磁共振弥散白质定量分析在观察脑低级别胶质瘤相关性癫痫白质变化中的应用

目的 采用磁共振弥散白质定量技术观察低级别脑胶质瘤瘤体和瘤周白质变化在胶质瘤相关癫痫(glioma-associated epilepsy, GAE)发生中的影响。材料与方法 回顾性分析了2018年12月至2020年12月在郑州大学第一附属医院磁共振科进行弥散频谱成像(diffusion spectrum imaging, DSI)扫描且经病理证实为低级别胶质瘤患者的临床和影像学信息,共纳入102例WHOⅡ级低级别胶质瘤,其中术前GAE患者37名,术前无GAE患者65名。计算弥散张量成像(diffusion-tensor imaging, DTI)、轴突定向弥散和密度成像(neurite orientation dispersion and density imaging, NODDI)及平均表观传播子(mean apparent propagator, MAP)等弥散模型的定量参数。应用ITK-SNAP软件在b=0的弥散图像上进行肿瘤及瘤周区的感兴趣区(region of interest, ROI)勾画。应用FAE软件进行直方图特征提取、ROI体积计算和形态学特征提取。经单参数分析及共线分析后基于各弥散模型及ROI构建逻辑回归模型,并应用DeLong检验进行模型效能的比较。结果 GAE组间年龄差异有统计学意义(P=0.004);肿瘤位于右侧半球且跨半球生长者GAE的发病率低于位于左侧半球者,差异有统计学意义(P=0.002);年龄和肿瘤所在半球位置所构建GAE预测临床影像学模型AUC=0.779。GAE组肿瘤和瘤周的体积小于无GAE组(P<0.05);肿瘤区诸形态学特征差异无统计学意义;瘤周区长径、短径越小越倾向于GAE发生,同时表面积越小、越倾向于球形者倾向于GAE发生,差异有统计学意义(P<0.05);应用瘤周区形态学特征构建GAE logistic回归模型的AUC=0.730。存在GAE组间差异(P<0.05)的肿瘤区和瘤周区弥散模型定量参数直方图特征包括DTI_FA_Maximum、 NODDI_ODI_90 Percentile、MAP_NG_10 Percentile,其中瘤周区NODDI_ODI_90Percentile值GAE组高于无GAE组,余瘤周区同肿瘤区特征GAE组均低于无GAE组。肿瘤区模型效能略高于瘤周区模型,差异无统计学意义;肿瘤区和瘤周区特征共同构建融合模型的效能最高,较瘤周区差异有统计学意义(P=0.02)。融合模型中,肿瘤特征占绝大部分,OR值最高者为肿瘤DTI_MD_10Percentile,与GAE发生呈正相关。所有基于弥散参数的模型中OR值最高者为瘤周特征NODDI_ODI_Mean,与GAE发生呈正相关。基于肿瘤区、瘤周区的单个弥散模型间预测效能,MAP模型的效能略高于DTI和NODDI模型。临床影像学模型、瘤周形态学模型及基于弥散参数的融合模型的GAE预测效能比较差异无统计学意义。结论 磁共振白质定量分析为早期预测GAE的发生及分析GAE的发生机制提供了条件;肿瘤区白质的损伤同时伴有瘤周区白质分散度增加或相对完整增加了GAE的发生风险。

肝细胞特异性杀伤载体的构建和应用

目的间充质干细胞(MSC)有重要的免疫调节和组织再生作用,但其治疗肝损伤的机制尚不完全清楚,既可能通过旁分泌因子调节炎症,也可直接转分化为肝细胞。为明确这两种机制,拟构建巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的膜定位绿色荧光蛋白(GFP)与白蛋白启动子调控的PE40毒素的共表达质粒,以期杀伤转染MSC中向肝细胞转分化的细胞。方法用PCR获得GFP以及DLL1(Delta-like 1)跨膜区基因片段,融合成膜定位GFP基因并插入pFlag-CMV-1载体。将白蛋白基因启动子和PE40基因片段插入已构建好的膜定位GFP序列下游,构建真核表达载体,荧光显微镜检测GFP的表达。应用可表达白蛋白的人正常肝脏细胞检测该载体对肝细胞的杀伤。结果成功构建肝细胞特异性杀伤载体,该载体转染后对正常肝脏细胞具有杀伤作用,提示该载体可用于探索MSC治疗肝损伤的机制。结论成功构建能特异性杀伤肝细胞的载体。

高通量脑片细胞识别方法:基于Imaris与ImageJ的对比研究

目的:面对高分辨率的海量脑片染色信号数据,建立一种统一的方法来便捷的实现多场景下的准确识别.方法:选择5套不同分子标记的小鼠鼠脑荧光图像数据,对比分析了ImageJ和Imaris两种识别方法与人工识别的差异.结果:对于清晰无重叠的荧光信号,Imaris和ImageJ均能进行快速准确地识别.而当图像内信号强度差异较大时,Imaris参数调整的识别结果是实时可见的,且鲁棒性较好,同一参数即可对全部信号进行较准确的量化,但在ImageJ中需要根据信号强度设置不同的参数进行多次识别.结论:Imaris是一种理想的、可以实现快速、方便、准确地识别和计算高通量脑片中荧光信号的方法.

钠氢交换蛋白1抑制剂对严重烧伤后多脏器损伤大鼠的保护作用研究

目的探讨钠氢交换蛋白1(NHE1)抑制剂对严重烧伤后全身多脏器功能损伤大鼠的保护作用,并探讨其潜在的机制。方法常规方法建立30%体表面积烫伤的大鼠模型。用NHE1抑制剂(卡立泊来德)干预后,通过观察组织病理学及炎症因子的改变来探讨NHE1在烧伤后多脏器损伤时所起的作用。结果 NHE1在烧伤后大量表达,而NHE1的抑制剂可显著减轻烧伤后心脏、肺脏、肾脏及小肠的损伤。同时NHE1抑制剂也可以降低肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、髓过氧化物酶(MPO)水平。结论 NHE1抑制剂显著减轻烧伤后大鼠多脏器损伤,其部分机制可能是抑制了组织的炎症反应。

钠氢交换蛋白1抑制剂对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的作用及其机制

目的观察钠氢交换蛋白1（NHE1）抑制剂对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的作用，并初步探讨其可能机制。方法取SD大鼠90只，按照随机数字表法分为对照组、单纯脓毒症组和NHE1抑制剂组，每组30只。单纯脓毒症组和NHE1抑制剂组大鼠背部建立20％TBSAⅢ度烫伤（下称烧伤）模型后，背部创面中心注射2×10^5CFU／mL的铜绿假单胞菌ATCC27853菌液50μL。烧伤脓毒症模型建立成功后，NHE1抑制剂组大鼠迅速腹腔注射0．1mmol／LNHE1抑制剂卡立泊来德0．4mg／kg，单纯脓毒症组大鼠注射同体积的生理盐水。对照组大鼠除不制作烧伤创面和接种细菌外，其余操作与单纯脓毒症组大鼠相同。烧伤脓毒症大鼠在伤后12h剖腹，于回肠远端注射0．1mol／L异硫氰酸荧光素（FITC）-葡聚糖200mL，30min后左心室采血，切取回肠末端组织。荧光分光光度计检测大鼠血清FITC-葡聚糖含量（样本数为10），HE染色观察肠道组织形态（样本数为10），ELISA法检测血清和肠道组织IL-6和TNF—α含量（样本数均为20），比色法检测血清和肠道组织髓过氧化物酶（MPO）活性（样本数均为20），蛋白质印迹法检测肠道组织NF-κB-p65蛋白表达及MAPK信号通路相关蛋白p38MAPK、细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）以及c—Jun氨基末端激酶1／2（JNK1／2）磷酸化水平（样本数为4）。对照组大鼠于相同时相点同前采集标本进行相关检测。对数据行单因素方差分析、SNK检验。结果（1）单纯脓毒症组大鼠血清FITC-葡聚糖含量较对照组明显升高（P〈0．01），NHE1抑制剂组大鼠血清FITC-葡聚糖含量则较单纯脓毒症组显著降低（P〈0．01）。与对照组比较，单纯脓毒症组大鼠肠黏膜可见大量炎性细胞浸润、黏膜溃疡以及黏膜坏死；NHE1抑制剂组大鼠肠道损伤情况较单纯脓毒症组有显著好转。（2）单纯脓毒症组大鼠血清IL-6、TNF-α、MPO含量分别为（387±42）、（164．7±10．1）ng／mL及（7．5±1．5）U／mL，显著高于对照组的（75±17）、（13．1±6．5）ng／mL和（2．3±0．7）U／mL（P值均小于0．01）；NHE1抑制剂组大鼠血清IL-6、TNF—α、MPO含量分别为（176±37）、（64．9±9．3）ng／mL和（5．9±0．8）U／mL，均显著低于单纯脓毒症组（P值均小于0．01）。（3）单纯脓毒症组大鼠肠道组织IL-6、TNF—α、MPO含量分别为（190±13）、（172．8±29．7）ng／mL及（8．7±1．5）U／mL，显著高于对照组的（20±3）、（11．9±2．3）ng／mL和（2．9±0．3）U／mL（P值均小于0．01）；NHE1抑制剂组大鼠肠道组织IL-6、TNF-α、MPO含量分别为（35±6）、（45．2±6．1）ng／mL和（5．3±0．6）U／mL，均显著低于单纯脓毒症组（P值均小于0．01）。（4）单纯脓毒症组大鼠肠道组织NF—κB—p65蛋白表达量和p38MAPK、ERK1／2磷酸化水平显著高于对照组（P值均小于0．01），NHEI抑制剂组大鼠肠道组织NF-κB—p65蛋白表达量和p38MAPK磷酸化水平明显低于单纯脓毒症组（P值均小于0．01），3组大鼠肠道组织JNKl／2磷酸化水平无明显差异（P值均大于0．05）。结论抑制NHE1可显著减轻烧伤脓毒症诱导的大鼠肠道损伤，其机制可能为通过调控NF—κB及p38MAPK信号通路，抑制肠道炎症反应。