基于网络药理学和细胞实验探究天参胶囊的抗炎机制

目的通过网络药理学预测天参胶囊可能发挥抗炎作用的机制,并进行实验验证。方法基于TCMSP等数据库查找筛选天参胶囊的活性成分并预测其作用靶点。使用PPI、GO、KEGG分析天参胶囊的“活性成分-靶点-通路”网络,Discovery Studio对关键化合物和核心靶点进行分子对接。通过细胞实验验证关键靶点。结果天参胶囊有效成分共147种,对应560个靶点。PPI分析显示,天参胶囊主要作用于STAT3、TP53、JUN、Akt1、SRC、MAKP1等靶点。GO分析显示,它们主要作用于DNA结合转录因子、RNA聚合酶Ⅱ特异性DNA结合转录因子、泛素样蛋白连接酶等。KEGG分析表明,它们可能通过PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、Toll受体信号通路、JAK/STAT信号通路等起到抗炎作用。分子对接显示,4种关键成分与核心蛋白均有很好的结合力。体外细胞实验证明,天参胶囊水提物可降低NO、TNF-α、IL-6水平,并抑制JAK2/STAT3信号通路。结论天参胶囊可能通过调控JAK2/STAT3信号通路发挥抗炎作用,具有多成分-多靶点-多途径的特点。

偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒制备及免疫原性评价

本研究旨在利用铁蛋白制备携带非洲猪瘟病毒p30蛋白的纳米颗粒抗原,并对其免疫原性进行评价,为非洲猪瘟纳米疫苗研究提供实验基础。首先,将编码p30蛋白和SpyTag标签的基因序列融合后插入pCold-I载体,得到pCold-p30质粒。将编码SpyCatcher与铁蛋白的基因序列融合后插入pET-28a(+)载体得到pET-F-np质粒,并分别在大肠杆菌中诱导表达。然后,将亲和层析纯化后的p30蛋白与铁蛋白在体外偶联结合,用分子筛纯化后得到偶联p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒F-p30,利用粒径仪、透射电镜观察形态结构。将F-p30纳米颗粒蛋白免疫小鼠,评估其体液和细胞免疫应答。结果表明,本研究成功制备出偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒,颗粒结构约20nm。F-p30在体外能被小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)高效摄取,与p30蛋白相比,F-p30纳米颗粒免疫小鼠诱导产生更高水平的特异性抗体和细胞因子,更有利于刺激淋巴结滤泡辅助T细胞(follicular helper T cell,T_(FH))、生发中心B细胞(germinal center B cell,GCB)和脾脏CD4^(+)及CD8^(+)T淋巴细胞的增殖。综上,本研究成功制备了偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒,能显著增强p30蛋白的免疫原性,为非洲猪瘟疫苗的研究奠定了基础。