白血病大鼠化疗后血液中集落刺激因子、造血干细胞和残留白血病细胞动态观察

动态观察了白血病大鼠大剂量化疗后血液中血清集落刺激因子(CSF)、造血干细胞(HSC)和残留白血病细胞的变化。研究结果证明,白血病化疗后血清CSF最早出现,然后HSC增殖并向周围血液迁移,接着周围血细胞开始恢复,血液中白血病细胞出现最晚。随着血液中白血病细胞的增加,正常血细胞随之下降。揭示正常造血细胞与白血病细胞相互竞争而消长的规律,无疑有助于我们了解白血病复发的机理。

振明正生对人肿瘤细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其急性毒性试验

目的:评估中药复方振明正生合剂对人肝癌、肺癌和大肠癌的抑制作用及其安全性。方法:Balb/c裸鼠分别接种人肝癌细胞系L7402、人肺癌细胞系A549和人大肠癌细胞SW4802×106/只。接种后24小时开始给药,实验组动物每天口服振明正生0.2ml/只,连续4周。对照组口服生理盐水0.2ml/只。每周测量实验组和对照组动物肿瘤大小,计算肿瘤生长抑制率。振明正生原液浓缩6倍,按照每只小鼠灌胃最大容量,口服浓缩药物0.6ml/20g。观察24小时,计算LD50。结果:振明正生对三种人肿瘤裸鼠移植瘤均有明显的抑制肿瘤生长的作用。经过3或4周的治疗,该中药对肝癌模型的抑制率超过79%(P<0.05),对大肠癌模型抑制率超过60%(P<0.05),对肺癌模型的抑制率达到41%(P<0.05)。LD50大于180ml/kg。结论:振明正生对这三种肿瘤模型具有显著的治疗作用,为无毒/低毒制剂。

振明正生合剂对5种人肿瘤细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其急性毒性试验

目的评估振明正生合剂对人肺癌、大肠癌、神经胶质瘤、肝癌、乳腺癌的抑制作用及其安全性。方法①Balb/c裸鼠分别接种人肺癌细胞系A549、人大肠癌细胞系SW480、人神经胶质瘤细胞系Ln229、人肝癌细胞系L7402和人乳腺癌细胞系MB231,2×10^6只^-1。接种后24 h开始给药,实验组每天口服振明正生合剂0.2 mL/只,连续4周。对照组口服生理盐水0.2 mL/只。每周测量实验组和对照组动物肿瘤大小,计算肿瘤生长抑制率。②振明正生合剂原液浓缩6倍,按照每只小鼠灌胃最大容量,口服浓缩药物0.6 mL/20 g。观察24 h,计算LD50。结果①振明正生合剂对5种人肿瘤裸鼠移植瘤均有明显的抑制肿瘤生长作用。经过3-4周的治疗,该中药对肺癌模型的体积抑制率达到41%（P〈0.05）,对大肠癌模型质量抑制率超过60%（P〈0.05）,对神经胶质瘤模型质量抑制率超过69%（P〈0.05）,对肝癌模型质量抑制率超过79%（P〈0.05）,对乳腺癌模型的质量抑制率达到94%（P〈0.01）。②LD50大于180 mL/kg。结论振明正生合剂对这5种肿瘤模型均有显著的治疗作用,振明正生合剂为无毒/低毒制剂。

骨髓移植造血重建过程中干/祖细胞增殖特性的研究<英文>

为了探讨骨髓移植造血重建过程中干/祖细胞增殖的特性,我们采用病理形态学、BMNC计数、抗5-FU BMNC计数、外源性CFU-S(12)和骨髓连续移植等方法,对造血重建过程不同阶段的干/祖细胞增殖特性,进行了动态的对比研究。实验结果表明,在移植后第3天,骨髓内可见少数淋巴样细胞呈小灶性分布,第5—9天细胞灶迅速扩大,细胞形态表现为淋巴样细胞,至第11天才出现不同阶段的分化细胞;第5—9天BMNC数和抗5-FU BMNC数迅速增加,随后增殖速度明显减缓;第9天骨髓的CFU-S(12)数和重建长期造血的能力高于第5天和21天的骨髓。本实验结果提示,骨髓移植后造血细胞呈小灶性分布,重建造血初期造血干/祖细胞迅速增殖而无明显分化表现,此阶段骨髓细胞的重建长期造血能力增强,提示造血干细胞有扩增。

三株人白血病细胞系/SCID小鼠模型的建立及其生长特性

本文报道了3株人白血病细胞系(HL-60,CEM和J6-1/SCID)小鼠模型的建立及其生长特点。发现人粒细胞白血病细胞系(HL-60)和T淋巴细胞系(CEM)给SCID小鼠静脉或腹腔移植后均发生全身性白血病,外周血可见白血病细胞。J6-1细胞(可能来自恶性淋巴瘤)眼眶后静脉移植后具有恶性淋巴瘤生长特点,在局部形成瘤块(与瘤细胞漏出血管有关),并侵及颌下淋巴结,无全身性播散。由此可见,人白血病细胞/SCID小鼠模型更类似于人类白血病,是进行人类白血病研究新的良好的模型。

复方丹参注射液增强白血病细胞放射敏感性作用的研究

目的 :探索复方丹参注射液对白血病细胞放射敏感性的影响。方法 :采用半固体琼脂集落培养及流式细胞仪法 ,观察HL60细胞株及新鲜白血病细胞经过药物作用后 ,其放射敏感性的变化。结果 :复方丹参注射液与HL60细胞混合培养后照射 ,细胞存活曲线斜率的倒数 (D0 )、放射剂量为 2Gy时的活存比率 (SF2 )分别由 1 5 3、0 3 4降至 0 93、0 1 2 ,细胞凋亡显著增多 ;这种效应与药物浓度及作用时间存在良好的相关性 ;放射诱导的新鲜白血病细胞凋亡率与对照组 (5 89± 2 91 % )相比 ,复方丹参组 (1 2 0 5± 3 0 6% )明显增加。结论 :复方丹参注射液具有明显的放射增敏效应。

益气养阴方对白血病细胞Caspase-3及Bcl-2表达的影响

目的 研究益气养阴方对白血病细胞Caspase-3及Bcl-2蛋白表达的影响,探讨复方中药诱导白血病细胞凋亡的机制。方法 给EL9611红白血病小鼠灌服益气养阴方水煎剂13 d后处死,取股骨骨髓细胞,用免疫组化法测细胞Caspase-3及Bcl-2蛋白表达。结果 益气养阴方组与对照组比较,Caspase-3表达阳性率增加(P<0.01);Bcl-2表达积分下降(P<0.01)。结论 益气养阴方上调白血病细胞Caspase-3表达、下调Bcl-2表达是其诱导白血病细胞凋亡的重要途径。

骨形态发生蛋白激活自身肌肉间质细胞拯救骨髓衰竭

目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)激活自身肌肉间质细胞以拯救骨髓造血衰竭的作用。方法采用5-氟脲嘧啶与白消安合用诱导大鼠致死性再生障碍性贫血模型,于诱导再障前3d肌肉内植入重组人-BMP-2(rh-BMP-2),并以肌肉内植入琼脂为对照。观察血象、病理形态等变化以及两组再障大鼠的死亡率。同时,给正常小鼠大腿肌肉内植入rh-BMP-2,动态观察植入后局部的形态变化、形成骨及骨髓的形态特点,脾集落形成单位以及基质细胞干细胞生长因子(SCF)的表达。结果小鼠在BMP肌肉内植入1周内,在BMP周围有大量间质细胞增殖,随后形成骨及骨髓,其骨髓基质细胞的SCF表达明显高于自体骨髓;BMP植入组的再障大鼠,不仅血象与对照相比有明显改善,而且死亡率也明显下降,有56.3%大鼠存活超过3个月,其血象完全恢复正常,骨髓和脾脏的组织形态学改变也恢复正常。对照大鼠除1只存活超过3个月外(占4.3%),其余均死于急性再生障碍性贫血。结论BMP肌肉内植入可拯救骨髓造血衰竭,其机制可能与BMP诱导成年自体肌肉内存在的干细胞向造血分化有关;本研究结果为应用成体自身干细胞进行细胞治疗提供了新的途径。

低剂量照射治疗免疫介导性再生障碍性贫血的实验研究

免疫介导性再生障碍性贫血(immuno-mediated aplastic anemia,IMAA)时淋巴细胞处于激活状态,被抑制的造血干细胞处于静止状态,据此本研究探讨一项新的治疗IMAA的策略,即利用激活的淋巴细胞和静止的造血干细胞对放射敏感性的差异,给IMAA小鼠低剂量全身照射,此低剂量照射既可杀灭免疫活性淋巴细胞,解除它对造血干细胞的抑制,又不损害造血干细胞,从而使造血得以恢复。实验应用免疫介导性再生障碍性贫血小鼠模型完成,于造模后第4天全身照射150cGy,以不治疗照射组和单纯照射组小鼠为对照,观察各组小鼠生存时间和生存率、血象和骨髓有核细胞数、骨髓和淋巴组织的病理形态改变。结果表明:①IMAA组小鼠活存率为12.5%,平均存活时间为27.4±13.4天,照射治疗组活存率为100%,平均存活时间60天以上,单纯照射组无死亡;②外周血白细胞数:IMAA组呈进行性下降,直至死亡,照射治疗组第10天与免疫再障组相似,以后开始缓慢回升,基本上达到治疗前水平;③红细胞比容:未治疗IMAA组于14天后呈进行性降低,至第35天比实验前减低2/3,照射治疗组与单纯照射组一样,第14天有轻度减低随后升高,至35天接近正常;④骨髓有核细胞数:IMAA组呈进行性减低,无恢复趋势,照射治疗组于一过性减低后迅速增加,第28天达到正常水平;⑤骨髓和淋巴组织病理形态观察:IMAA组小鼠呈典型再生障碍性贫血病理改变,骨髓造血衰竭,脾脏明显萎缩,而照射治疗组于第28天骨髓和脾淋巴脏组织基本上恢复正常。结论:低剂量全身照射对IMAA小鼠有明显的治疗作用,骨髓和淋巴组织完全恢复;其疗效机制可能与低剂量照射杀灭免疫活性淋巴细胞解除了对造血干细胞的抑制有关。本研究结果不仅为免疫介导性再生障碍性贫血提出了一种新的治疗对策,而且为免疫介导性再生障碍性贫血机制的研究提供了新线索,在文献中尚未见有类似报道。

中药合剂“振明正生”对三株人肿瘤细胞裸鼠移植瘤抑制作用的观察

目的:观察中药合剂"振明正生"(ZMZS)对人肿瘤细胞的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠分别接种人白血病细胞系(K562)、鼻咽癌细胞系(CN1)和胰腺癌细胞系(P3),2×106/只。接种后24小时开始给药,实验组裸鼠每天口服中药合剂0.2ml/只,连续4周。对照组裸鼠口服生理盐水0.2ml/只。每周测量动物肿瘤大小,计算肿瘤生长抑制率。结果:经过3或4周的治疗,中药合剂"振明正生"对K562、CN1和P3有明显抑制作用。结论:中药合剂"振明正生"对三株人肿瘤细胞裸鼠移植瘤有显著的治疗效果。

清热解毒方对可移植性小鼠淋巴细胞白血病(L_(7212))治疗作用的实验研究

目的探讨清热解毒方对L7212白血病模型的疗效、量-效关系及作用机制。方法L7212白血病小鼠予高或中剂量清热解毒方灌胃7d,观测其生存时间、外周血白细胞计数及分类、骨髓有核细胞涂片分类、肝脾胸腺指数、残留白血病细胞、细胞增殖周期及T淋巴细胞亚群。结果清热解毒方可延长L7212白血病小鼠的生存时间,不同程度减少其外周血中白细胞的数量和白血病细胞的比例,并可减少骨髓中白血病细胞的比例,而高、中剂量间生存时间差异无统计学意义;L7212中药组较正常对照组及L7212模型组小鼠G2/G1比值为低;正常给药组小鼠较正常对照组小鼠C4+降低。结论清热解毒方对L7212白血病有效;实验中未发现清热解毒方高、中剂量间存在量-效关系;清热解毒方可抑制小鼠骨髓细胞的增殖活力,这可能是该方作用机制之一。此外,清热解毒方可降低免疫功能,提示其对L7212白血病的治疗作用可能不是通过对免疫系统功能的调节而实现的。

清热解毒方对可移植性小鼠微小残留白血病实验研究

目的探讨清热解毒方对微小残留白血病模型的疗效、作用机制,并就其对2种不同肿瘤负荷的疗效进行比较。方法造模成功后予高剂量清热解毒方灌胃7d,观测生存时间、外周血白细胞计数及分类、骨髓有核细胞涂片分类、肝脾指数、肝脾骨髓病理形态、残留白血病细胞、细胞增殖周期及细胞凋亡。结果清热解毒方可延长微小残留白血病小鼠的生存时间(P<0.05),且肿瘤负荷较小时疗效较好。结论清热解毒方对微小残留白血病有效。减轻白血病细胞对脏器的浸润、抑制MRL小鼠骨髓细胞的增殖活力、促进细胞凋亡,这可能是该方部分作用机制。

清热解毒方对可移植性小鼠淋巴细胞白血病及其微小残留病疗效的比较研究

目的:探讨复发与初发白血病的关系,观察清热解毒方对L7212 白血病及其微小残留病疗效的差异,初步了解该方的适应证情况,以指导临床使用。方法:造模成功后予高剂量清热解毒方灌胃7d,观测生存时间、终末期外周血白细胞计数及分类、肝脾胸腺指数及细胞增殖周期。结果:L7212模型组、L7212中药I组、MRL模型组、MRL中药I组小鼠生存时间呈升幂排列,且有显著性差异(P<0.05或<0.01)。L7212中药I组较L7212模型组的生命延长时间及生命延长率,均高于MRL中药I组较MRL模型组。L7212模型组与MRL模型组终末期外周血白细胞计数有显著性差异(P<0.05)。L7212 模型组与L7212 中药I组白细胞计数的差值小于MRL模型组与MRL中药I组的差值,但L7212模型组与L7212 中药I组白血病细胞百分比的差值,大于MRL模型组与MRL中药I组的差值。白血病死亡小鼠的脾脏指数L7212模型组较MRL模型组、L7212中药I组较MRL中药I组低,组间比较有统计学差别(P<0.05)。MRL组较L7212组G0+G1 期细胞比例增高,S期和G2 +M期细胞相对减少。中药组较模型组小鼠G2/G1 比值低(P<0.05)。结论:小鼠复发白血病比原代接种的浸润程度严重,前者G0 +G1 期细胞较后者高,S期和G2 +M期细胞相对减少。清热解毒方对L7212白血病的疗效优于对其微小残留病。

中空纤维灌注培养模拟骨髓造血研究

目的采用细胞工程技术探索造血细胞体外扩增技术以维持其自我更新潜能,抑制过度分化。方法首先建立微载体-基质细胞体外造血模型(G1组,即瓶培养模式),设置单纯微载体-基质细胞培养(G2组)和单纯骨髓细胞液体悬浮培养(G3组)作对照。检测各组粒系-巨噬系造血祖细胞集落产率(CFU-GM/105)。自行设计1对引物,以检测Balb/c小鼠原始造血细胞c-kit基因mRNA表达水平。试用中空纤维模拟血管灌注功能(Gh组,即中空纤维灌注模式),以G1、G2、G3作对照,并对各组培养效果进行评价。结果微载体-基质细胞体外造血模型实验结果显示小鼠骨髓细胞培养2周后,CFU-GM/105检测G1组比G3组高7.7倍(P<0.05),是2个对照组(G2+G3)集落产率总和的1.9倍。原始造血细胞c-kitmRNA表达水平模型G1组比G2组高3.7倍,比G3组高62.3倍,且差异均显著。在成功建立微载体-基质细胞体外造血模型基础上进行中空纤维灌注培养实验,CFU-GM/105检测显示Gh组比G3组高4.6倍,并且略高于G2组;Gh组与G1组集落产率差别不明显。在原始造血细胞c-kitmRNA表达水平上Gh组最高,从Gh、G1、G2到G3依次呈下降趋势。结论在没有外加细胞因子的条件下,微载体-基质细胞和中空纤维灌注造血模型可抑制造血干、祖细胞过度分化与耗竭,维持其c-kit较高的表达水平。

小鼠睾丸白血病模型

将微量白血病细胞接种于小鼠睾丸内,建立了辜丸白血病模型。睾丸白血病细胞不仅通过血流播散,引起全身性白血病,而且可沿腹膜后或淋巴管直接播散。小鼠睾丸内和皮下接种同样数量的白血病细胞,前者生存时间比后者短;对环磷酰胺(CY)治疗反应,睾丸内直接给药组的疗效不如皮下接种组注射CY的疗效好。提示睾丸内环境可能有利于白血病细胞的生长。

低剂量照射增强白血病化疗的疗效及其机理的研究

为了增强化疗药物对白血病细胞的杀伤效应 ,而又最大限度地减少化疗的毒副作用 ,本研究探讨了低剂量照射增强Ara C抗白血病的作用及其作用机理。实验用小鼠急性淋巴细胞性白血病模型 (L615 )进行 ,先确定低剂量全身照射与小剂量Ara C最佳联合治疗方案 ;在此基础上观察该方案对血液系统的毒副作用 ,并从骨髓病理形态学的动态观察、残留白血病细胞检测、骨髓基质细胞GM CSF表达 (免疫酶标法 )、骨髓条件培养上清液GM CSF水平 (微孔滤膜免疫金银染色法 )等探讨其疗效机理。研究结果表明 ,小鼠于接种白血病细胞后第 4天给予 30 0cGy全身照射后 ,间隔 1,2或 3天连续 3天给予 30mg kgAra C ,有 5 8% - 72 %的动物存活 >30天 ,其中 17%的小鼠获得治愈 ,30天内因白血病死亡小鼠的存活时间也比单纯照射和单纯Ara C组明显延长 (P <0 .0 5 )。该治疗方案对外周血白细胞数和骨髓有核细胞数有一过性减少 ,但恢复较快。骨髓病理形态学观察发现 ,30 0cGy照射后小鼠骨髓轻度抑制 ,血窦扩张充血 ;骨髓基质细胞GM CSF表达高于正常 ;骨髓细胞条件培养液的GM CSF水平也高于正常。由此可见 ,低剂量照射与小剂量Ara C联合具有明显的协同作用 ,其机理可能与低剂量照射增加骨髓血窦的通透性 ,诱导骨髓基质细胞产生细胞因子 。

L615小鼠白血病阿糖胞苷耐药模型的建立及其生物学特性

阿糖胞苷(Ara-C)是治疗急性粒细胞白血病的首选药物,但临床相当高比例的病人对Ara-C产生耐药性,致使化疗失败。因此,我们采用逐渐提高药量和连续传代的方法,建立了L615小鼠白血病体内Ara-C耐药模型(L615/Ara-C),最终耐药剂量稳定在150mg/kg。其生物学特性表现为L615/Ara-C小鼠经Ara-C治疗比L615小鼠经Ara-C治疗组存活时间明显缩短,流式细胞术检测证明G_0/G_1期细胞增加,S期细胞减少。有意义的是L615/Ara-C细胞对辐射的敏感性比L615细胞增高。

TGF-β、TNF-α和LIF mRNA在白血病细胞中的表达

用斑点杂交半定量法对6株人、1株大鼠和5株小鼠白血病细胞以及部分正常对照细胞进行了TGF-β、TNF-α和LIF三种抑制因子mRNA表达水平的检测。得出以下结论:(1)615小鼠白血病相关抑制因子(LAI-615)属于TGF-β类因子。(2)白血病细胞与正常对照细胞相比,三种负性因子的表达存在差异。(3)LIF的表达与否,可能与白血病细胞类型有关。(4)白血病细胞中负性因子的表达强度高于正常对照细胞。(5)TGF-β较TNF-α和LIF更普遍存在并参与正常和白血病造血细胞增殖和分化的调控。