太湖地区表层土壤养分空间变异的影响因素研究

采用单因素方差分析和逐步回归分析,分析了太湖地区表层(0～15cm)土壤养分空间分异的影响因素。结果表明,太湖平原地区全N、全P、全K和速效P含量均较高;而低山丘陵地区全P、速效P及速效K含量均较低,属于缺P、缺K水平。土壤类型对太湖地区土壤全N、速效K空间变异的影响要大于母质和地形;地形影响全P和速效P空间变异较母质和土壤类型更为明显;而母质是影响全K的主导因素,对其空间变异的影响比土壤类型和地形大。三者引起土壤养分的空间分异均达到极显著水平,从而证实了土壤调查采样时按成土母质、土壤类型或地形布设样点是合理的。

MMP-2和MMP-9在急性白血病骨髓细胞中的表达及与白血病髓外浸润的相关性

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与急性白血病发生和髓外浸润的相关性。方法采用生物素化鼠抗地高辛标记的原位杂交法检测MMP-2和MMP-9在初治、复发、完全缓解的急性白血病患者和正常对照者的骨髓原代细胞中的表达。结果MMP-2和MMP-9在初治,特别是有髓外浸润表现者和复发急性白血病骨髓原代细胞中的表达显著高于完全缓解的急性白血病和正常对照者;关于亚型的研究发现,初治急性淋巴细胞白血病组和急性非淋巴细胞白血病(M4+M5)组中的表达显著高于急非淋(非M4+M5)组。结论MMP-2和MMP-9可能通过增强白血病细胞降解细胞外基质(ECM)等机制参与急性白血病的发生和髓外浸润过程,并在其中发挥重要作用。

髓系肉瘤11例临床分析

0引言随着诊断技术的进步、急性白血病患者生存期的延长以及异基因造血干细胞移植（allogenetic he-matopietic stem cell transplantation,allo-HSCT）的广泛应用,髓系肉瘤（myeloid sarcoma,MS）越来越受到重视。本文收集了11例MS病例资料,并就其临床特点、诊断、鉴别诊断、治疗进行文献复习,以期提高对MS的认识。

231培养液培养成人大隐静脉平滑肌细胞

目的:应用231培养基培养成人大隐静脉平滑肌细胞探讨其有效方法。方法:实验于2004-11/2005-3在首都医科大学附属北京安贞医院北京心肺血管疾病研究所中心实验室完成。①平滑肌细胞分离:40例冠状动脉旁路移植术患者(年龄43～74岁)术中废弃的大隐静脉,经患者同意无菌取2.0～3.0cm。2.5g/L胰蛋白酶溶液吹打消化15min,去除内皮细胞,同时松动平滑肌细胞,便于细胞游离出组织块生长。将血管剪成2.0～3.0mm2的小块贴到培养瓶底,加入完全231培养液3mL,直立放入37℃、体积分数为0.05的CO2、饱和湿度的培养箱中,24h后将培养瓶放平使培养液浸没组织块继续培养。②平滑肌细胞传代:当细胞延组织块周围密集成片生长时,即可传代。③平滑肌细胞形态观察:应用倒置显微镜观察平滑肌细胞生长状况,记录生长曲线,观察各生长时期变化。④平滑肌细胞鉴定:应用透射电镜和免疫组织化学方法鉴定平滑肌细胞。结果:①大隐静脉平滑肌细胞形态观察结果:大隐静脉平滑肌细胞原代培养沿组织块长出时间为2～14d,经过7d潜伏期细胞进入对数生长期,细胞呈“峰谷”长势。原代细胞培养第(25±2.1)天传第1代,传代24h后进入对数生长期,细胞传10代以上仍保持良好的形态结构。培养成功率100%。培养过程中未见杂细胞或微生物污染。②大隐静脉平滑肌细胞鉴定结果:电镜下观察,胞浆内富含肌丝,纵向平行排列,胞内有密体,具有平滑肌细胞特征;抗α平滑肌肌动蛋白免疫组织化学染色后可见胞浆内染成褐色呈细丝网状,所有细胞均呈阳性染色。证实培养细胞为平滑肌细胞。结论:利用消化贴块方法分离人大隐静脉平滑肌细胞,应用231培养基进行培养,不仅培养成功率高,并且可产生高纯度及多数量的平滑肌细胞。技术具有操作简便,污染机会少,为心血管疾病研究和组织工程学研究及应用提供可靠的细胞模型。

人脐动脉内皮细胞和平滑肌细胞体外培养鉴定及缝隙连接通讯功能测定

目的:应用双光子激光扫描共聚焦显微镜鉴定体外培养的脐动脉内皮细胞(ECs)和平滑肌细胞(SMCs),应用荧光光漂白恢复技术(FRAP)测定血管ECs、SMCs之间的缝隙连接通讯(GJIC)功能。方法:人脐动脉ECs、SMCs分离培养,Ⅷ因子和SMα-actin相关抗原鉴定ECs和SMCs,应用FRAP技术测定血管内皮细胞、平滑肌细胞之间的GJIC功能,记录实时成像结果,应用动态比(M)计算漂白区域内标记荧光的分子中动态分子的比例。结果:第一组ECs和SMCs单独培养,选择漂白细胞与周围至少3个同种细胞相连接,SMCs被漂白后平均M值为31.79±5.69;ECs被漂白后平均M值为23.43±2.11;第二组ECs和SMCs混合培养,选择ECs和SMCs独立相连的2个细胞,SMCs被漂白后平均M值为14.47±3.28,ECs被漂白后平均M值为6.41±0.80。结论:FRAP实时动态恢复曲线可直接观察荧光恢复强度及速度,参照FRAP恢复曲线,M值可做为组间GJIC比较相对定量的可靠指标,通过检测证实ECs和SMCs之间存在GJIC,且荧光由ECs向SMCs方向的传递大于由SMCs向ECs方向的传递。

丹参酮对人卵巢癌细胞转移行为的作用

目的探讨丹参酮对卵巢癌细胞转移行为的作用及影响情况。方法运用MTT实验检测不同浓度的丹参酮对卵巢癌细胞生长情况的抑制;克隆形成实验检测不同浓度的丹参酮对卵巢癌细胞集落形成的抑制情况;侵袭实验检测丹参酮对卵巢癌细胞的侵袭能力的影响;裸鼠成瘤实验检测丹参酮对卵巢癌细胞在体外成瘤能力的影响。结果 0.5 ug/ml的丹参酮对卵巢癌细胞的细胞活性和集落形成能力有最佳的抑制效果;丹参酮对卵巢癌细胞的侵袭能力有明显的抑制效果;丹参酮对卵巢癌细胞在裸鼠体内成瘤能力有明显的抑制效果。结论适宜浓度的丹参酮对卵巢癌的体内体外的生长侵袭活性都有明显的抑制效果。

富含微量元素矿泉水对人血管平滑肌细胞生长增殖的影响

目的研究富含微量元素矿泉水对体外培养血管平滑肌细胞（HVSMCs）生长增殖的影响。方法无菌取12例冠状动脉旁路移植术患者术中废弃的大隐静脉，应用金山矿泉水配制的DMEM培养液（MW—DMEM）和双蒸水配制的DMEM培养液（DDW—DMEM）分别培养平滑肌细胞，分为金川矿泉水组和双蒸水组。观察记录2种培养液培养的HVSMCs游出组织块的时间及细胞呈“峰”-“谷”样时间；建立血管紧张素Ⅱ诱导HVSMCs增殖模型，采用MTT比色法观察2种培养液对AngⅡ诱导HVSMCs增殖抑制作用；应用电镜和免疫组织化学染色法观察鉴定HVSMCs。结果金川矿泉水组培养的HVSMCs贴壁时间为（3．7±0．2）d，双蒸水组为（8．5±0．6）d；金川矿泉水组培养的HVSMCs自贴壁后到长成“峰”-“谷”样形态的时间为（8．3±0．2）d，双蒸水组为（7．1±0．5）d；MTT比色法测定金川矿泉水组培养的HVSMCs的增殖活度明显降低；电镜观察MW—DMEM培养的HVSMCs细胞形态完整，表面有丰富的微绒毛。HVSMCs胞浆内富含肌丝，纵向平行排列，胞内有密体；抗-actin平滑肌肌动蛋白免疫组织化学染色后可见胞浆内染成褐色呈细丝网状。结论富含微量元素和矿物质的金川矿泉水具有修复血管平滑肌细胞损伤和抑制血管紧张素Ⅱ诱导HVSMCs增殖的作用。

剖宫产术后有效止痛对母乳喂养的影响

目的了解剖宫产术有效镇痛对母乳喂养的影响，促进和支持母乳喂养。方法选择2008—2009年渭南市中心医院妇产科经剖宫产分娩产妇，术后采取硬膜外自控镇痛止痛50例作为实验组，常规止痛方法50例作为对照组，分别对两组产妇术新生儿初次吸吮，初乳时间，三天内哺乳次数等进行观察统计。结果术后采取硬膜外自控镇痛止痛，初乳时间明显提前，产后三天哺乳次数明显增加。结论剖宫产术后采取硬膜外自控镇痛可以改善和促进母乳喂养。

品管圈在脑卒中康复护理健康教育中的应用

目的：探索品管圈在脑卒中康复护理健康教育中的作用。方法2014年1～4月在本院神经康复VIP病房按照品管圈的理论进行主题选定、活动计划、现况把握、要因分析、对策拟订与实施等共10个步骤逐项进行活动。结果脑卒中住院患者健康教育满意度由品管圈活动实施前的80.1%升至实施后的91.1%（P〈0.001）；活动后日常生活动作指导、预防偏瘫并发症指导方面的不满意数比活动前下降（P〈0.05）；全体圈员在品管圈手法运用、团队精神、专业知识、沟通协调、活动信心和责任荣誉6个方面的能力均有所提高。结论开展品管圈活动对脑卒中康复护理健康教育能够起到积极作用。

槐菊冲剂对大鼠血脂水平的影响

为了研究槐菊冲剂的调脂作用 ,用槐菊冲剂分别以 5g/kg、 2 5 g/kg的药量给高脂血症大鼠和正常大鼠连续灌服 2 0天 ,并与月见草油比较。结果表明 ,槐菊冲剂组可显著降低高脂血症大鼠的血清胆固醇及甘油三酯水平 (P <0 0 5 ) ,对高密度脂蛋白有显著升高作用 (P <0 0 5 ) ,对低密度脂蛋白有降低趋势。对正常大鼠 ,槐菊冲剂组有显著降低血清胆固醇的作用 ,而对甘油三酯和低密度脂蛋白有降低的趋势 ,对高密度脂蛋白有升高趋势。

心钠素对培养人心包间皮细胞内钙离子浓度的影响

目的 探讨心纳素与人类心包间皮细胞之间的关系。 方法 分离人心包间皮细胞进行体外培养 ,用Fluo 3作为钙的指示剂 ,利用激光共聚焦显微镜测定 10 - 9mol L ,10 - 1 0 mol L ,10 - 1 1 mol L心钠素 (ANP)分别用作用于人心包间皮细胞后细胞内Ca2 + (Ca2 + )浓度变化。 结果 人心包间皮细胞存在细胞内Ca2 + 浓度的改变 ,随着ANP浓度的增加 ,细胞内Ca2 + 浓度出现非常明显的变化 (P <0 0 0 0 1) ;细胞内Ca2 + 浓度随时间变化也出现明显的变化 (P <0 0 0 0 1) ;不同时间测定的钙离子浓度与ANP浓度之间存在着交互作用 (P <0 0 0 0 1)。 结论 人心包间皮细胞存在细胞内Ca2 + 的改变 ;不同浓度的ANP作用于间皮细胞后引起细胞内Ca2 +

高分辨阿达玛变换显微光谱成像系统研究

阿达玛变换(HT)是一种多通道的光谱调制技术,基于这一原理,研制了一种显微光谱成像系统。通过光学设计,除可以获得微小试样(如单个细胞)的光谱以外,还可以对试样进行分光谱成像,得到分辨率为256×256像素的256级灰度图像。通过对两种不同荧光发射波长的CdSe/ZnS量子点进行的分光谱成像测试表明,本系统具有良好的分光谱成像能力,可以对具有复杂光谱的物质针对其某一特定成分进行成像。

成年大鼠心肌细胞培养方法的建立和形态学观察

为探索稳定的成年大鼠心肌细胞的分离和培养方法 ,应用生物酶 ( 5g/L胰蛋白酶及 1 g/L胶原酶 )灌注法分离成年大鼠心肌细胞 ,用形态学及台盼蓝染色法鉴定分离的心肌细胞 ,并在光镜和电镜下观察和摄像记录。结果 :心肌细胞的存活率为 91 .7% ;存活的心肌细胞静止地贴在培养板底上 ,细胞完整 ,呈杆状 ,长宽比约为 4～ 6∶1。结果提示 :该方法是比较理想的心肌细胞培养法。

小鼠结直肠癌肝转移模型的建立及其炎症微环境分析

背景与目的:肝转移是结直肠癌死亡率上升的主要原因,建立稳定而模拟性好的结直肠癌肝转移模型,对研究其发病机制及转移特性意义重大。本研究以建立小鼠结直肠癌肝转移模型为基础,对肿瘤微环境进行分析,旨在探索炎症微环境在肿瘤发生、发展与转移中的作用。方法:应用保脾法通过脾脏原位注射SL4细胞建立模型,显微镜下观察肝脾组织病理形态学改变;用流式细胞术分析外周血和脾脏免疫表型及肿瘤炎症微环境变化。结果:造模成功率100%;显微镜下模型组肝脾组织有大量肿瘤细胞浸润,炎症细胞增多。流式细胞术分析显示,模型组外周血B淋巴细胞(CD3-B220+)减少,由62.6%降至30.2%,脾脏B细胞(CD3-B220+)增多,由33.6%升至42.4%,提示B细胞从外周血动员到脾脏以产生抗肿瘤抗体;模型组外周血单核粒细胞(Gr1+CD11b+)增多,由9.6%升至54.1%,在体内循环和炎症微环境作用下,转化为肿瘤组织中的肿瘤相关巨噬细胞TAM(Gr1+F4/80+),表达量49.5%,提示TAM可能对肿瘤生长和转移起关键作用。结论:采用保脾法经脾脏原位注射SL4细胞建立的小鼠结直肠癌肝转移模型可成为研究肿瘤转移的理想模型,为探索结直肠癌肝转移机制及炎症微环境对肿瘤生长和转移的影响奠定基础。

超声监测联合益肾逐瘀中药、艾灸治疗排卵障碍性不孕100例疗效观察

不孕症为有正常性生活的伴侣，未采取避孕措施，同居1年后仍未怀孕。近年来，随着人们生活、工作压力的增加及年轻人生活方式的改变，我国育龄妇女不孕症的发病率不断增加，约10％的育龄妇女受不孕症的困扰，其中排卵障碍性不孕的发病率约占25％～30％［1］，严重影响了妇女的生殖健康，给患者的家庭幸福带来不利影响。西药促排卵治疗对排卵障碍性不孕症取得了一定的疗效，但应用西药后的高排卵、低受孕现象以及卵巢过度刺激综合征等不良反应限制其在临床的广泛应用［2］。2011-03-2012-03，我们采用益肾逐瘀中药联合艾灸治疗排卵障碍性不孕100例，并结合超声连续监测卵泡发育及子宫内膜变化，结果如下。

心脏移植后急性排异反应体外模型的建立及其应用研究

分离成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠心肌细胞（２×１０６ｍｌ－１）ＳＤ大鼠的脾细胞（１×１０７ｍｌ－１），前者做刺激细胞，后者做反应细胞，进行混合细胞培养，建立大鼠心脏移植后急性排异反应体外模型。该模型包括４组：①阴性对照组，心肌细胞与经丝裂霉素Ｃ处理的脾细胞共同培养。②阳性对照组，心肌细胞与脾细胞共同培养。③药物对照组，在阳性组基础上加入ＣＳＡ（环孢霉素Ａ１０μｇ／ｍｌ）。④实验组，在阳性组基础上加入实验药物（ＨＳＰ，人类精浆，１０μｇ／ｍｌ）。应用光镜、电镜观察各组心肌细胞的受损情况和脾细胞转化为淋巴母细胞的数量，并用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定脾细胞的转化率，证实了ＣＳＡ和ＨＳＰ有相似的免疫抑制作用。用大鼠腹腔内心脏异位移植体外模型来重复验证ＣＳＡ和ＨＳＰ的免疫抑制作用，两者结果相同，从而证明了心肌细胞混合培养的体外模型不仅简便易行，可靠性强，而且为大规模地筛选免疫抑制剂提供了一种方便、廉价的实验工具。

藏药1号与7号水提液对大鼠离体胸主动脉条收缩的抑制作用

目的 通过对比观察藏药 1号与藏药 7号水提液对大鼠离体胸动脉条收缩作用的影响 ,研究藏药 1号与藏药 7号的降压机制。方法 以生理盐水作为对照组 ,观察藏药 1号与藏药 7号水提液 (6mg/ml)和维拉帕米 (Ver 0 0 1 3mg/ml)对高K+ 液引起的主动脉条收缩的时效影响 ,观察对KCl,NE及CaCl2 引起的大鼠主动脉条收缩的量效曲线的影响 ,以及对NE引起的依赖于细胞内钙及细胞外钙的收缩的影响。结果 藏药 1号与藏药 7号水提液抑制高K+液引起的主动脉收缩 (P <0 0 0 1 ) ;而且可以使KCl,NE及CaCl2 引起的大鼠主动脉条收缩的量效曲线非平行右移 ,最大效应降低 ,呈非竞争性拮抗作用 (P <0 0 5) ,与维拉帕米相似 ,并且对NE引起的依赖于细胞内钙及细胞外钙的收缩均有抑制作用 (P <0 0 5)。从 pD’2值分析 ,藏药 1号的药效作用要强于藏药 7号 ,但比Ver的弱。 结论 提示藏药 1号与藏药 7号的降压机制与钙离子通道拮抗剂一致 ,而且其作用效果比Ver延迟、平缓 ,其最大作用与Ver相近。而且藏药 1号药效更加显著。

人心肌肌球蛋白轻链基因启动子驱动的GFP和Luc报告基因在人心肌细胞系中的表达

目的:构建人肌球蛋白2v基因启动子(pMLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和萤光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体并观察其在人心肌细胞系(HCM)和人肺癌细胞株A549中的整合表达特征。方法:应用去毒化的人类I型免疫缺陷病毒和pMLC2v-GFP或pMLC2v-Luc报告基因构建慢病毒示踪载体,转染HCM和A549细胞,激光共聚焦显微镜及生物发光检测仪观察2种报告基因在不同细胞生长进程中的表达特征。非特异性启动子驱动的GFP(GFPC)和红色荧光蛋白(RFPC)报告基因作为对照。结果:2种细胞转染GFPC和RFPC后第3 d,都表达GFP和RFP;而HCM只在转染pMLC2v-GFP和pMLC2v-Luc 21 d后表达GFP和Luc,A549细胞不表达。结论:pMLC2v主要在培养21 d后新增殖的人心肌细胞中驱动GFP和Luc报告基因表达,这为监测干细胞向心肌细胞的分化进程提供了可靠的病理及活体示踪工具。

线粒体融合蛋白2在原发性高血压患者血管组织和平滑肌细胞中表达的研究

目的观察线粒体融合蛋白2（Mfn2）在人血管组织和平滑肌细胞（VSMCs）中的表达情况。方法选取2006年10月至2007年10月在北京安贞医院行冠状动脉旁路移植术的患者60例，分为高血压组和正常血压组各30例，收集术中剩余桥血管（乳内动脉）。取1例正常产妇产新生婴儿脐带，进行人乳内动脉和VSMCs培养。提取乳内动脉组织和VSMCs总RNA，RNA的反转录-cDNA的聚合酶链式扩增（RT—PCR），观察2组患者Mfn2的表达情况。用不同浓度血小板源性生长因子（PDGF—BB）诱导VSMCs增殖并检测Mfn2表达情况。结果2组患者血压水平、体质指数差异有统计学意义（P〈0．05）。人乳内动脉血管组织和VSMCs均有Mfn2表达，高血压组Mfn2表达水平均低于正常血压组（人乳内动脉血管组织：0．42±0．10比0．49±0．12，P=0．014；VSMCs：0．29±0．07比0．334-0．08，P=0．041）。高血压组原代VSMCs细胞计数高于正常血压组（0．48±0．15比0．38±0．11，P=0．005）。与对照组相比，随PDGF—BB浓度增加VSMCs计数增加（对照组：0．36±0．09，10μg/L组：0．53±0．13，100μg/L组：0．54±0．12），VSMCs的Mfn2表达减少（对照组：0．31±0．08，10μg/L组：0．22±0．06，100μg/L组：0．21±0．05，P〈0．05）；100μg/L组与10μg/L组相比，VSMCs细胞计数和VSMCs的Mfn2表达差异无统计学意义（P值分别为0．862和0．755）。结论在人血管组织和培养的VSMCs中验证了高血压和正常血压人选者存在Mfn2的表达差别。