马耳他布鲁氏菌M5-90 L31基因缺失株的安全性和免疫原性评估

为了评估布鲁氏菌M5-90 L31基因缺失株(M5-90ΔL31)的安全性与免疫原性,本研究以小鼠为动物模型,测定M5-90ΔL31在CD-1小鼠体内的复制水平,结果显示M5-90ΔL31在小鼠脾脏中的复制水平较亲本株M5-90降低了3.02log,安全性提高;将接种和不接种M5-90ΔL31的CD-1小鼠同居饲养30 d后,采集各组小鼠脾脏经菌落计数检测该菌株水平传播能力,结果显示,接种M5-90ΔL31小鼠均可分离到该菌或虎红平板凝集试验检测为阳性,而未接种小鼠则未检测到该菌,未发生水平传播;分别于CD-1小鼠皮下接种M5-90ΔL31和M5-90菌株并测定半数康复时间(RT50)和免疫保护力,结果显示,接种M5-90ΔL31组小鼠RT50为4.47±1.92周。攻毒后M5-90ΔL31组小鼠在45 d和150 d保护单位分别为3.62和2.81,与M5-90组差异不显著。进一步利用豚鼠进行安全性试验和攻毒保护试验,结果显示:M5-90ΔL31组豚鼠脾脏菌载量为67 cfu/g,M5-90株豚鼠脾脏菌载量为1 268cfu/g,二者差异显著;M5-90ΔL31与亲本株M5-90均可抵抗强毒株M28对豚鼠的感染。本研究结果首次表明M5-90ΔL31具有良好的安全性和免疫原性,为新一代更安全的布鲁氏菌疫苗候选株筛选奠定了基础。

马耳他布鲁氏菌sRNA Bmsr10缺失株的构建及其对毒力的影响

为评估布鲁氏菌sRNA Bmsr10对布鲁氏菌毒力的影响,本研究以布鲁氏菌M28为亲本株,利用同源重组方法构建了稳定遗传的sRNA Bmsr10缺失株M28ΔBmsr10和回补株M28ΔBmsr10-com。对其生长曲线进行测定,结果显示与亲本株M28相比,M28ΔBmsr10体外生长速率无明显变化;将M28ΔBmsr10按MOI 100感染RAW264.7细胞后,分别于感染后6 h、24 h和48 h裂解细胞进行细菌计数,结果显示:与亲本株M28相比,M28ΔBmsr10感染24h后,在巨噬细胞内的分菌数显著低于M28;以1×10^6cfu/100μL/只感染小鼠后于不同时间采集小鼠脾脏进行细菌计数和称重,检测M28ΔBmsr10在小鼠体内的增殖水平,结果显示感染M28ΔBmsr10后各时间点小鼠脾脏分菌数(p<0.01)和脾脏重量(p<0.01)与M28相比均显著降低,表明sRNA Bmsr10缺失显著降低了M28在小鼠体内的增殖能力和引起的炎症反应。结果证明:sRNA Bmsr10缺失可显著降低布鲁氏菌的毒力。本研究为探究Bmsr10影响布鲁氏菌毒力的分子机制及疫苗开发奠定了重要基础。