8个miniSTR基因座复合扩增系统的建立及其应用

目的建立扩增片段<200bp,包含CSF1PO,TH01,TPOX,D3S1358,FGA,D7S820,D21S11,PentaD8个miniSTR基因座的复合扩增体系。方法采用四色荧光染料标记引物,PCR扩增后,应用ABI3130遗传分析仪进行片段长度分析,对280例无关个体,137例疑难生物物证进行了检验。结果280例无关个体的调查结果为除1例在CSF1PO基因座外,其余样本的各基因座分型结果与AmpFLSTR Identifiler试剂盒完全相同。与应用ID试剂盒比较,明显提高了137例疑难生物物证的检出率。结论该检测技术方法稳定,结果准确,重复性好,且其判型结果可进行DNA数据库查询、比对,为刑事案件及灾难事故中疑难生物物证的检验提供了一条新的途径。

人与动物mtDNA细胞色素b基因的序列差异

目的 探讨人与动物之间mtDNA细胞色素b(Cyt-b)基因序列差异及其种属鉴定。方法 采用1对Cyt-b基因通用引物对人和19种动物共171例样本的mtDNA进行PCR扩增,琼脂糖凝胶检测扩增产物,ABI 377测序仪及荧光测序技术分析扩增产物的DNA序列。结果 所有样本均检测到1条358bp的扩增片段;任何两种动物扩增片段的序列都不相同,人与19种动物的序列差异在18.9％-30.0％,19种动物之间的序列差异在5.9％-32.9％。同种动物不同个体间只有人、驴及小白鼠存在变异,最多有4个碱基变异位点(1.3％),其它动物未发现种内变异。结论 人与不同种动物的Cyt-b基因序列存在差异,以此可区分不同种属的动物。

人和动物SON基因3’非编码区的PCR测序分析

目的 研究人和猕猴、阿拉伯狒狒、猪、牛、羊、马、驴、骡、狗、猫、兔、大白鼠、小白鼠、豚鼠等14种哺乳类动物SON基因3’非编码区(3’UTR)的种属特异性碱基序列差异。方法 对人和上述14种哺乳类的SON基因3’非编码区中的部分种属特异性区域进行PCR测序分析。结果 人有2条扩增片段和14种哺乳类动物各有1条扩增片段的碱基序列;人无关个体和同一种属不同个体动物DNA扩增片段的碱基序列相同,人、猕猴、阿拉伯狒狒、猪、牛、羊、马、驴、骡、狗、猫、兔、大白鼠、小白鼠、豚鼠DNA的SON基因3’UTR扩增片段之间存在碱基序列差异。结论 SON基因3’UTR是一个具有良好种属特异性的遗传标记,采用SON基因3’UTR扩增测序技术可以对人和上述14种哺乳类动物进行准确的种属鉴定。

沈阳地区乙型肝炎病毒基因型分子流行病学研究

目的研究沈阳地区乙型肝炎病毒基因型分布和特点。方法应用半巢式聚合酶链反应(PCR)扩增乙型肝炎病毒P基因,将PCR产物应用ABI377自动测序仪直接做核苷酸序列分析,并用DNASTAR软件进行种系发生分析及基因型鉴定。结果HBVDNA标准株P基因片段可进行基因分型。在沈阳地区慢性HBV感染者中可检出基因型B、C和D,检出率分别为22%、50%和28%,基因型C分布与基因型B、D的差异有统计学意义,在慢性乙型肝炎患者和慢性HBV携带者间各基因型间分布比较中差异无统计学意义。结论通过测定HBVDNAP基因序列片段可进行HBVDNA基因分型。沈阳地区乙型肝炎病毒基因型有基因型B、C和D型,其中基因型C为优势基因型。