结核分枝杆菌Rv3618蛋白在大肠埃希菌中的表达、纯化及其血清学诊断

目的 大肠埃希菌表达系统获重组结核分枝杆菌Rv3618蛋白,并评价其用于肺结核病血清学诊断的价值.方法 大肠埃希菌表达重组Rv3618蛋白,离子和疏水层析纯化获得高纯度的重组Rv3618蛋白,ELISA检测71例肺结核患者血清重组Rv3618蛋白和重组38000蛋白抗体IgG.结果 Rv3618蛋白在大肠埃希菌中表达,从大肠埃希菌纯化获得的重组Rv3618蛋白和重组38000蛋白的ELISA诊断临界值分别为A490 nm=0.51和A 490 nm=0.45.71例肺结核患者血清,重组Rv3618蛋白抗体阳性率39.4%与重组38000蛋白抗体阳性率（52.1%）比较差异无统计学意义（P＞0.05）,而与两种重组蛋白联合检测的抗体阳性率（59.2%）比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 重组Rv3618蛋白可与重组38000蛋白联合用于肺结核病患者血清诊断以提高敏感性,因此,重组Rv3618蛋白可作为结核病血清学诊断的抗原之一.

结核病人外周血T辅助细胞含量分析

目的分析结核病患者Th细胞含量变化与结核分枝杆菌感染的关系。方法抽取肺结核患者、肺外结核患者、肺癌患者和健康人2ml肝素钠抗凝静脉血,按说明书进行胞内和膜表面分子染色,染色的细胞经流式细胞仪分析分泌IL-17、IFN-γ、IL-4阳性的T细胞和CTLA-4、PD-1阳性的T细胞。结果肺结核、肺外结核和肺癌组Th17细胞含量高于健康组、Th2细胞含量低于健康组、Th1细胞含量呈下降趋势,但与健康组比较差异无统计学意义。因此,肺结核、肺外结核组Th1细胞含量与Th17细胞含量比值及Th2细胞含量与Th17细胞含量比值低于健康组。肺外结核组CTLA-4阳性的CD3+T细胞(CTLA-4+CD3+T含量)含量高于肺结核组、肺癌组和健康组,肺结核和肺癌组PD-1阳性的CD4+T细胞(PD-1+CD4+T细胞)含量高于健康组。肺结核组,CTLA-4+CD3+T含量与Th1细胞含量呈负相关(r=-0.48,P=0.014);肺外结核组,PD-1+CD4+T细胞含量与Th17细胞含量呈正相关(r=0.68,P=0.015)。结论活动性结核病患者Th17细胞含量升高。

WYE-354调控小鼠同种异体皮肤移植抗排斥反应中的mTOR信号传导通路

目的探讨mTOR激酶ATP竞争抑制剂WYE-354对小鼠同种异体皮肤移植抗排斥反应的作用及机制。方法以C57BL/6为受者,BALB/c为供者建立同种异体皮肤移植模型,C57BL/6小鼠行同种同体皮肤移植为自体移植组。移植-2d给药,共21d,阳性对照组为同种异体皮肤移植,雷帕霉素组口服给药0.2ml、剂量1mg/(kg.d),WYE-354药物组腹腔注射0.2ml:低剂量1mg/(kg.d)、中剂量1.5mg/(kg.d)、高剂量50mg/(kg.d)。术后3、7、11、21d时,应用免疫印记法留样检测每组脾细胞4E-BP1磷酸化水平,11d行皮肤移植物组织病理染色。结果阳性对照组皮肤移植物存活时间明显少于雷帕霉素组、WYE-354低、中、高剂量组,差异有统计学意义(P<0.01);雷帕霉素组皮肤移植物存活时间明显少于WYE-354中、高剂量组,差异有统计学意义(P<0.01)。雷帕霉素组及WYE-354低剂量组皮肤移植物局部淋巴细胞浸润较阳性对照组减少,WYE-354中、高剂量组皮肤移植物局部淋巴细胞浸润较阳性对照组、雷帕霉素组、WYE-354低剂量组均减少。雷帕霉素组、WYE-354低、中、高剂量组均可下调脾细胞中4E-BP1蛋白的磷酸化水平,以WYE-354中、高剂量组作用最为明显。结论 WYE-354可以抑制mTOR信号转导通路相关蛋白磷酸化水平的调控,并阻滞其细胞周期,减少淋巴细胞向皮肤移植物浸润、显著延长小鼠皮肤移植物存活时间。

TSP-1对小鼠皮肤放创复合伤伤口愈合的影响

目的探讨TSP-1在小鼠皮肤放创复合伤(CRWI)伤口愈合过程中的作用。方法以TSP-1敲除(KO)小鼠为主要研究对象,以野生型(WT)小鼠作为对照,每组15只,比较WT小鼠与TSP-1KO小鼠皮肤CRWI的伤口愈合情况。取WT小鼠与TSP-1KO小鼠皮肤CRWI建模后第7天的伤口组织进行免疫组化染色以及免疫荧光染色,Western blot分析NF-кB蛋白表达水平,并使用RT-qPCR检测伤口部位炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平,以确定2组小鼠皮肤CRWI伤口部位的炎症反应状态及血管生成情况。结果与WT小鼠相比,从CRWI建模第3天开始TSP-1KO小鼠皮肤CRWI伤口愈合显著延迟(P<0.05)。CRWI建模后第7天TSP-1KO小鼠伤口部位的F4/80巨噬细胞浸润减少(P<0.05),NF-кB蛋白表达水平降低(P<0.01),炎症细胞因子IL-1β和IL-6的表达水平也相对降低(P<0.01),并且伤口部位CD31阳性细胞以及α-SMA阳性细胞数量减少(P<0.05)。结论敲除TSP-1会导致小鼠皮肤CRWI炎症反应减弱,血管生成受到抑制,伤口愈合延迟。

贫铀通过内质网应激诱导甲状腺损伤

目的探究贫铀(DU)诱导甲状腺损伤的机制,并探索其防治方法。方法将大鼠甲状腺细胞FRTL-5分别用500μmol/L的贫铀溶液作用不同时间,用CCK-8法检测细胞活力。将FRTL-5细胞暴露于不同浓度的贫铀,用Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡情况,用Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达,用免疫荧光染色法检测转录激活因子6(ATF6)的表达。将FRTL-5细胞暴露于500μmol/L的4-苯基丁酸(4-PBA),用CCK-8法检测细胞活力。将FRTL-5细胞分为对照组、DU组和4-PBA+DU组,分别进行相应的处理后,用CCK-8法检测细胞活力。结果贫铀导致了FRTL-5细胞活力下降和细胞凋亡;贫轴诱导FRTL-5细胞GRP78和ATF6表达增加;500μmol/L的4-PBA对FRTL-5细胞的活力没有影响;4-PBA预处理缓解了贫轴诱导的细胞活力的下降。结论贫铀通过内质网应激诱导甲状腺细胞损伤,靶向内质网应激的治疗可能具有缓解贫铀导致的甲状腺损伤的作用。

微波加热对膨胀土膨胀性影响的试验研究

采用工业微波炉对合肥地区某河床膨胀土进行了不同时间的辐射加热,研究微波加热对膨胀土自由膨胀率、无荷膨胀率和有荷膨胀率的影响规律。结果表明:微波加热能显著改变膨胀土的膨胀性,自由膨胀率、无荷及有荷膨胀率均随着加热时间的增加而降低。竖向荷载能够影响膨胀土的膨胀过程,竖向荷载较高时膨胀过程失去减速阶段或低速阶段,而由高速膨胀阶段直接进入膨胀稳定阶段。微波加热作用从矿物成分和微观孔隙结构两个方面影响膨胀土的膨胀性,土样对自由水和结合水的吸收能力下降是膨胀性降低的直接原因。

南阳市科技金融融合现状及问题研究

随着科技金融在国内外被不断探索和发展,科技金融融合发展为区域经济带来了新的活力,国内各省份纷纷出台相应政策并在实践中进一步探索科技金融的结合模式。南阳作为豫陕鄂区域性中心城市、河南省省域次中心城市,在科技金融方面的发展也应跟上时代的脚步。为了加快南阳市科技金融的发展,有必要结合南阳市科技金融的实际情况进行分析并提出建议。

创面放射性沾染的处置效果研究

目的探讨不同药物对创面放射性沾染的治疗与洗消效果。方法使用SD大鼠建立放射复合伤模型,建模后将SD大鼠随机均分为4组(对照组、复合中药膏组、纳米银组、负压引流敷料组)。对照组不敷药,创面用碘伏酒精擦拭后用纱布包扎;负压引流敷料组采用自适性负压引流敷料覆盖创面包扎,其余2组分别敷药后用纱布包扎。4组连续7 d换药,并分别在7、14、21 d取材,制作病理切片,观察创面愈合情况。结果建模后21 d,与对照组相比,其余3组所使用药物对创面愈合均有促进作用,差异有统计学意义(P<0.01),其中复合中药膏组愈合最快最好。除对照组外的3个组创口放射性均降低,差异有统计学意义(P<0.01),其中负压引流敷料组创口的放射性最小,说明负压引流敷料块对放射性沾染物的吸附作用高于纱布块的吸附作用。结论复合中药膏与负压引流敷料联合应用对于创面放射性沾染的处理既能更好地降低放射性,也能促进创口的愈合。

mLST8在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

目的:表达并纯化mLST8蛋白。方法:PCR扩增mLST8的编码cDNA,克隆到pET-28a(+)表达载体,将重组质粒pET-28a-mLST8转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下表达目的蛋白;提取包涵体,用Ni2+亲和层析纯化目的蛋白,稀释和透析相结合进行复性,对复性蛋白进行阴离子交换层析、分子筛层析,将纯的复性mLST8进行肽指纹质谱鉴定和圆二色谱分析。结果:酶切和DNA测序证明pET-28a-mLST8表达质粒构建无误,并在大肠杆菌中得到高效表达;通过Ni2+亲和层析、复性、离子交换层析和分子筛层析获得了较高纯度的复性蛋白,肽指纹质谱鉴定为mLST8;mLST8蛋白的二级结构[α螺旋为18.2%,β折叠为52.3%(其中平行结构为12.1%,反向平行结构为40.2%),β转角为20.7%,无规则卷曲为39.9%]表明其为典型的β折叠结构。结论:在大肠杆菌中表达了重组mLST8蛋白,复性获得了二级结构准确的mLST8,为进一步研究mLST8的晶体结构与功能奠定了基础。

高活性小分子果胶对放射性核素内污染的抗放与促排功效评价

目的探讨高活性小分子果胶对放射性核素内污染的抗放与促排功效。方法共选择雄性昆明小鼠210只,其中60只在辐照前后腹腔注射不同浓度的果胶溶液,统计小鼠存活率,得出有效果胶浓度。选择90只小鼠注射有效浓度的果胶,予以不同剂量辐照,观察小鼠存活率,分析果胶对被辐射小鼠存活率的影响。选择20只小鼠进行果胶抗放实验,检测血常规,取组织进行病理切片,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等氧化应激指标,分析果胶对被辐射小鼠的抗辐功效。选择40只小鼠进行核素内污染造模,检测血清肾功能;取组织进行病理切片及铀含量检测,分析果胶对小鼠核素内污染的促排功效。结果在相同辐照剂量下,25 mg/kg果胶组小鼠的最终存活率最高。果胶组MDA水平低于对照组,SOD活力高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。果胶组肾组织有炎性细胞,有一定程度纤维化;骨髓中红细胞明显减少,血管细胞、纤维细胞、骨髓细胞开始再生;肠黏膜形态排列规则,连续性完整,无充血及明显断裂现象。血常规检测结果显示,果胶组单核细胞比例高于对照组,差异具有极显著性统计学意义(P<0.01)。果胶组和DU组肌酐及尿素含量均高于对照组,果胶组肌酐及尿素含量低于DU组,差异均有统计学意义(P<0.05)。果胶组肾铀含量低于DU组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论高活性小分子果胶能降低小鼠体内肾铀含量,提高氧自由基的清除能力,其可能具有降低体内核素污染与减少核素在肾内蓄积的功效。

尿红细胞形态检查诊断肾脏疾病的临床研究

现有肾脏疾病种类繁多,如急性肾炎、慢性肾盂肾炎、IgA肾炎等,而诱发肾脏疾病的原因也复杂多样,常见如感染、遗传和药物损伤等。患者以大量蛋白尿、低蛋白血症、血尿、水肿为主要临床表现^([1]),并随年龄的增长及高血压、糖尿病^([2])等慢性病发病率的增加,继发性肾病的发病率也在攀升^([3-5])。

定量蛋白质组学分析链霉素耐药和敏感结核分枝杆菌临床分离株

【目的】发现结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)链霉素耐药相关的潜在菌体蛋白。【方法】以结核分枝杆菌临床分离链霉素敏感株01105和结核分枝杆菌H37Rv为对照,采用iTRAQ技术和生物信息学鉴定并相对定量结核分枝杆菌临床分离链霉素耐药株01108菌体蛋白,并通过WEGO功能注释聚类分析01108菌株差异表达蛋白的细胞组分、分子功能和生物进程。【结果】01108菌株分别与01105菌株和H37Rv菌株比较差异表达蛋白为194个和146个,01108菌株与01105菌株和H37Rv比较均差异表达蛋白121个(共同差异表达蛋白)。差异表达蛋白理论相对分子量和等电点分布广泛,其生物进程主要参与中间代谢、呼吸作用和脂质代谢,分子功能主要为催化活性功能和结合功能。共同差异表达蛋白:7个核糖体蛋白(Rv2785c,Rv0056,Rv0641,Rv0652,Rv0701,Rv1630和Rv2442c)在01108菌株中表达下调;7个蛋白在01108菌株中显著差异表达(上调大于1.20倍或下调小于0.55倍),分别为巯基过氧化物酶(Rv1932)、酰基载体蛋白脱氢酶(Rv0824c)、30S核糖体蛋白S15(Rv2785c)、丙酮酸脱氢酶E2部分(Rv2215)、双组份转录调控蛋白(Rv3133c)以及假定未知蛋白(Rv2466c和Rv2626c)。【结论】iTRAQ发现了链霉素耐药结核分枝杆菌相对于链霉素敏感结核分枝杆菌和H37Rv共同差异表达蛋白,为进一步探讨结核分枝杆菌链霉素耐药机制奠定了基础。

重组结核分枝杆菌PPE65蛋白的制备及其在肺结核诊断中的价值

目的 评价重组PPE65蛋白IgG抗体用于检测肺结核患者的价值.方法 将编码结核分枝杆菌PPE65蛋白的基因克隆到PET-28a载体,并在大肠埃希菌中表达,镍亲和层析和离子层析法纯化重组PPE65蛋白,透析复性和Lowry法测蛋白浓度.采用ELISA法检测144例肺结核患者、144名健康者、56例非结核肺部疾病患者血清中抗重组PPE65蛋白和重组PstS1蛋白的IgG抗体水平.用ELISA检测144例肺结核患者和97名PPD皮试阴性健康人血清IgG结果绘制ROC曲线确定临界值.分析评价重组PPE65蛋白及其与重组PstS1蛋白联合检测肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性.结果 结核分枝杆菌PPE65蛋白在大肠埃希菌中获得表达,层析纯化获得纯度为95%的重组PPE65蛋白,复性后蛋白浓度为0.5 mg/ml.重组PPE65蛋白IgG抗体的ELISA检测临界值为0.64.重组PPE65蛋白诊断肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为34.7%（50/144）、93.5%（187/200）、79.4%（50/63）、66.5%（187/281）、68.9%（237/344）;重组PPE65蛋白和重组PstS1蛋白联合诊断肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为59.0%（85/144）、91.0%（182/200）、82.5%（85/103）、75.5%（182/241）、77.6%（267/344）.结论 结核分枝杆菌PPE65蛋白可作为结核患者血清检测的蛋白抗原之一.PPE65蛋白和重组PstS1蛋白IgG抗体联合检测用于结核病诊断可提高敏感度.

PBL结合情景教学在核应急医学救援教学中的应用

目的探讨以问题为基础的学习(problem-based learning,PBL)结合情景教学在核应急医学救援教学中的应用效果。方法选择陆军军医大学2017级100名学员为教学对象,将核应急医学救援课程前20个学时的教学设为对照组,后20个学时的教学设为实验组。对照组采取传统讲授法进行教学;实验组理论教学以PBL教学模式开展,技能实践教学则采用情景教学;采用理论考试、技能考核和问卷调查的形式对两组学员进行考查。采用SPSS 17.0进行卡方检验。结果理论考试成绩:实验组(77.10±8.11)分,对照组(73.97±7.93)分,两组差异存在统计学意义(P<0.01);技能考核成绩:实验组(78.40±6.35)分,对照组(71.04±7.51)分,两组差异存在统计学意义(P<0.01);从理论考试和技能考核结果、学员自评情况来看,实验组各项均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与传统讲授法相比,PBL结合情景教学能提高学员的积极性,增强学员自主学习能力,促进其熟练掌握辐射防护相关知识和技能,培养学员团队合作精神,锻炼学员动手实践能力。