149位丝氨酸在CDC25B诱导小鼠卵母细胞减数分裂中的功能

目的:研究小鼠卵母细胞减数分裂过程中,149位丝氨酸对CDC25B磷酸酶功能的影响。方法:将野生型CDC25B-WT和突变型CDC25B-S149A体外转录成mRNA,显微注射到小鼠GV期卵母细胞中,观察减数分裂恢复情况,同时检测了各组卵母细胞CDC2-Tyr15的磷酸化状态。结果:在小鼠卵母细胞减数分裂过程中,野生型CDC25B能促进减数分裂的重启动,活化有丝分裂促进因子,其突变体CDC25B-S149A对减数分裂的诱导作用丧失,不能活化有丝分裂促进因子。结论:149位丝氨酸的完整是CDC25B磷酸酶发挥调节功能所必需的。

小鼠Cdc25B融合蛋白构建和表达

目的研究小鼠N末端缺失286氨基酸的野生型Cdc25B原核表达载体的构建和表达。方法应用Primer5.0软件分析并设计小鼠Cdc25B5′及3′端引物(N末端缺失286氨基酶),化学合成并用聚合酶链反就(PCR)方法扩增,经限制性内切酶酶切后连接原核表达载体PGEX4T-2,构建成PGEX4T-2-Cdc25B融合表达载体,转化大肠埃希菌BL21后,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导进行目的蛋白表达。结果通过双酶切、电泳分析及测序证明成功构建了Cdc25B融合表达载体,融合蛋白产物经蛋白印迹(Westernblot)显示,相对分子量为53KD的蛋白谱带,与预期一致。结论成功构建并表达了Cdc25B-N末端缺失的基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为近一步研究Cdc25B的功能提供基础依据。

小鼠Cdc25B核输出序列

为探讨小鼠卵母细胞中Cdc25B(cell division cycle 25 homolog B)核输出序列在卵母细胞G2/M转换过程中的调控机制,应用显微注射方法将Cdc25B的野生型、N末端缺失1～51位氨基酸片段(Cdc25B-Δ51)、1～65位氨基酸片段(Cdc25B-Δ65)突变体的mRNA和pEGFP-Cdc25B-WT、pEGFP-Cdc25B-Δ51、pEGFP-Cdc25B-Δ65的融合质粒显微注射到含有完整生发泡的小鼠卵母细胞中,观察不同注射组小鼠卵母细胞发生生发泡破裂的情况及蛋白质亚细胞定位。结果显示Cdc25B-Δ51及Cdc25B-Δ65都丧失了诱导小鼠卵母细胞减数分裂的能力;同时亚细胞定位研究表明在G2期野生型Cdc25B主要分布在细胞浆中,Cdc25B-Δ51在核浆均有分布,Cdc25B-Δ65则主要分布于细胞核中。研究结果表明Cdc25B在52～65位氨基酸之间存在核输出序列(nuclear export sequence,NES),NES参与的核转运机制作为一种重要的调控机制控制着细胞的生理进程;N末端的氨基酸对减数分裂的重启动起促进作用。

血清中CEA、CA125和CRP对肺癌的临床诊断

目的探讨癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)和C-反应蛋白(CRP)对肺癌的诊断价值。方法应用放射免疫法检测CEA、CA125,散射免疫比浊法检测C-反应蛋白。结果肺癌组CEA、CA125的水平明显高于肺支气管炎组(P<0.05);肺支气管炎组CRP的水平明显高于肺癌组(P<0.05);3项联合检测的敏感度、准确性均高于单项检测结果。结论同时检测患者血清C-反应蛋白、CEA、CA125对肺癌的诊断具有重要临床意义;血清CRP不是检测肺癌的良好指标,但肺部有病变患者CRP水平很高,可提示存在肺癌。

149位丝氨酸对cdc25b蛋白在小鼠卵母细胞中定位的影响

目的:探讨149位丝氨酸使cdc25b蛋白诱导减数分裂功能丧失的机制。方法:应用免疫荧光观察GV期、G2/M转换期卵母细胞中cdc25b蛋白的定位情况;应用显微注射将pEGFP-cdc25b-wt、pEGFP-cdc25 b-s149a的融合质粒及空载体质粒显微注射到含有完整生发泡的小鼠卵母细胞中,观察不同显微注射组小鼠卵母细胞中蛋白亚细胞定位。结果:免疫组化结果显示GV期卵母细胞中cdc25b蛋白主要分布在细胞浆中,这与显微注射野生型cdc25b结果一致,G2/M转换期卵母细胞中可以观察到蛋白的核聚集,cdc25b-s149a在细胞核与细胞浆中均有分布。结论:看似静止的卵母细胞中cdc25b蛋白处于核浆穿梭的动态平衡,149位丝氨酸的磷酸化影响蛋白的核输出速率,从而使蛋白的定位发生改变。

老年健康体检者血清超敏C-反应蛋白检测2000例报告

C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP）是一种主要由肝脏合成的蛋白质，是炎症或组织损伤时非特异的急性时相反应蛋白，正常人血清中含量极微，动脉粥样硬化损伤、局部炎症的程度和范围引起的刺激可导致CRP水平的升高，但该状态下CRP呈低浓度的升高（〈10mg／L），传统的检测手段往往检测不到，

化学发光法和放射免疫法测定血清胰岛素、C肽的比较

目的建立胰岛素、C肽实验室参考值,并与放免法测定的结果进行比较。方法应用化学发光法和放免法分别测定80例新鲜冰冻血清的胰岛素、C肽值。结果计算出化学发光法实验室参考值,并与放免法测定的结果相比,胰岛素和C肽的相关系数分别是r1=0.92,r2=0.99。结论实验室在应用国外生产的试剂盒时,应建立本实验室参考值。同放免法相比,化学发光法有较多的优点。

急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入治疗围术期应用重组人脑利钠肽后脑利钠肽和肌酸激酶同工酶变化及安全性观察

目的观察急性心肌梗死（AMI）患者经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术中及术后静脉应用重组人脑利钠肽（rhBNP）48h后帆浆脑利钠肽（BNP）和肌酸激酶同工酶（CK—MB）的变化及rhBNP的安全性。方法选择70例AMI患者，随机分为rhBNP治疗组（A组）和牛理盐水对照组（B组）。两组患者均行直接PCI术，A组：PCI术中及术后静脉应用rhBNP，先按1．5μg/kg负荷剂量静脉推注（〉3min），后按0．01μg·kg^-1·min“静脉滴注，持续48h;B组：PCI术中及术后应用牛理盐水静脉滴注同期对照。同时观察静脉应用过程中患者有无血压下降、头痛、腹部不适、恶心呕吐等。两组在PCI术前、术后检测血浆BNP及CK—MB浓度。结果（1）B组血浆BNP浓度高峰在PCI术后24h出现。在PCI术后156h两组血浆BNP浓度[B组（137±24）ng／L，A组（115±35）ng／L]差异有统计学意义（P=0．023）。（2）A组术后60h CK—MB较B组明显降低（P〈0．0S）。（3）相关分析显示，BNP与性别（r=0．303，P=0．024）、年龄（r=0．522，P〈0．001）呈正相关，与体质量（r=-0．504，P〈0．001）、左心室射血分数（LVEF）（r=-0．317，P=0．032）呈负相关。（4）A组在应用rhBNP中出现不良反应14例，B绀为16例，差异无统计学意义（P=0．784）。结论AMI患者PCI同术期应用rhBNP安全可行；应用rhBNP可能减轻心肌损伤；血浆BNP浓度女性较男性高，与年龄旱正相关，与体质量、LVEF旱负相关。

MTA1在胃癌细胞系和胃癌组织中的表达定位以及临床意义

目的:探索肿瘤转移相关基因1(MTA1)在胃癌细胞系中的表达情况和定位,研究MTA1在胃癌组织中的表达和临床意义。方法:提取胃癌细胞系蛋白,使用Western blot技术探测内源性MTA1的表达;选取高表达MTA1的胃癌细胞株,利用共聚焦激光扫描显微镜观察MTA1的定位;收集临床胃癌组织标本,测定MTA1的表达情况。结果:在8种胃癌细胞株中有6种胃癌细胞表达MTA1,主要定位在细胞核中。在胃癌组织中,高表达MTA1的比例达到63.6%(11对样品)。结论:胃癌细胞系中表达MTA1主要定位在细胞核中。胃癌组织中高表达MTA1,对胃癌临床诊断提供理论依据。

雌激素受体alpha和肿瘤转移相关因子1在胃癌细胞中的表达和共定位

目的:观察雌激素受体alpha(ERα)和肿瘤转移相关因子1(MTA1)在胃癌细胞中的表达和共定位,探讨胃癌的发病机制。方法:提取BGC823、SGC7901胃癌细胞蛋白,利用Western blotting法检测内源性ERα和MTA1的表达,利用共聚焦激光扫描显微镜观察2种胃癌细胞中ERα和MTA1的定位情况。结果:Western blotting法检测,BGC823、SGC7901胃癌细胞均表达ERα和MTA1;共聚焦激光扫描显微镜观察,ERα和MTA1能够共定位于BGC823和SGC7901细胞的细胞核中。结论:胃癌细胞中表达ERα,并且能够与MTA1共定位在细胞核中。

rhBNP对急性心肌梗死再灌注后急性期细胞因子、心肌凋亡的实验研究

目的:通过构建急性心肌梗死(AMI)再灌注犬模型后,冠脉及静脉应用rhBNP,观察急性缺血-再灌注损伤中细胞因子的变化及对心肌细胞凋亡的影响。方法:选用成年杂种犬15只,置入PTCA球囊至左前降支(LAD)或左旋支(LCX),封堵90min;后球囊撤出完成AMI再灌注模型。成功制备12只AMI再灌注模型,随机分为rhBNP组和对照组。冠脉及静脉应用rhBNP或生理盐水60min。分别于术前及术后采血,检测血浆BNP、ET-1水平;病理检测凋亡心肌细胞含量。结果:对照组及rhBNP组实验犬AMI后90min冠脉血BNP水平较术前显著升高(均P<0.01);对照组AMI后210min静脉血BNP水平较术前显著升高(P<0.01)。对照组及rhBNP组实验犬AMI后90min冠脉血ET-1水平较术前有所升高(P>0.05或P<0.05);对照组AMI后210min静脉血ET-1水平较术前显著升高(P<0.01)。rhBNP组凋亡指数显著减小[(17.5±2.9)%与(24.5±3.6)%,P<0.01]。结论:AMI再灌注后即刻冠脉及静脉应用rhBNP可影响缺血-再灌注细胞因子变化,减少心肌细胞凋亡,对心脏有保护作用。

小鼠cdc25B蛋白特定序列的克隆及原核表达

目的:构建小鼠cdc25B蛋白特定序列的原核表达载体,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白。方法:采用PCR方法从小鼠cdc25B野生型及位点突变型蛋白编码序列中扩增出约360个碱基的片段,构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导后进行融合蛋白表达。Western blot鉴定表达产物。结果:构建出带有GST标签的原核表达载体,在大肠杆菌BL21中表达出相对分子质量(Mr)为40000的重组蛋白质,经Westernblot鉴定,可与GST单克隆抗体结合,发生特异性反应。结论:利用原核表达系统成功表达出小鼠cdc25B蛋白特定序列的蛋白质,为进一步探讨与其他蛋白相互作用提供了基础。

肿瘤抑制基因肝激酶B1在肺腺癌中的表达

目的:研究肝激酶B1(LKB1)在人肺腺癌组织中的表达。方法:收集肺腺癌组织标本(含癌旁组织、正常组织)共60例,采用实时荧光定量PCR法检测肺腺癌组织中LKB1的mRNA含量;Western blot法和免疫组化法检测肺癌组织中LKB1的表达情况。结果:实时荧光定量PCR检测显示LKB1的mRNA含量在正常对照组、癌旁组织和肺癌组织3组之间无显著差异;Western blot法检测和免疫组化结果显示肺腺癌组织中LKB1蛋白的表达量显著低于正常对照组和癌旁组织。结论:肺腺癌组织中LKB1的表达可能存在翻译后的调节。

LKB1抑制肿瘤机制的研究进展

LKB1（liver kinase B1）基因又被称为STK11（serine/thronine protein kinase 11）基因,LKB1的胚系突变可导致Peutz-Jeghers综合征（PJS）,与错构瘤性息肉向肿瘤的发展密切相关。LKB1基因的表达产物在细胞内分布较为广泛,通过多种信号途径参与调节细胞的凋亡、极性等细胞生理过程。尽管LKB1的抑癌机制尚不完全清楚,但现有的研究表明作为一种蛋白激酶,它对细胞的增殖、生长周期阻滞、凋亡、能量代谢和极性等的调控可能都是抑制肿瘤的重要机制。本文就目前已经证实的LKB1抑制肿瘤的分子机制作一综述。

不同核酸提取方法SARS-CoV-2核酸检测性能比较

目的比较磁珠吸附法和样本释放剂法对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测结果的符合率、重复性及检出限,优选出提取效率高、耗时短、成本低的核酸提取方法。方法采用2种核酸提取方法的3种商品化核酸提取试剂,分别对阴性样本、阳性样本及不同浓度(稀释度20~28)的SARSCoV-2 RNA标准品进行RNA提取及实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测,以Ct值评价不同核酸提取方法的性能。结果3种核酸提取试剂的阴性和阳性样本结果符合率均为100%。使用磁珠吸附法进行核酸提取的变异系数(CV)(CV为0.89%~1.58%)低于样本释放剂法,样本释放剂B的CV(CV为0.83%~2.73%)次之,样本释放剂A的CV最大(CV为1.62%~4.90%)。磁珠吸附法及样本释放剂B提取核酸的检出限均为156.3拷贝/mL,样本释放剂A的检出限为625.0拷贝/mL。结论磁珠吸附法核酸提取试剂核酸提取效率高、重复性好,适合大批量样本的集中操作。

原发性卵巢血管肉瘤1例报道并文献复习

原发性卵巢血管肉瘤是一种非常罕见的源于血管内皮细胞的恶性肿瘤。因其罕见、进展快、预后差,目前尚缺乏明确的治疗方案和监测疾病进展的方法。本文报道1例于我院确诊的原发性卵巢血管肉瘤患者的临床诊治经过,并系统回顾原发性卵巢血管肉瘤的临床表现、诊断、治疗方案及预后,以期为临床制定诊疗策略提供参考依据。

肝素结合蛋白在感染性肺炎诊断中的价值分析

目的:探讨肝素结合蛋白(HBP)水平在感染性肺炎诊断中的临床应用价值。方法:选取2017年3月至12月在辽宁省人民医院收治的细菌性肺炎患者51例,非细菌性肺炎患者44例,选取同时期体检健康者51名作为健康人对照组。分别测定各组患者血液中HBP、血清淀粉样蛋白A(SAA)、降钙素原(PCT)及WBC水平,统计分析各指标组间差异;ROC曲线分析各指标对感染性肺炎的诊断效能。结果:血浆HBP水平在细菌性肺炎组[52.00(25.00,101.00)ng/mL]显著高于非细菌肺炎组[(12.14±6.46)ng/mL]和健康人对照组[(11.86±5.14)ng/mL],差异有统计学意义(P<0.05);血浆HBP水平在非细菌性肺炎组和健康人对照组中差异无统计学意义(P>0.05)。细菌性肺炎组[80.89(46.46,167.35)mg/L]、非细菌肺炎组[11.86(2.06,52.56)mg/L]及健康人对照组[(3.34±2.98)mg/L]各组间SAA水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01);ROC曲线分析,HBP与SAA诊断细菌性肺炎的曲线下面积(AUC)分别是0.917和0.834,当HBP诊断阈值为19.5 ng/mL时,诊断细菌性肺炎的敏感性和特异性分别为80.4%和88.4%;SAA诊断阈值为18.84 mg/L时,诊断细菌性肺炎的敏感性为78.4%,特异性为81.1%;联合HBP与SAA诊断细菌性肺炎的敏感性和特异性分别为90.2%和80.0%。HBP与SAA在鉴别诊断细菌性肺炎与非细菌性肺炎的AUC分别为0.908和0.748,当HBP=20.50 ng/mL和SAA=16.31 mg/L时,特异性分别为88.6%和54.5%。结论:血浆HBP是较敏感的细菌性感染标志物,在鉴别细菌与非细菌性肺炎中的诊断价值优于血清SAA、PCT及WBC,与血清SAA联合检测可提高诊断细菌性肺炎的敏感性。

1种新型冠状病毒核酸检测试剂的性能验证

目的验证一种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒的检测性能。方法依据CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》,使用2019-nCoV RNA液体性能验证参考品,依次对实时荧光RT-PCR试剂的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力进行验证及评价。结果实时荧光RT-PCR试剂检测2019-nCoV RNA的符合率为100%,检出限为125 copies/mL。该试剂检测人冠状病毒HCoV-OC43、人冠状病毒HCoV-HKU1、人冠状病毒HCoV-229E、人冠状病毒HCoV-NL63、SARS冠状病毒、中东呼吸综合征(MERS)冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、腺病毒、肠道病毒、肺炎支原体、EB病毒、人巨细胞病毒和结核分枝杆菌无交叉反应;2.0×10^3 copies/mL和2.0×105 copies/mL的精密度参考品N基因检测的批内变异系数(CV)为0.70%及1.36%,批间CV为1.17%及1.72%;ORF1ab基因的批内CV为0.48%及0.52%,批间CV为1.36%及2.39%;加入内源性干扰物血红蛋白及清蛋白、外源性干扰物利巴韦林及阿奇霉素对2019-nCoV RNA的检测结果无影响。结论该试剂检测2019-nCoV RNA的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力均符合临床分子生物学扩增检验的要求,可为临床提供可靠依据。