笋用林3种竹笋夜蛾多重PCR鉴定技术的建立与应用

【目的】建立鉴定竹笋夜蛾物种的多重PCR技术,用于浙江省笋用竹的3种竹笋夜蛾幼虫的物种鉴定。【方法】针对COI基因的变异区设计物种特异性多重PCR引物;优化影响多重PCR反应的参数,建立鉴定竹笋夜蛾的多重PCR技术;采用标准DNA模板评价多重PCR技术的敏感性和特异性;利用多重PCR技术对林间采集的竹笋夜蛾幼虫进行物种鉴定。【结果】针对3种竹笋夜蛾COI基因的变异区设计了3条物种特异性多重PCR引物,与通用引物LCO1490配合使用,扩增竹笋基夜蛾、竹笋禾夜蛾和笋秀夜蛾COI基因片段,大小分别为290、390和590 bp。优化后的多重PCR鉴定技术的反应体系为:2×HotStart Taq PCR预混试剂10μL,10μmol·L^(-1)的引物LCO1490、JYE290、HYE390和QTYE590各0.5μL,DNA模板1μL,加ddH2O补足20μL。优化后的多重PCR鉴定技术的反应条件为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,59℃退火30 s,72℃延伸30 s;72℃下延伸10 min,循环数为35。多重PCR鉴定技术对笋秀夜蛾的最低检出限为0.01 ng·μL^(-1),对竹笋禾夜蛾和竹笋基夜蛾的最低检出限低于0.001 ng·μL^(-1)。林间样品鉴定结果表明,所有38份DNA都能扩增出明显的特异性条带,鉴定成功率100%;经测序验证,本研究的技术鉴定的物种与经COI基因序列鉴定的物种一致。【结论】研究建立了浙江省笋用竹的夜蛾的多重PCR鉴定技术,能够快速高效鉴定浙江省笋用林内竹笋夜蛾幼虫的物种,该技术具有鉴定周期短、灵敏度高、特异性强、准确度高等优点。

九龙山自然保护区四种生境土壤的虫生真菌多样性

为明确浙江省九龙山国家级自然保护区不同生境下的土壤虫生真菌多样性及分布特点,给该区域虫生真菌的开发利用及物种多样性提供科学依据,本研究以九龙山自然保护区四种不同生境(茶园、红薯地、人工林、原始林)的土壤为研究材料,通过illumina NovaSeq测序平台测序得到有效数据,分析四种生境下20个土壤样品中的真菌多样性与虫生真菌的群落结构组成,探讨虫生真菌与土壤环境因子的相关性。结果发现:四种生境下林地(原始林、人工林)土壤的虫生真菌相对丰度高于农业用地(茶园、红薯地);四种生境土壤的虫生真菌群落具有显著差异,原始林与人工林中的最优势属是弯颈霉属,茶园与红薯地中的最优势属分别为镰刀菌属和绿僵菌属;该地区土壤碳氮比和全氮水平是影响虫生真菌菌群的极显著环境因子,林地土壤的虫生真菌菌群与土壤碳氮比、全氮水平正相关,农业用地土壤中的虫生真菌群落与土壤全磷、速效磷含量正相关;四种生境土壤虫生真菌相对丰度排行前十的属中,绿僵菌属、棒束孢属、虫草属与土壤碳氮比、全氮水平极显著正相关,镰刀菌属与其极显著负相关。该研究结果表明,九龙山自然保护区虫生真菌种类丰富,生境类型影响虫生真菌的丰富度,林地土壤的虫生真菌相对丰度较高。该地区的优势虫生真菌主要集中于3个属:绿僵菌属、弯颈霉属、镰刀菌属。