平榛主要过敏原Corh1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组Cor h 1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选分泌特异性McAb的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该McAbs的特性和交叉性。结果获得4株可稳定分泌鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的McAbs,其Ig亚型均为IgG1,均具有良好的效价;ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组Cor h 1蛋白,其中3株单抗能够识别天然平榛提取物。结论成功制备了4株鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体,为建立平榛主要变应原Cor h 1检测及纯化方法奠定了基础。

榛子主要过敏原Cor h 1单克隆抗体识别抗原表位区域的确定

目的确定已获得的四株榛子主要过敏原Cor h1单克隆抗体识别的抗原表位区域。方法构建谷胱甘肽疏基转移酶(GST)与Cor h1不同截短体的表达载体并表达GST-Cor h1融合蛋白,采用ELISA和Western blot检测单抗与不同融合蛋白的反应,并结合DNAstar表位分析软件推知不同单抗的抗原识别表位区域。结果确定了四株Cor h1单抗的抗原识别表位区域,分别是4G7和2H3抗体的抗原表位位于Cor h1第120～126位氨基酸,5F2和1G4抗体的抗原表位位于Cor h1第43～52位氨基酸。结论四株Cor h1单抗的抗原识别表位区域的确定,为Cor h1的进一步研究和食品安全检测奠定了基础。

花生过敏原Ara h2.02的克隆、表达及免疫学鉴定

通过提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h2.02基因,将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序,将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中,IPTG诱导表达、Western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性.测序结果表明:克隆的花生Ara h2.02基因片段全长为519 bp,编码为172个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同.诱导表达后的蛋白经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting结果表明该蛋白能与花生过敏病人混合血清中的IgE结合,具有免疫原性.成功克隆并表达了花生过敏原Ara h2.02,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性.

整合区域教育资源,优化创新育人生态——以深圳市南山区荔香学校创新人才培养教育生态的优化实践为例

创新人才是善于发现问题,能够利用所学知识和能力解决问题,并在此过程中提升责任感、自信心、合作力和创造性的时代新人。培养创新人才的有效途径应是有效整合校内外教育资源,优化国家和地方性课程内容,深挖周边教育资源,开发和实施主题式的社会实践活动,让学生在真实情境中去体验和感悟,提升学生独立思考、沟通合作、自我管理、解决问题等方面的能力,为学生成长发展创设良好的育人生态,促进学生素质的全面提升。在实践中,广东省深圳市南山区荔香学校对内统筹课程资源建设,实施了“1+1+X”课程,发挥教师整体效能,通过线上和线下相结合的模式,创新了特色综合实践活动;通过“校与馆、校与校、校与社、校与家”四维度教育资源的整合,有力地优化了创新人才培养的学校生态。

白纹伊蚊AL-100 30ku蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建

目的克隆白纹伊蚊主要过敏原AL-100 30ku蛋白基因,并构建其原核表达载体。方法RT-PCR克隆白纹伊蚊主要过敏原AL-100 30ku的全长基因,设计简并引物,扩增白蚊伊蚊30ku的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接,构建原核表达载体。结果成功克隆白纹伊蚊主要过敏原30ku基因并构建其原核表达载体。该基因含有长度为816bp的开放阅读框,编码271个氨基酸。该蛋白质的分子质量单位为28.33ku,等电点为4.04,编码序列与数据库中已知的白纹伊蚊30ku基因的同源性为99%。结论成功克隆了白蚊伊蚊主要过敏原30ku基因并构建了原核表达载体,为白纹伊蚊主要过敏原30ku蛋白的重组表达和免疫活性鉴定等奠定了基础。

鳙鱼变应原小清蛋白单克隆抗体制备及鉴定

目的制备、纯化及鉴定抗鳙鱼小清蛋白单克隆抗体。方法以重组鱼主要过敏原小清蛋白(parvalbu-min)为抗原免疫BALB/c小鼠,融合免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1,半固体培养基法结合有限稀释法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,采用蛋白A亲和层析法获得纯化抗体,间接ELISA方法和w estern blot鉴定抗体效价和特异性以及与其他过敏源的交叉反应性;采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型。结果共获得抗parvalbumin细胞株7株,1G1,1B5,1A5,2B9,1H4,1B7,1G3。1G1、1B7、1A5、1H4和1G3效价均高于1∶400 000,P/N>2.1;1B5效价高于1∶200 000,2B9效价较低;Western blot检测表明所有抗体均能识别parvalbumin;抗体亚类为IgG1型,1G1,1A5,2B9,1H4,1B7特异性结合parvalbumin,与其他种类过敏原无交叉反应,1G3和1B5与虾和大豆过敏原有交叉反应性,P/N>2.1。结论获得高效价抗体5株,发现parvalbumin与虾、大豆过敏原存在交叉反应性,为建立parvalbumin检测体系提供依据。

不同加工方式对牛奶过敏原免疫原性的影响

方法:提取其中奶制品的蛋白质,SDS-PAGE分析组分并用混合血清进行免疫印迹。使用间接ELISA比较原奶和加工过的牛奶的IgG结合能力。结果:实验结果表明酸奶和蛋白酶水解(HA)奶粉的蛋白质组分较其他样品有显著变化,印迹结果显示经煮沸的牛奶、配方奶粉、酸奶和HA奶粉免疫原性明显较低,ELISA结果指示经煮沸的牛奶、配方奶粉、酸奶和HA奶粉特异性IgG结合能力均有不同程度的减小。结论:实验结果表明加热、发酵和水解可能使牛奶免疫原性降低。