中脑导水管周围灰质和海马在ACTH镇痛中的相互关系

以往工作发现，中脑导水管周围灰质（ＰＡＧ）和海马在非阿片肽ＡＣＴＨ痛觉调制中占有重要地位。但它们之间的相互影响在ＡＣＴＨ痛觉调制中的作用，尚未阐明。本工作利用免疫组织化学和病阈测定方法，进一步观察大鼠ＰＡＧ和海马在ＡＣＴＨ镇痛时的相互关系，并与吗啡镇痛作用相比较。结果如下：（１）海马内注射ＡＣＩＨ（０．５ｕ／４μｌ）或吗啡（５μｇ／４μｌ），痛阈明显升高（１１９．３±４．７％，１２２．７±２６．８％）与对照组比较有显著差异（Ｐ＜０．０１），该明显效应均可被ＰＡＧ内注射阿片受体拮抗剂纳络酮所阻断；（２）ＰＡＧ内注射吗啡或ＡＣＴＨ后病阈提高更显著（１８０．９±５０．３％，２１９．８±７７．０％，Ｐ＜０．０１），但海马内注射纳络酮可阻断前者的效应（Ｐ＜０．０５）而对后者却无影响（Ｐ＞０．０５）；（３）伤害性刺激福尔马林（Ｆ）可诱发大鼠脊髓腰膨大背角原癌基因ｃ－ｆｏｓ显著表达，以Ⅰ、Ⅱ层较显著，海马或ＰＡＧ内注射ＡＣＴＨ均可抑制其背角ｃ－ｆｏｓ表达。结果提示：ＰＡＧ、海马均参与ＡＣＴＨ和阿片系统对脊髓痛信息传递的调制作用，在ＡＣＴＨ痛觉调制作用中，表明ＰＡＧ、海马之间的相互影响是复杂的。

微机控制的大鼠四路穿梭箱主动回避反应实验系统

目的:研制微机控制的四路穿梭箱主动回避反应实验系统,应用于认知神经科学、神经生理学、神经药理学等实验研究。方法:该系统由传感器、穿梭箱、刺激器、I/O接口、计算机及系统软件构成。以Windows操作系统作为研发平台,利用功能强大的可视化开发软件VisualC++.NET作为本系统开发工具。在硬件设计中,引进电磁兼容技术,使系统性能更加稳定。结果:本系统可同时精确地自动控制4只大鼠完成穿梭箱主动回避反应行为训练实验的全过程,从行为训练的自动控制到实验数据的实时采集、显示、实验结果打印及保存,实现了多路大鼠穿梭箱主动回避反应行为训练的自动化,无需实验者直接操作,节省了科研经费和人力,提高了工作效率。结论:该系统性能稳定、可靠,人机界面友好,操作简便;利用传感器检测动物行为活动,判断准确,定时精确。

猕猴行为训练自动控制系统的设计与实现(英文)

目的研制猕猴视觉分辨的Go/No-Go任务行为训练自动控制系统,应用于认知神经科学、神经生理学、神经药理学、心理物理学、精神科学等实验研究。方法该系统由图形刺激器、传感器、I/O接口卡、食物投放器、计算机及软件构成。以Windows操作系统作为开发平台,利用功能强大的可视化开发软件VisualC++6.0作为系统开发软件。在硬件设计中,引进电磁兼容技术,使系统性能更加稳定。结果本系统能精确地自动控制灵长类动物(猕猴)完成Go/No-Go任务行为训练实验的全过程,从行为训练的自动控制到实验数据的自动采集,实验了猕猴Go/No-Go任务行为训练的自动化,无需实验者直接操作,节省了科研经费和人力。结论该系统人机界面友好,利用传感器检测动物行为活动,判断准确,定时精确。

海马内注射MK-801对严重烫伤大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的激活

目的:探讨MK-801在严重烫伤大鼠血清皮质醇含量变化中的作用。方法:以大鼠背部30%TBSAⅢ度烫伤作为严重创伤应激模型,采用放射免疫测定和海马内微量注射方法。结果:①严重烫伤后0.5h,大鼠血清皮质醇含量即显著升高,2h达高峰,2d后仍明显高于正常对照组。②海马内微量注射MK-801可明显降低烫伤后血清皮质醇含量,与2h烫伤组比较差异显著,且与剂量大小有关。结论:海马内NMDA受体参与了严重烫伤下丘脑-垂体-肾上腺轴的激活。

视觉分辨的Go/No-Go任务行为训练自动控制系统的研制

目的 研制视觉分辨的Go No Go任务行为训练自动控制系统 ,应用于认知神经科学、神经生理学、神经药理学、心理物理学、精神科学等实验研究。方法 以Windows操作系统作为开发平台 ,利用功能强大的可视化开发软件VisualC + + 6.0作为本系统开发软件。在硬件设计中 ,引进电磁兼容技术 ,使系统性能更加稳定。结果 本系统能精确地自动控制灵长类动物完成Go No Go任务行为训练实验的全过程。结论 该系统性能稳定、可靠 ,人机界面友好 ,操作简便 ;利用传感器检测动物行为活动 ,判断准确 。

海马内注射半胱胺对大鼠海马生长抑素含量、痛阈和主动回避反应的影响

海马内注射半胱胺对大鼠海马生长抑素含量、痛阈和主动回避反应的影响Ｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｆｃｙｓｔｅａｍｉｎｅｉｎｔｏｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｎｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎｃｏｎｔｅｎｔｏｆｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，ｐａｉｎｔｈｒｅｓ...

电针抑制P物质引起的痛反应和脊髓c-fos表达

目的：观察电针“夹脊”穴对大鼠鞘内注射Ｐ物质（ＳＰ，１０μｇ）引起的痛反应和脊髓ｃ－ｆｏｓ原癌基因蛋白表达的影响。方法：采用免疫组织化学法和痛阈测定法。结果：大鼠鞘内注射ＳＰ可引起痛反应，并诱发脊髓ｃ－ｆｏｓ样免疫反应（ＦＬＩ）减少，此效应可部分被纳洛酮（Ｎｘ）翻转。结论：电针可能是通过内源性阿片肽抑制ＳＰ而产生镇痛作用。

严重烫伤大鼠海马NMDA受体活性变化的机制研究

目的 研究严重创伤对海马NMDA受体 (NR)活性的影响及其相关机制 ,为设法调节NR的活性从而控制创伤后HPA轴的过度兴奋提供实验依据。方法 以大鼠背部 3 0 %TBSAⅢ度烫伤作为严重创伤过度应激模型 ,利用放射配基结合法检测烫伤后海马NR活性 (最大结合容量及亲和力 )的变化 ;Western blot +免疫共沉淀方法检测烫伤海马NR1、NR2A、NR2B酪氨酸磷酸化的改变 ;高效液相色谱方法检测烫伤海马谷氨酸含量的变化。结果 严重烫伤后 0 5、1、2、4、8、2 4、48h海马NR的亲和力显著增加 ,尤以烫伤后 2h最为明显 ,最大结合量从 1h起亦显著增加 ;各时相点海马酪氨酸磷酸化NR1、磷酸化NR2A及磷酸化NR2B蛋白水平皆显著增高 ;烫伤后 0 5、1、2、4h ,海马内谷氨酸释放量增加非常明显 ,伤后 2 4h及 48h无明显变化。结论 严重烫伤导致海马NR持续过度激活 ;NR酪氨酸磷酸化水平的增加是其过度激活的重要原因 ,谷氨酸释放量的变化可能不是其持续激活的主要因素。

APP695和绿色荧光蛋白在PC12细胞中的共表达及对细胞的影响

目的 构建绿色荧光蛋白和瑞典突变型APP695共表达载体 ,将重组质粒转染PC12细胞获得高表达APP的PC12细胞克隆。观察基因转染后PC12细胞的细胞周期、超微结构和 β淀粉样蛋白的分泌情况。 方法 激光共聚焦显微镜挑选高表达绿色荧光蛋白的PC12细胞克隆。放射免疫方法测定 β淀粉样蛋白 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,电镜观察细胞超微结构。结果 瑞典突变型APP转染能使PC12细胞体积增大 ,形态变长 ,微绒毛增多 ,分泌Aβ增多 ,细胞周期中G0和G1 期细胞比例增多。结论 绿色荧光蛋白和瑞典突变型APP695共表达载体转染的PC12细胞可作为AD发病机制和治疗研究的细胞模型。

IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化在脑胶质瘤中表达及关联度分析

目的探讨脑胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenases 1,IDH1)突变和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子甲基化状态及二者之间的关联性。方法收集手术切除并经病理证实的脑胶质瘤组织133例,采用巢式甲基化特异性PCR(nested methylation-specific PCR,n MSP)法和甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法联合变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)法检测脑胶质瘤中的MGMT基因启动子甲基化情况,直接测序法检测脑胶质瘤中IDH1基因的突变情况。采用χ2检验进行IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化关联度的统计分析。结果 133例脑胶质瘤患者中MGMT基因启动子甲基化88例(66.17%),IDH1突变62例(46.62%)。IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化存在关联(P=0.01)。结论脑胶质瘤中IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化之间关联显著,提示两者在脑胶质瘤的发生发展中可能存在相互调节的作用;IDH1突变和MGMT基因启动子甲基化是脑胶质瘤的重要疾病相关因素。

海马NMDA受体在大鼠严重烫伤后HPA轴兴奋性变化中的作用

目的 研究海马N 甲基 D 天冬氨酸受体 (NMDA受体 ,NR)在创伤导致的HPA轴过度兴奋中的作用。方法 以大鼠背部 3 0 %TBSAⅢ度烫伤作为严重创伤过度应激模型 ,分别观察海马内微量注射NR的拮抗剂MK 80 1或NR的功能受体NR1的反义寡核酸 (Oligodeoxynucleotide ,ODN)对烫伤后 2h血清ACTH及皮质醇浓度的影响。结果 严重烫伤后2h ,血清ACTH及皮质醇浓度明显升高 ;与烫伤组相比 ,海马内微量注射生理盐水 ,没有明显改变烫伤后血清ACTH及皮质醇浓度 ;海马内微量注射MK 80 16μg可明显降低烫伤后血清ACTH及皮质醇浓度 ;注射MK 80 112 μg可进一步降低血清ACTH及皮质醇浓度 ;注射NR1反义ODN 10nmol L可明显降低烫伤后血ACTH及皮质醇浓度 ;注射 2 0nmol L可进一步降低血清ACTH及皮质醇浓度。结论 海马NR参与了烫伤HPA轴的过度激活。

脑内注射P物质对大鼠痛阈、电针镇痛和不同脑区甲啡肽含量的影响

脑室内注射(icv)P物质(substance P,SP,1μg/10μl)可使痛阈明显升高,纹状体、下丘脑内甲啡肽样免疫活性物质(Ir-MEK)含量显著增多(P<0.05～0.01),而海马内Ir-MEK含量无明显变化 电解损毁中脑导水管中央灰质(PAG)后,SPicv升高痛阈和二脑区内Ir-MEK含量的作用显著降低(P<0.05～0.01)。 将SP注入PAG(0.4μg/4μl),电针“夹脊”穴(5Hz、3V)或腹腔注射吗啡(3mg/kg)均可使痛阈和纹状体、下丘脑内Ir-MEK含量显著升高。在SP注入PAG或腹腔注射吗啡时,海马内Ir-MEK含量也明显提高。将SP注入PAG加电针刺激增强上述效应的作用更为显著(P<0.01)。将SP注入PAG加腹腔注射吗啡增强上述效应的作用却未见进一步升高(P>0.05)。结果表明SP可能经PAG使脑内甲啡肽含量增加而发挥镇痛效应,SP注入PAG与电针具有协同作用。

脑内注射P物质对大鼠不同脑区5-羟色胺含量的影响及其与痛阈、电针镇痛的关系

脑室和中脑导水管周围灰质(PAG)内注射 P 物质(SP),观察大鼠下丘脑、海马和纹状体内5-羟色胺(5-HT)含量的变化及其与痛阈、电针镇痛的关系,结果如下:(1)脑室注射 SP可使痛阈和下丘脑、海马内5-HT 含量显著升高;应用对氯苯丙氨酸降低脑内5-HT 后。

大鼠脑内GABA含量与细胞免疫在ACTH镇痛中的相互影响

促肾上腺皮质激素(ACTH)可提高海马内 r-氨基丁酸(GABA)含量和痛阈,降低淋巴细胞转化指数和白细胞介素Ⅱ(IL-Ⅱ)的产生。GABA 合成酶抑制剂异烟肼(INH)和 GABA 受体阻断剂印防(?)毒素(PTX)可对抗 ACTH 升高痛阈和降低淋巴细胞转化指数和 IL-Ⅱ产生的作用;而免疫抑制剂环孢素 A(CyA)则可削弱 ACTH 镇痛及其提高海马内 GABA 含量的效应。结果提示 ACTH可通过海马 GABA 增多而镇痛,ACTH 对细胞免疫的抑制作用可能与脑内 GABA 有关,细胞免疫可能参与 GABA 含量的调节,GABA 合成及其受体在下述作用中起着重要的介导作用。

严重烫伤后大鼠海马NMDA受体通道特性的变化

目的 研究严重创伤对海马NMDA受体功能的影响 ,为控制创伤后的过度应激反应提供实验依据。方法 以大鼠背部 3 0 %TBSAⅢ度烫伤作为严重创伤过度应激模型 ,利用细胞贴附式膜片钳技术 ,观察严重烫伤后 0 .5、1、2、4、8、2 4、48h海马NMDA受体单通道电流的变化。结果 在 3 5pS电导水平的开放中 ,各烫伤组海马NMDA受体的电流幅度与对照组相比无显著差异 ,但开放概率增加非常显著 ,烫伤后 0 .5、1、2、4、8h组开放时间常数τ1和τ2均比对照组显著增加 ,各烫伤组关闭时间无明显变化。在 10 0pS电导水平的开放中 ,各烫伤组电流幅度与对照组相比无显著改变 ,但通道开放概率增加非常显著。 2h烫伤组开放时间常数τ1和τ2也比对照组显著增加 ,通道的关闭时间无明显差异。结论 严重烫伤主要引起海马NMDA受体通道开放概率显著增加 ,导致NMDA受体通道显著激活。

在生理学实验教学中进行素质教育的探讨

生理实验教学是对学生进行系统、规范的实验技能训练，使其在理解巩固理论知识上灵活运用。实验教学中注重创新能力的培养，是医学生素质教育的体现。重视生理实验教学，通过提高教员教学水平、优化实验内容、改革教学模式、改革考试内容等几方面的努力，落实素质教育，培养具有创新意识和能力的高素质医学人才。

生理学机能实验课的备课体会

生理学机能实验是学生掌握并巩固理论知识的重要方法。实验教学的目的不仅在于验证理论,学习实验方法,训练学生的基本操作和技能,更重要的是提高学生的综合素质,因此机能实验教学就具有重要的意义。机能实验学备课内容相对复杂,而备课是否充分直接影响到课堂教学的质量和效果。结合多年来实验教学经验,介绍了在备课方面所做的工作。