人IL-12对结肠癌干细胞生物学特性的影响及其机制

目的研究人IL-12对结肠癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)生物学特性的影响及其机制。方法 IL-12/慢病毒重组质粒转染结肠CSCs构建IL-12过表达细胞模型,将IL-12过表达CSCs接种NOD/SCID小鼠,观察成瘤情况,Transwell检测结肠CSCs侵袭性,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组化检测CK20表达,Western blot检测STAT6、p-STAT6、survivin、IL-12和IL-4蛋白表达。结果体外实验证明,IL-12使CSCs侵袭性降低40%,细胞成球能力降低,凋亡增加[(45.2±5.6)%vs(4.1±1.2)%]。转染IL-12的CSCs在小鼠体内肿瘤生长能力降低,抑瘤率63.53%;慢病毒/IL-12转染CSCs形成的肿瘤体积(189±21)mm3,质量(1 958.2±41.2)mg;而空载体转染CSCs形成的肿瘤体积(1 785±32)mm3,质量(5 369.8±41.3)mg。Western blot检测表明,IL-12过表达显著降低结肠CSCs上清IL-4和p-STAT6表达。结论 IL-12降低结肠CSCs自我更新能力及侵袭性,促进其分化和凋亡,可能和IL-4/STAT6通路有关。

人IL-12/慢病毒重组体对结肠癌干细胞“干性”的影响

目的:构建并鉴定人白介素12(Interleukin-12,IL-12)-慢病毒过表达重组体,观察其在结肠癌干细胞(Cancerstem cell,CSCs)中的表达及其作用,为后续动物试验做准备。方法:PCR扩增pORF-hIL-12质粒获得IL-12基因,通过双酶切及连接后构建IL-12/慢病毒过表达重组体;分离鉴定结肠CSCs,将IL-12/慢病毒过表达重组体转染结肠CSCs建立IL-12过表达模型,检测IL-12在结肠CSCs的表达及对结肠CSCs"干性"的影响。结果:PCR、酶切鉴定及测序证实IL-12/慢病毒过表达重组体构建正确,流式细胞仪成功分选出CD133+CD44+SW480结肠CSCs,IL-12/慢病毒转染结肠CSCs后,RT-PCR及West-ern blot证实结肠CSCs培养上清均有IL-12表达,IL-12抑制结肠CSCs自我更新,促进其分化。结论:IL-12/慢病毒过表达重组体能在结肠CSCs中稳定表达并能抑制结肠CSCs自我更新及分化。

IL-12瘤苗与^(131)I-1E2协同抗瘤作用研究

目的:建立稳定表达IL-12的小鼠Lewis肺癌瘤苗LLC/mIL-12;评估尾静脉注射^(131)I-1E2(^(131)I标记抗肺癌单克隆抗体1E2)抑瘤效果及LLC/mIL-12对^(131)I-1E2靶向治疗增效作用。方法:制备LLC/mIL-12;Na^(131)I标记1E2;建立C57BL/6小鼠移植瘤模型,比较单纯尾静脉注射^(131)I-1E2或联合瘤内注射LLC/mIL-12时^(131)I-1E2在小鼠体内分布。成瘤小鼠随机分组。为GT、LLC/mIL-12)、RIT(Radioimmunotherapy,放射免疫治疗)、PBS和GT+RIT组,治疗后测量肿瘤体积及重量,计算抑瘤率,检测CTL和NK活性。结果:^(131)I-lE2能有效靶向肿瘤组织,尤其联合LLC/mIL-12。与单用GT或RIT比较,GT+RIT能有效地上调IL-12表达、抑制肿瘤生长,GT及联合组有大量CD4^+、CD8^+淋巴细胞浸润,NK和CTL细胞活性增强。联合组。^(131)I-1E2更多积聚在肿瘤组织。结论:^(131)I-1E2明显抑制肿瘤生长,具有潜在的临床应用价值,有可能成为新的肿痛靶向治疗药物。

多西他赛单药及联合奈达铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的探讨多西他赛单药及联合奈达铂治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效和不良反应。方法选取该院2012年1月至2014年10月收治的晚期NSCLC患者56例,将其分为联合组（多西他赛加奈达铂）30例和单药组（多西他赛）26例。联合组用药方案：第1天予多西他赛75 mg/m2静脉滴注,第2~4天予奈达铂80 mg/m2静脉滴注;单药组方案：予多西他赛75 mg/m2静脉滴注。两组患者均完成至少2个周期化疗后评价疗效及不良反应。结果联合组治疗有效率[40.00%（12/30）]高于单药组[30.77%（8/26）],差异有统计学意义（P〈0.05）。联合组和单药组3~4度白细胞减少发生率[20.00%（6/30）、11.54%（3/26）]、恶心呕吐发生率[70.00%（21/30）、53.85%（14/26）]及其他不良反应发生率比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论多西他赛单药及联合奈达铂治疗晚期NSCLC均有较好的临床疗效,可作为晚期NSCLC的一线化疗药物。

靶向干扰Chkl增强阿霉素抗人乳腺癌MCF-7/adr细胞的作用机制研究

Chkl的高表达可能是肿瘤对化疗药物的敏感性降低的重要因素之一,本研究的目的是观察siRNA干扰Chk1对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/adr(耐阿霉素)生长及细胞周期的影响,探讨Chk1在乳腺癌细胞耐药中的作用机制。采用RNAi技术抑制MCF-7/adr细胞中Chk1的表达。Westernblot检测转染前后细胞内Chk1蛋白表达情况,经阿霉素作用后,流式细胞术(FCM)检测其细胞周期分布及细胞凋亡率,MTT法检测细胞增殖。Western blot结果显示,Chk1 siRNA转染24h后,MCF-7/adr细胞中Chk1蛋白表达下降了67%,明显低于对照组和空载体转染组(P<0.05)。FCM法检测结果显示,同时,抑制Chk1的表达可解除阿霉素引起的G_2/M期阻滞;使阿霉素诱导的细胞凋亡率由转染前的(5.54±0.15)%上升到(22.24±0.13)%(P<0.05);在阿霉素浓度为0.4mg/L、4mg/L时,细胞的增殖活性分别下降13%、34%。提示siRNA干扰Chk1能够通过调控MCF-7/adr细胞周期及增殖从而增强乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性,为临床上克服乳腺癌化疗耐药提供了新的作用靶点。