肺腺癌胸腔积液DNA倍体异常与EGFR突变的关系及其对患者预后的影响

目的:回顾性分析转移性肺腺癌胸腔积液细胞的DNA倍体异常和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的关系,及其对肺腺癌患者预后的影响。方法:收集河北医科大学第四医院2012—2019年439例肺腺癌伴恶性胸腔积液患者的临床资料。使用计算机辅助DNA倍体定量分析系统检测胸腔积液中肺腺癌细胞DNA含量,计算大于5c细胞的百分比、大于9c细胞的数目、最大DNA指数(DI)值、大于5c细胞的平均DI值及非整倍体细胞峰。比较DNA倍体异常、EGFR基因突变各组间的差异,并检验DNA倍体异常与EGFR突变的相关性,分析DNA倍体异常及EGFR基因突变在肺腺癌预后中的价值。结果:439例肺腺癌患者中,共有244例(55.58%)检测出EGFR基因突变。与对照组比较,男性、有吸烟史、大于5c细胞的百分比<14%、大于9c细胞的数目<8、最大DI值<6、大于5c细胞的平均DI值<5的患者,其EGFR基因突变率降低(P<0.05)。不同非整倍体细胞峰的EGFR基因突变率不同,双峰和单峰比无峰的EGFR突变率高(P<0.05),而多峰与其他组的EGFR突变率差异无统计学意义(P>0.05)。与EGFR野生型患者相比,EGFR突变型患者的大于5c细胞的百分比、大于9c细胞的数目、最大DI值、大于5c细胞的平均DI值及非整倍体细胞峰的平均秩次更高(P<0.05),且上述5项指标均与EGFR突变均存在较弱的正相关关系(Kendall’s tau-b相关系数分别为0.186、0.153、0.110、0.156、0.148,均为P<0.05)。单因素生存分析显示,大于5c细胞的百分比≥14%、大于9c细胞的数目≥8、EGFR突变患者的中位总生存时间较对照组患者长(P<0.05)。多因素生存分析显示,EGFR基因突变是晚期肺腺癌患者的独立预后影响因素。结论:晚期肺腺癌患者中EGFR基因突变与DNA倍体异常存在关联,DNA倍体异常可能是预测EGFR基因突变的潜在指标。DNA倍体异常不是晚期肺腺癌患者的独立预后因素,但EGFR基因突变患者预后优于野生型患者。

铁路高瓦斯隧道施工及相关安全费用的计取

在山区铁路工程建设中,遇到的瓦斯隧道逐渐增多。瓦斯隧道工程相对于普通隧道投入多,施工难度大、风险高、工效低、安全生产管理要求严格。此文根据瓦斯隧道的分类,从爆破作业、机械设备防爆改装、供电与通风、超前地质预报等对投资的影响进行分析,并就如何计列高瓦斯隧道安全施工增加的费用进行探讨,对应合理计取的相关安全生产费提出建议。

胸腹水细胞块的改良技术

近年来细胞块技术在细胞病理学中的地位日渐突出。细胞块技术是将浆膜腔积液的样品离心，细胞和微小组织块被高度浓缩后用固定剂凝聚、石蜡包埋，再制成切片。细胞块主要用于免疫细胞化学和基因检测等，对组织类型的鉴别有一定的帮助，从而提高细胞病理诊断的敏感性。现有的细胞块技术主要有琼脂包埋法、血浆凝血酶法和鸡蛋清凝集法等。这些方法或操作复杂或成本较高，其制片和染色效果不稳定，组织块不完整，包埋时组织比较散碎，严重影响制片。本文现介绍一种简便有效，费用低廉，组织块比较完整的细胞块制作方法。

非小细胞肺癌患者细胞学标本EGFR基因突变检测及其临床病理意义

目的:探讨细胞学标本在非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断及个体化治疗中的临床应用价值。方法:收集352例新鲜细胞学标本制片后,行常规HE染色;同时选择TTF-1、NapsinA、CK7、CEA、CD56、Syn、P63、CK5/6、WT-1、E-cadherin等抗体对来源不明的肿瘤细胞进行免疫细胞化学标记,并对明确诊断为NSCLC的病例,采用突变扩增阻滞系统(ARMS)检测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况。结果:352例患者中,345例有癌细胞。经临床及免疫细胞化学证实345例恶性细胞中,NSCLC有335例,且NSCLC细胞学标本中有302例DNA提取成功,占90.15%(302/335)。EGFR基因检测结果显示,EGFR共突变123例,总突变率为40.73%(123/302)。其中,第18、19、20、21外显子的突变率分别为0.99%(3/302)、19.21%(58/302)、0.66%(2/302)和19.87%(60/302);EGFR 18、19、21外显子突变占EGFR突变总数的98.37%(121/123)显著高于EGFR 20外显子突变(P<0.05)。302例患者中,女性患者EGFR突变率为54.35%(75/138),明显高于男性患者29.27%(48/164)(P<0.05);非吸烟患者EGFR的突变率为51.49%(104/202),显著高于吸烟者19%(19/100)(P<0.05)。276例腺癌中EGFR突变率44.20%(122/276);非腺癌EGFR突变率4.34%(1/23);腺癌EGFR突变率明显高于其他类型(P<0.05)。结论:利用新鲜细胞学标本,结合免疫细胞化学标记和ARMS分子病理技术有助于晚期非小细胞肺癌的诊断,并为表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)个体化治疗提供可靠依据。

自噬在顺铂诱导食管癌TE1细胞死亡中的作用

目的观察顺铂联合自噬特异性增强剂beclin1和特异性抑制剂3-MA对食管癌细胞增殖抑制的影响,探讨自噬在顺铂诱导的食管癌TE1细胞死亡中的作用。方法 MTT法检测空白对照组、顺铂组、顺铂分别联合beclin1和3-MA组对食管癌TE1细胞增殖抑制作用的影响;Western blot法检测顺铂对食管癌TE1各组细胞中bcelin1蛋白表达的影响;MDC荧光染色检测各组细胞内自噬囊泡数量的变化;流式细胞仪检测各组细胞中细胞周期和凋亡的改变。结果 MTT检测各组细胞的增殖抑制率分别为:1.06%,31.59%,18.93%,51.44%。DDP组能有效抑制TE1细胞的增殖。与单独使用DDP组相比,beclin1+DDP组对TE1细胞的增殖抑制率明显降低(P<0.01);3-MA+DDP组对TE1细胞的增殖抑制率明显增高(P<0.01);Western blot检测各组细胞中beclin1蛋白表达量分别为0.319±0.029,1.175±0.06,1.537±0.076,0.91±0.047(P<0.01);荧光显微镜观察beclin1+DDP组中MDC标记的自噬荧光强度最高,细胞质内出现了明显的绿色荧光;FCM检测细胞周期分布结果显示,各组细胞中G0/G1期细胞比例分别为(44.82±0.437)%,(56.25±0.624)%,(27.553±0.085)%,(66.48±0.638)%;各组细胞中S期细胞比例分别为(34.85±0.235)%,(24.417±0.607)%,(51.8±0.721)%,(19.167±0.666)%。各组细胞的凋亡率分别为(1.237±0.015)%,(4.813±0.025)%,(1.32±0.01)%,(6.117±0.035)%(P<0.01)。结论顺铂可以诱导食管癌TE1细胞自噬和凋亡;反应性的自噬活性增强可能与顺铂耐药的形成有关,自噬水平的下调可能增加了食管癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性,提示监测及调控肿瘤细胞的自噬水平可能为逆转食管癌顺铂耐药提供新的思路。

细胞HE涂片褪色后行免疫细胞化学的改良技术

在临床细胞病理工作中，经常会遇见胸腹水、痰涂片、气管刷片或淋巴结针吸查找癌细胞却无预留白片或无组织咬检病理分型的情况，给临床治疗带来不便。为此本实验室尝试用唇膏和金刚笔在HE褪色涂片上正反两面划分区域，进行多种免疫细胞化学抗体的标记，从而达到对恶性肿瘤的分类及探讨来源的目的，现将该方法介绍如下。

非小细胞肺癌EGFR基因突变在外周血与淋巴结针吸标本中的对比分析

目的检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血与淋巴结针吸标本EGFR基因突变率及两者的一致性,探讨外周血标本EGFR基因突变的临床应用价值。方法采用ARMS法检测105例NSCLC患者淋巴结针吸标本及其配对外周血EGFR基因突变状态,比较外周血和淋巴结针吸标本基因突变的一致性,分析EGFR基因突变与NSCLC临床病理特征的关系。结果105例外周血中检出45例突变(突变率为42.86%),淋巴结针吸标本中检出50例突变(突变率为47.62%),两者一致性为83.81%(88/105),差异有统计学意义(Kappa=0.674,P<0.001)。外周血标本EGFR基因突变与患者性别、是否吸烟、临床分期及病理类型有关(P<0.05),与患者年龄及淋巴结直径无关(P>0.05);淋巴结针吸标本EGFR基因突变状态与患者性别、是否吸烟及病理类型有关(P<0.05),与患者年龄、淋巴结直径及临床分期无关(P>0.05)。结论NSCLC患者外周血与淋巴结针吸标本EGFR基因突变一致性较高,在无法获得组织及细胞学标本时可以检测外周血EGFR基因状态,为NSCLC患者提供临床诊疗帮助。

细针穿刺细胞学诊断骨外尤因肉瘤1例

患者女性,27岁,因发现右肘部肿物1年,肿物增大伴疼痛2个月入院。查体:右肘窝处可见一肿物,大小19 cm×18 cm×10 cm,质硬,活动度差,表面未见破溃、出血。右肘部有触痛,右肘关节活动受限。右肘关节X线示:右肘关节骨质未见异常,右肘关节周围软组织内多发肿物;MRI示:右肘关节内软组织肿物,建议针吸活检除外恶性肿瘤。

膜式细胞采集器在脱落细胞免疫组化染色中的临床应用

临床上常遇到胸、腹水及心包积液性质难以确定的病例，传统的离心涂片血细胞成分通常较多，涂片较厚，行免疫组化染色后背景着色不易判断真、假阳性，易误诊。目前常用的薄层液基细胞学涂片不适于胸、腹水及心包积液的细胞提取。

肺腺癌胸水细胞学标本中PD-L1的表达及其与临床和分子特征的关系

目的评估胸水细胞学标本与配对组织学标本中PD-L1检测的一致性。方法采用全自动免疫组化仪对63例肺腺癌胸水细胞学标本和配对肺组织标本进行PD-L1免疫细胞化学及免疫组化染色;收集临床数据并检测胸水细胞学标本肺癌相关基因的突变状态。结果63例胸水细胞学标本与组织学标本的肿瘤细胞数量均满足检测要求。22.2%(14/63)的胸水细胞学标本PD-L1 TPS≥50%,36.5%(23/63)为1%~49%,41.3%(26/63)TPS<1%。PD-L1细胞学表达与组织学表达的符合率为77.8%,胸水细胞学标本与组织学标本中PD-L1的表达具有高度一致性(Kappa=0.650,P<0.01)。胸水细胞学标本中PD-L1表达与患者性别、年龄、淋巴结转移状况及EGFR突变状态无相关性(P>0.05),而与吸烟相关(P<0.05)。结论胸水细胞学标本与配对肺腺癌组织学标本中PD-L1的表达具有高度一致性,胸水细胞学标本是晚期肺腺癌患者行PD-L1检测的最佳选择。

EUS-FNA细胞学在诊断胰腺神经内分泌肿瘤中的应用价值

目的探讨超声内镜引导下细针穿刺(endoscopic ultrasound guided fine needle aspiration,EUS-FNA)细胞病理学对胰腺神经内分泌肿瘤(pancreatic neuroendocrine tumors,PanNETs)的诊断价值。方法对11例PanNETs的EUS-FNA细胞学涂片及免疫细胞化学染色涂片进行观察分析,同时收集临床及术后组织病理资料。结果11例中10例细胞病理学诊断为PanNETs,1例诊断为胰腺实性假乳头状瘤。其中11例PanNETs中G1级3例,细胞学主要表现为较为均匀一致的细胞,也可见成团细胞,细胞大小较为一致,偶可见瘤巨细胞;G2级7例,细胞大多散在分布,细胞成浆细胞样。G3级1例,细胞似裸核,弥散分布,染色质粗糙。免疫细胞化学染色结果示,肿瘤细胞Syn(11/11)及CgA(10/11)均阳性,Ki-67增殖指数1%~25%,与术后组织病理表达相近。结论胰腺EUS-FNA细胞病理学联合免疫细胞化学染色可以对神经内分泌肿瘤作出正确诊断,但也有其局限性。

晚期非小细胞肺癌细胞学涂片EML4-ALK融合基因的检测及意义

目的探讨利用细胞学涂片标本对晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者进行棘皮动物微管相关蛋白样4-间变性淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule-associated protein-like 4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)融合基因检测的可行性。方法收集48例NSCLC患者的细胞学涂片标本,HE染色常规诊断,免疫细胞化学染色分型,采用FISH技术检测EML4-ALK融合基因。结果 48例细胞学标本EML4-ALK融合基因阳性率为8.33%(4/48),其中31例NSCLC恶性胸腔积液标本中检测出3例EML4-ALK融合基因,17例NSCLC细针穿刺标本中检测出1例EML4-ALK融合基因。结论采用NSCLC细胞学涂片进行EML4-ALK融合基因检测,方法可靠,具有实用性。

细针穿刺细胞学诊断朗格汉斯细胞组织细胞增生症1例

患儿男，7岁，因左面部肿物2周，局部轻触痛，于2017年7月2日来我院就诊。查体：面型两侧不对称，左面部咬肌区明显隆起，可触及一大小3cm×3cm×3cm肿物，界限欠清，表面光滑，质地中等，基底固定，活动度差，轻度压痛。左面部超声示：左面部隆起处皮下囊实性包块，左侧腮腺及颌下腺声像，考虑炎性改变，双侧颈部淋巴结稍大。

肩部转移性恶性黑色素瘤1例

患者男性,63岁,于5个月前无明显诱因出现右肩部疼痛,当地医院按＂肩周炎＂给予对症治疗,症状无好转,且逐渐出现右肩部肿胀。门诊给予针吸检查,患者右上肢活动受限,右肩部肿胀,疼痛,局限性隆起大小6 cm×5 cm,质韧,边界不清,皮肤表面光滑,无破溃;右侧乳腺区未触及明显肿物;右侧腋下可触及一直径3 cm肿大的淋巴结,质硬,无压痛，固定。

细针穿刺诊断外阴颗粒细胞瘤1例

患者女性,45岁,子宫肌瘤切除术后5年,无意中发现阴阜区肿物3天入院。查体：阴阜区皮下可见一直径为1 cm的质韧结节,边界尚清,表面暗红色,局部无压痛。门诊行针吸活检。病理检查镜检：细胞圆形或多角形,细胞之间相互融合成片;胞质丰富,含有明显的嗜酸性颗粒;细胞核较小,

非小细胞肺癌患者外周血及胸水中EGFR基因突变的研究

目的检测非小细胞肺癌患者外周血与新鲜胸水EGFR基因突变率及两者的一致性,探讨外周血标本在EGFR基因突变的临床应用价值。方法采用ARMS法检测51例非小细胞肺癌患者新鲜胸水及其外周血EGFR基因突变状态,比较外周血和新鲜胸水基因突变的一致性,分析EGFR基因突变与患者临床特征关系。结果 51例外周血中检出20例突变(突变率39.2%),其中19del突变11例(55%,11/20),L858R突变8例(40%,8/20),G719X突变1例(5%,1/20);新鲜胸水中检出24例突变(突变率47.1%),其中19del突变13例(54.2%,13/24),L858R突变10例(41.7%,10/24),G719X突变1例(4.1%,1/24)。两者突变一致性为80.4%(41/51),差异具有统计学意义(Kappa=0.603,P=0.000)。外周血及新鲜胸水EGFR基因突变状态均与性别、是否吸烟和病理类型有关(P<0.05),而与年龄及TNM分期无关(P>0.05)。结论非小细胞肺癌患者外周血与新鲜胸水EGFR基因突变一致性较高,在无法获得组织及细胞学标本时可以检测外周血EGFR基因状态,为非小细胞肺癌患者提供临床诊疗帮助。

细针穿刺细胞学诊断原发性腮腺黏液腺癌1例

患昔女性，60岁，因右耳下肿物8个月，局部无疼痛、麻木等不适症状，肿物生长缓慢，于2013年4月12日来我院就诊．查体：右侧腮腺下极处隆起，表面皮色正常，皮温不高，可触及一大小5cm×3．5cm×3cm的肿物，界限清，质地中等偏硬，可推动，无明显触痛。

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎妊娠患者安全性观察

目的探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎妊娠患者的安全性。方法选择妊娠期慢性乙型肝炎女性患者45例作为观察对象,不进行任何治疗者设为对照组共21例,口服拉米夫定治疗者设为观察组共24例,观察比较两组患者的分娩方式、母婴并发症(流产、早产、新生儿窒息、死胎和胎儿畸形)、宫内感染、新生儿一般情况和智能发育情况。结果治疗组和对照组患者自然分娩各21例和19例,剖宫产3例和1例,对照组流产1例;观察组患者所产新生儿Apgar评分为(9.07±0.19),对照组为(8.90±0.21),两组比较差异无统计学意义(P>0.05);两组均无早产、新生儿窒息、死胎和胎儿畸形等并发症发生。观察组宫内感染率为4.17%,对照组为30.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者所产新生儿外观发育正常,智能发育水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论拉米夫定治疗能有效降低慢性乙型肝炎妊娠患者新生儿宫内感染率,对患者及所生新生儿并无不良影响。

甲状腺髓样癌1例

患昔女性，78岁，因甲状腺肿物及纵膈病变入院。入院后查血Calcitonin〉2000pg／mL（5．17～9．82pg／mL）、CEA35．43．g／mL（0～5ng／mL）、TG在正常参考值内。颈部超声：甲状腺多发实性及囊实性结节，考虑为TI-RADS3级；左侧颈部及锁骨上窝多发实性占位。CT示：气管周围前上纵膈软组织肿物，侵袭性胸腺瘤？

Beclin1和HLAⅠ、Ⅱ在人卵巢癌SKOV3细胞中的表达

目的探讨转染Beclin1质粒的自噬基因Beclin1和免疫应答效应分子HLAⅠ、Ⅱ在人卵巢癌SKOV3细胞中的表达,分析Beclin1在卵巢癌免疫应答中的作用。方法应用基因转染技术、RT-PCR、Western blot法检测Beclin1质粒转染SKOV3细胞前后Beclin1和HLAⅠ、Ⅱ的mRNA和蛋白表达水平的变化。应用免疫荧光显微镜观察Beclin1质粒转染SKOV3细胞后,其自噬小体的变化。用MTT法检测Beclin1质粒转染SKOV3前后细胞的增殖活性。结果 SKOV3细胞转染Beclin1质粒后,Beclin1的转录和翻译水平分别是空载体组的5、2倍。荧光显微镜观察,转染Beclin1质粒组卵巢癌细胞MDC标记的自噬小体数量显著增多。RT-PCR和Western blot结果显示,转染Beclin1可诱导HLAⅠ、Ⅱ等位基因的转录和翻译。Beclin1质粒组的HLAⅠ-A、B、C和HLAⅡ-DP、DQ、DR的mRNA分别是空载体组的2、1.6、3倍和2、6、3倍;其HLAⅠ、Ⅱ的蛋白表达分别是空载体组的2、1.6倍。MTT结果显示,Beclin1质粒组与空载体组、空白对照组相比,在转染24、48、72、96 h后,其细胞生长抑制率分别为42.6%、37.8%、24.35%、14.81%。结论在人卵巢癌SKOV3细胞中,转染外源性Beclin1可诱导细胞自噬并使免疫应答效应分子HLAⅠ、Ⅱ的表达增加。HLAⅠ、Ⅱ表达的增加可能使卵巢癌细胞免疫应答增强。转染外源性Beclin1可抑制卵巢癌SKOV3的细胞增殖。