁氏菌抗体荧光微球检测试纸卡灵敏度高,特异性好,适用于临床样品的快速检测。本试纸卡的成功研制为牛布鲁氏菌病免疫效果评估和准确诊断提供了一种简便的血清学诊断方法。

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

本研究根据PRRSV GL膜蛋白基因和CSFV多聚蛋白基因,分别设计2对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的双重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果表明,该方法只对猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒特异性良好,不与非洲猪瘟、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒等常发猪病存在交叉反应;PRRSV和CSFV的检出下限分别为1.41拷贝/μL和1.6拷贝/μL;组内和组间Ct值变异系数都小于1.3%。对175份临床采集的样品检测,PRRSV单一阳性样品27份,CSFV单一阳性样品16份,检测双阳性样品24份。本方法敏感高、特异强,可以用于猪场的快速检测与诊断。

从实际出发 改革新闻写作课教学内容和方法

无论在校内或校外,凡听过我的课的学员都说:“赵老师的课讲得活,教学内容丰富实用,讲授方式灵活多样。”在庆祝院庆十周年前夕,学院领导到省内各地去召开校友座谈会,有不少校友还记得我的课堂教学,并给予较高的评价。学院领导除了告诉我这信息外,还语重深长地鼓励我:继续努力。学院党委书记还勉励我:“要发挥这种优势,利用这种优势。”这是领导和学员对我的鼓励和鞭策!为了不辜负领导和同志们的期望,现对自己的教学情况作简略的回顾,向同志们作个汇报,以达“抛砖引玉”的目的。

加强社会实践 促进学以致用——赴广州经济技术开发区社会实践的总结

1993年5月11日至13日,我与九二级中秘班一起到广州经济技术开发区进行为期三天的社会实践.总的来说,这次实践达到了预期的目的.一、基本做法这次社会实践是与广州经济技术开发区中学联合进行的.我们的学员除了完成自身的社会调查和写作任务外。

必须根据成人教育特点组织教学

从十年成人教育的教学工作中,我深刻地体会到:要搞好成人教育,就很有必要研究成人教育的特点,并根据这些特点组织教学,才有助于提高教学质量。一、成人学员的若干特点1、广泛的社会性。成人学员来自不同的地区、不同的岗位,他们在各行各业中有了一定的工作经历,接触社会生活的面也很广。因此,他们与普通高校的学生相比,无疑是具有较强的社会性。2、懂得“重新学习”的宝贵。成人学员在入学前,大都参加过工作,并在实践中,积累了一定的经验,培养了实际工作能力。问题在于:他们过去学习的基础理论是不够系统的;他们的工作经验多停留在感性认识阶段,因而有较大的片面性和盲目性。

基础写作教学的点滴体会

近年来,为探求基础写作课的教学的规律,曾作过一些实践。现把如何增强讲授的吸引力,提高教学效果谈一点粗浅体会。一、阐明基础写作课的性质,增强课程的吸引力基础写作是一门怎样的课程?学生一般是不甚了解的。如果他们对所学的课程的性质不了解,不知道本课程对他们的专业学习有什么作用,对将来的工作有什么重要意义,那就很难调动他们学习的积极性。为此,我比较注意在教学一开始,就开宗明义阐明本课程的性质。

人IgG Fc标签融合表达载体的构建及H5 HA1融合蛋白的表达

目的构建人IgG Fc标签融合表达载体,表达并纯化H5 HA1融合蛋白。方法以pCAGGS载体为基础,依次插入IL-2信号肽及人IgG Fc片段,构建人IgG Fc标签融合表达载体。将H5 HA1克隆至含人IgG Fc标签的融合表达载体pCAGGS-F-IL-2/Fc中,瞬时转染293T细胞,进行融合蛋白的表达。表达的蛋白经Protein G亲和层析一步法纯化。结果人IgG Fc标签融合表达载体经酶切及测序证明构建正确;在293T细胞中分泌表达的H5 HA1与人IgG Fc的融合蛋白HA1-Fc相对分子质量约75 000,转染后72和96 h表达量最高;纯化的融合蛋白纯度达90%以上,含量为1.63μg/ml。结论成功构建了人IgG Fc标签融合表达载体,表达并纯化了HA1-Fc融合蛋白,为流感病毒侵入及免疫机制的研究奠定了基础。

非洲猪瘟病毒抗原检测试纸条检测方法的建立及初步评价

分别以非洲猪瘟病毒(ASFV)P72蛋白特异性单克隆抗体3E1株和7A7株作为检测抗体和捕获抗体,建立了ASFV抗原试纸条检测方法。该方法与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;对ASFV P72重组蛋白的最低检测量为2.50μg/L;稳定性试验结果表明,试纸条可在2~8℃条件下保存15个月。对100份临床样品的检测结果显示,该方法与荧光定量PCR的符合率为85%。本研究建立的ASFV抗原检测试纸条特异性强、灵敏度高,可用于临床样品中ASFV抗原的检测。