miR-150靶向β-catenin调控人牙周膜干细胞成骨分化能力的机制研究

目的 体外研究miR-150对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs成骨分化能力的调控作用及其分子机制。方法 分离培养hPDLSCs并进行成骨向分化诱导,q-PCR检测miR-150及成骨相关基因(RUNX2、OCN、OPN、ALP)的表达;hPDLSCs中转染miR-150沉默(inhibitor)及过表达模拟物(mimics),q-PCR检测miR-150和β-catenin的表达,茜素红染色实验检测hPDLSCs成骨分化能力的变化;qPCR及Western blot检测沉默及过表达miR-150后β-catenin表达水平的变化;双荧光素酶报告基因实验验证miR-150的潜在靶基因;在hPDLSCs中过表达miR-150并加入SKL2001(Wnt/β-catenin通路激动剂),检测β-catenin表达及hPDLSCs成骨分化能力的变化。结果 RUNX2、OCN、OPN、ALP基因在hPDLSCs成骨向分化诱导后表达明显上调,而miR-150的表达则显著下调;q-PCR及茜素红染色结果显示抑制miR-150可明显上调成骨相关基因的表达并促进hPDLSCs成骨向分化,而过表达miR-150则结果相反;生物信息学分析显示β-catenin为miR-150的潜在靶基因,双荧光素酶报告进一步验证β-catenin为miR-150的靶基因;而SKL2001激活β-catenin后可逆转miR-150 mimics对hPDLSCs成骨分化的抑制作用。结论 miR-150可靶向β-catenin调控hPDLSCs的成骨向分化能力,提示miR-150在牙周组织工程损伤修复中发挥重要作用。

烟酰胺磷酸核糖转移酶在大鼠涎腺的表达及定位

[目的]研究烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyl transferase,Nampt)在大鼠涎腺的表达和分布。[方法]应用半定量逆转录聚合酶链法(RT-PCR)和免疫印迹法检测大鼠正常腮腺、颌下腺和大舌下腺组织Nampt mRNA及蛋白质的表达。采用免疫组织化学法检测大鼠腮腺、颌下腺和大舌下腺组织Nampt的分布。[结果]大鼠腮腺、颌下腺和大舌下腺组织均有Nampt的mRNA及蛋白质表达,RT-PCR结果显示其表达相对光密度值分别为:腮腺82.04%,颌下腺50.89%,大舌下腺30.53%(与actin比较,P<0.05);Western Blot结果显示其表达相对光密度值分别为:腮腺77.34%,颌下腺47.61%,大舌下腺31.78%(与actin比较,P<0.05)。Nampt均主要分布于浆液性腺泡细胞的胞浆和胞核,以及闰管和纹状管的胞核中。[结论]大鼠腮腺、颌下腺和大舌下腺均存在Nampt的mRNA和蛋白质表达,为深入研究Nampt在涎腺生理及病理状态下的功能意义提供初步实验依据。

miR-203靶向RUNX2对牙周膜干细胞成骨分化能力的调控作用

目的:体外研究miR-203对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响及调控机制。方法:分离培养人牙周膜干细胞,检测牙周膜干细胞矿化诱导前后miR-203和RUNX2的表达;分别转染miR-203沉默及过表达模拟物;qPCR检测miR-203和RUNX2 mRNA水平的表达;Western blot检测RUNX2蛋白水平的表达,茜素红染色观察细胞成骨分化能力的变化;生物信息学分析miR-203的靶基因,双荧光素酶报告实验验证;共转染miR-203 inhibitor和RUNX2 siRNA,分析共转染后对RUNX2表达及细胞成骨分化能力的影响。结果:成骨诱导液诱导后牙周膜干细胞中miR-203的表达水平显著下调,而RUNX2的表达水平明显升高;miR-203过表达可明显抑制h PDLSCs的成骨分化能力和RUNX2的表达,抑制miR-203的表达,则结果相反;通过生物信息学分析miR-203的潜在靶基因含有RUNX2,双荧光素酶报告实验验证RUNX2为miR-203的靶基因;进一步实验结果表明沉默RUNX2可逆转miR-203 inhibitor对牙周膜干细胞成骨分化的促进作用。结论:miR-203可靶向调控RUNX2对人牙周膜干细胞成骨分化能力产生影响,提示miR-203在h PDLSCs组织工程损伤修复过程中发挥着重要作用。

紫丹银屑胶囊联合窄谱中波紫外线治疗寻常型银屑病疗效及对VEGF水平、PASI评分的影响

目的探讨紫丹银屑胶囊联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗寻常型银屑病疗效及对患者血管内皮生长因子(VEGF)水平、银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)评分的影响。方法选取我院2015年3月—2017年1月收治的84例寻常型银屑病患者,采用随机数字表法均分为2组。对照组(42例)予以NB-UVB治疗,观察组(42例)在此基础上加用紫丹银屑胶囊治疗。记录比较2组临床疗效,治疗前后PASI评分、血清VEGF水平变化,复发与不良反应发生情况。结果治疗12周后,观察组总有效率为95.2%,明显高于对照组(78.6%,P<0.05)。2组治疗4、8、12周后PASI评分、血清VEGF水平较治疗前均显著降低(P<0.05);且与对照组治疗4、8、12周后对比,观察组同期PASI评分、血清VEGF水平均显著更低(P<0.05)。3个月随访期间观察组复发率为33.33%较对照组明显降低(59.52%,P<0.05);观察组发作频率达(6.85±2.11)次/周,显著低于对照组[(9.86±2.49)次/周,P<0.05]。2组治疗期间均未见明显不良反应。结论寻常型银屑病应用紫丹银屑胶囊联合NB-UVB治疗更能有效缓解患者症状体征,减轻皮损程度,下调血清中VEGF表达水平,控制复发,且安全可靠。

Er,Cr:YSGG激光对氟斑牙釉质与铸瓷粘接耐久性的影响

目的:评价Er,Cr:YSGG激光处理氟斑牙釉质后后者与铸瓷的粘接耐久性,以期为改善氟斑牙釉质与铸瓷贴面的粘接效果提供理论依据。方法:经Dean氏指标筛选无龋坏、无隐裂中度氟斑牙102颗,将其颊面分别制备成不小于3mm×3mm的牙釉质面,将其随机分为3组:涡轮机+磷酸30sec处理组、涡轮机+磷酸60sec处理组、Er,Cr:YSGG激光处理组,每组34个样本。其中每组筛选出24个样本制作成粘接试件,进行即刻微剪切粘接强度测试和冷热循环10000次后微剪切粘接强度测试;每组剩余的10个样本使用表面形貌三维测量仪测量其面粗糙度。结果:无论在即刻组还是温度老化组,Er,Cr:YSGG激光处理组均获得了最高的微剪切粘接强度,但其与涡轮机+磷酸60sec处理组之间差异无统计学意义(P>0.05),该两组的微剪切强度值均显著高于涡轮机+磷酸30sec处理组(P<0.05);在测试各组面粗糙度时,Er,Cr:YSGG激光组获得了最高的表面粗糙度,但其与涡轮机+磷酸60sec处理组之间差异无统计学意义(P>0.05),该两组的面粗糙度显著高于涡轮机+磷酸30sec处理组(P<0.05)。结论:相较于磷酸常规酸蚀而言,Er,Cr:YSGG激光处理氟斑牙釉质后能显著改善后者与铸瓷的粘接强度,在完成进一步激光最佳参数实验研究后可尝试用于临床上氟斑牙瓷贴面的修复病例。

GATA4通过p38MAPK信号通路调控牙周膜干细胞成骨分化

目的:体外研究GATA4(GATA binding protein 4,GATA4)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)成骨分化能力的影响及调控机制。方法:分离培养人牙周膜干细胞,检测GATA4在牙周膜干细胞成骨分化过程中的表达变化;在牙周膜干细胞中沉默或过表达GATA4,qPCR检测GATA4和成骨相关基因mRNA水平的表达;Western blot检测p38MAPK信号通路和GATA4蛋白水平的表达,茜素红染色观察细胞成骨分化能力的变化;检测p38抑制剂(SB203580)对转染GATA4后细胞成骨分化能力的影响。结果:成骨诱导后牙周膜干细胞中GATA4的表达水平显著上调,GATA4过表达可明显促进hPDLSCs成骨基因的表达和钙化结节的形成,而抑制GATA4的表达,则结果相反;GATA4过表达可增强p38 MAPK信号通路的表达,进一步实验结果表明SB203580可逆转过表达GATA4对牙周膜干细胞成骨分化的促进作用。结论:GATA4通过p38 MAPK信号通路促进牙周膜干细胞成骨向分化,提示GATA4在hPDLSCs组织工程损伤修复过程中发挥着重要作用。

富血小板纤维蛋白膜在位点保存应用中对牙龈组织愈合、骨量保存的影响分析

目的将富血小板纤维蛋白膜(PRF)用于引导骨组织再生位点保存术中,分析其对牙龈组织愈合、骨量保存的影响。方法选取拔牙后行骨组织再生位点保存术的患者66例,随机分为两组,试验组33例,Bio-Oss植骨材料表面覆盖PRF膜,对照组在Bio-Oss植骨材料表面覆盖Bio-Gide膜,比较术后1W、术后2W各时段创面愈合率,通过CBCT比较术前、术后3个月牙槽骨唇腭向高度及厚度。结果试验组创面愈合时间与对照组相比,相对更短(P <0.05);试验组术后1W、术后2W各时段创面愈合率与对照组相比,均相对更高(P <0.05);两组拔牙前牙槽骨高度、宽度相比,差异均不明显(P> 0.05),两组术后3个月牙槽骨高度、宽度均有所丢失,但试验组槽骨高度、宽度与对照组相比,均相对更高/宽(P <0.05)。结论富血小板纤维蛋白膜用于骨组织再生位点保存术中效果显著,可促进牙龈组织快速愈合,减少骨量丢失,促进新生骨生成,为种植牙奠定良好基础,值得临床应用。

帐篷螺丝技术在下前牙区同期种植时水平骨增量的临床评价

目的:评价帐篷螺丝技术在下前牙区同期种植时水平向骨增量的临床应用效果。方法:18例下颌前牙区有较严重的水平向骨缺损时使用帐篷螺丝技术进行水平向骨增量,同期植入骨水平植体,植入术后6个月行二期手术,1月后进行上部修复,1年复诊。CBCT测量术前及术后6个月、修复后1年牙槽嵴宽度。采用单因素重复测量方差分析对所获数据进行统计分析。结果:18例患者38个种植位点,均获得较满意的骨增量效果。术前及术后6个月、修复后1年牙槽嵴宽度分别为(3.54±0.11)、(6.82±0.08)和(6.17±0.07)mm,统计分析显示术后6月牙槽嵴宽度较术前明显增加(P<0.05)。与术后6个月相比,修复后一年牙槽嵴宽度减小(P<0.05)。结论:下前牙区种植体植入伴严重水平向骨缺损时,行帐篷螺丝骨增量技术可获得较好的骨增量效果。

加拿大公认会计原则的发展和构成

一、公认会计原则的发展在加拿大,由加拿大特许会计师公会(CICA)负责发表会计准则,这些准则构成了加拿大公认会计原则即GAAP的基本内容。加拿大的会计准则始发于1946年,第一个会计准则是由CICA所属的会计和审计研究委员会发布的,直到1972年才改由CICA直接发表会计准则。1972年,加拿大证券管理委员会发布国家政策公告第27号,指定《加拿大特许会计师公会手册》为加拿大的公认会计原则,即GAAP。证券管理委员会是证券法的制定机构,由各省政府和证券交易委员会派员组成。1975年,加拿大《商业公司条例》认可了这一规定;1978年,安大略证券委亦指定该手册为公认会计原则。至此,加拿大特许会计师公会就成了加拿大公认会计原则的法定颁布者。

钛网在上前牙唇侧重度骨缺损种植中的临床研究

目的:探讨在上前牙种植时使用钛网联合胶原膜和富血小板纤维蛋白(platelet rich fibrin,PRF)在修复唇侧骨板重度缺损的骨再生效果。方法:选择20例上前牙种植唇侧骨板重度缺损的患者,随机分为两组。一组使用骨粉+胶原膜+PRF进行骨增量,一组使用钛网+骨粉+胶原膜+PRF进行骨增量。埋入式愈合6个月二期手术,1月后修复。观察两组患者术前骨缺损情况及二期手术、修复1年后唇侧的骨厚度及边缘骨高度,并进行统计分析。结果:二期手术时实验组唇侧骨板重建丰满,新骨覆盖种植体顶端,CBCT示唇侧颈部骨厚度为2.82±0.12mm,对照组唇侧虽有新骨形成但成骨量较少,CBCT示唇侧骨厚度1.03±0.11mm,二者具有明显差异。对照组修复后1年唇侧骨厚度0.97±0.13mm,骨高度降低1.10±0.03mm。实验组修复后1年唇侧骨厚度2.77±0.21mm,骨高度降低0.89±0.05mm,但仍在植体顶端,与对照组有明显差异(P<0.05)。结论:在上前牙种植唇侧重度骨缺损时联合使用钛网和胶原膜引导骨再生(guided bone regeneration,GBR)比单纯使用胶原膜引导骨再生有更明显的成骨效果,因此在前牙重度骨缺损时可加用钛网保障骨增量的效果。

预成型钛网在美学区引导骨再生的短期临床效果观察

目的:观察预成型钛网在上前牙种植时重建唇侧骨板重度缺损的短期临床效果。方法:唇侧骨板重度缺损的前牙种植患者,术中用预成型钛网维持成骨空间,联合骨粉、富血小板纤维蛋白(platelet rich fibrin,PRF)和胶原膜引导骨再生(guided bone regeneration,GBR)。CBCT测量二期手术时、修复后6个月、1年及2年植体唇侧的骨厚度及边缘骨高度。红色美学指数(pink esthetic score,PES)对修复后各个时期的软组织进行评分。所获数据进行单因素方差分析和SNK-q检验分析。结果:二期手术时、修复后6个月、1年及2年唇侧的骨厚度分别为(:3.08±0.32、3.03±0.21、2.99±0.19、2.99±0.17)mm,边缘骨高度降低量分别为:高于顶端(0.51±0.12、0.69±0.12、0.69±0.15)mm。统计分析显示1年内骨厚度、骨高度变化有统计学意义(P<0.05),而1年后趋于稳定。各个时期的PES评分与骨量的变化基本一致。结论:在前牙美学区种植存在重度骨缺损时联合使用预成型钛网、胶原膜和PRF引导骨再生的成骨效果显著、稳定,是一种有效的骨增量方法。

PRF在上颌窦内提升术中促进骨愈合的临床作用分析

目的分析研讨富血小板纤维蛋白(PRF)在上颌窦内提升术中促骨愈合的临床作用。方法随机选取该院2016年4月至2018年2月期间接受上颌窦内提升术治疗80例作为研究对象,根据其植入体分组,其中40例接受植入人工骨粉+PRF混合物并同期植入植体(研究组),另40例接受植入人工骨粉联合同期植入植体(对照组),患者均接受影像学检查其新骨形成和人工骨粉降解状况,并计算新骨密度指标。结果2组患者种植体均无脱落,伤口愈合良好,未发生炎性反应(牙龈流脓、破溃、肿胀充血等)和上颌窦黏膜穿孔。术后1个月,患者接受X线片检查,人工骨粉无降解,有较少新骨形成。术后3个月,研究组有新骨形成,人工骨粉出现降解,但对照组无一例人工骨粉降解,较少新骨形成。术后6个月,研究组人工骨粉完全降解,有显著新骨形成,对照组部分骨粉降解,新骨形成较少。研究组术后1、3、6个月时CT值均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PRF可促进上颌窦内新骨形成,增强新骨质量,对骨组织愈合有促进作用。

苯肾上腺素对早期放射损伤大鼠颌下腺MHC Ⅰ类分子表达的影响

[目的]研究苯肾上腺素对放射损伤早期大鼠颌下腺MHCⅠ类分子表达的影响。[方法]Wistar大鼠27只,随机分为空白对照组、单纯照射组及照射给药组(腹腔注射苯肾上腺素5 mg/kg,2次/d),以直线加速器对大鼠颌下腺区域行20 Gy照射。照射后7 d取颌下腺组织,采用免疫组织化学法检测颌下腺MHCⅠ类分子的定位与表达;半定量逆转录聚合酶链法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测颌下腺MHCⅠmRNA的表达。[结果]免疫组织化学结果显示:MHCⅠ类分子表达在空白对照组主要在颌下腺腺泡细胞及导管细胞的胞浆和胞膜;单纯照射组在腺泡细胞胞膜及细胞间质的表达较空白对照组增加;而苯肾上腺素连续给药组在腺泡细胞膜及间质的表达较单纯照射组显著减少。RT-PCR结果显示:单纯照射组MHCⅠmRNA的表达较空白对照组增加了45.85%(P<0.05),而苯肾上腺素连续给药组MHCⅠmRNA的表达较单纯照射组减少了33.88%(P<0.05)。[结论]苯肾上腺素能够下调放射线照射损伤所致大鼠颌下腺MHCⅠ类分子的表达。

苯肾上腺素预处理对放射损伤颌下腺RT1-A的影响

目的探讨苯肾上腺素预处理对放射损伤早期大鼠颌下腺RT1-A表达的影响。方法取Wistar大鼠27只,随机分为空白对照组、单纯照射组及苯肾上腺素预处理组。预处理组大鼠于照射前半小时腹腔注射苯肾上腺素5mg/kg。应用直线加速器给予大鼠颌下腺区域20Gy X射线照射。照射后7天取大鼠颌下腺组织,应用免疫组织化学法检测各组大鼠颌下腺RT1-A(小鼠抗人HLAⅠ单克隆抗体,抗体浓度为1:200)的定位与表达;应用半定量逆转录聚合酶链法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测各组大鼠颌下腺RT1-A mRNA的表达。结果免疫组织化学结果显示:在空白对照组RT1-A主要表达于腺泡细胞及导管细胞的胞浆和胞膜;单纯照射组RT1-A在腺泡细胞胞膜和细胞间质的表达增加;而苯肾上腺素预处理组RT1-A在腺泡细胞胞膜及间质的表达较单纯照射组明显减少。RT-PCR结果显示:单纯照射组RT1-A mRNA的表达较空白对照组增加了40.14%(P<0.05),苯肾上腺素预处理组RT1-A mRNA的表达较单纯照射组下降了45.02%(P<0.05)。结论放射线照射损伤早期可使大鼠颌下腺RT1-A的表达增加,苯肾上腺素能够下调放射损伤后RT1-A的表达,提示a1-肾上腺素受体活化参与了颌下腺放射损伤后免疫调节,为探寻防治颌下腺放射损伤的方法提供了新策略。

LncRNA MEG8靶向miR-203调控人牙周膜干细胞成骨分化的机制研究

目的:体外研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)MEG8调控人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)成骨分化能力并探究其调控机制。方法:体外分离、纯化培养hPDLSCs,q PCR检测hPDLSCs成骨诱导前后lnc RNA MEG8和成骨相关基因Runx2、Osx、Ocn、Opn的表达改变;通过MEG8过表达及sh RNA慢病毒转染hPDLSCs并鉴定转染效率;通过Western blot检测RUNX2、OSX、OCN、OPN的表达变化,茜素红染色法检测hPDLSCs成骨诱导后钙化结节的生成情况;借助生物信息学方法分析lnc RNA MEG8的候选靶基因,并通过双荧光素酶报告实验进一步验证潜在靶基因;通过共转染miR-203 mimics和lnc RNA MEG8过表达慢病毒,分析共转染后hPDLSCs成骨分化能力的变化。结果:Runx2、Osx、Ocn、Opn成骨基因及lnc RNA MEG8的表达在hPDLSCs成骨诱导后显著上调;敲降lnc RNA MEG8可抑制hPDLSCs成骨分化并下调RUNX2、OSX、OCN、OPN蛋白的表达,而在hPDLSCs中过表达lnc RNA MEG8,则结果相反;通过相关性分析发现miR-203与lnc RNA MEG8呈负相关;进一步通过生物信息学分析lnc RNA MEG8的潜在靶基因含有miR-203,双荧光素酶报告实验验证miR-203为MEG8的靶基因;共转染实验结果发现miR-203 mimics可逆转lnc RNA MEG8对hPDLSCs成骨分化的促进作用。结论:Lnc RNA MEG8可靶向调控miR-203促进hPDLSCs成骨分化能力,提示lnc RNA MEG8可作为牙周炎的潜在干预和治疗靶点。