小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆

目的 小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法 利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆基因。结果 对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行 DDRT-PCR分析，发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异，某些基因在 1或 10月龄胸腺内有选择性表达，某些基因仅有表达量的变化。共获得 108个差异表达的 ESTs，其中 31个呈 Northern印迹阳性，全部测序。经同源性分析，有 14个 ESTs与已知基因有较高的同源性， 17个 ESTs为新的 cDNA片段。选取其中 1个在 1月龄鼠胸腺高水平表达的 EST,从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆到 1个与小鼠的 LAF1转酮醇酶高度同源的 1 470 bp片段。结论 小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。

小鼠增龄相关性胸腺基因的克隆

目的 :用基因差异显示技术研究小鼠胸腺增龄相关基因。方法 :利用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺mRNA差异表达进行分析 ,获得差异显示的表达序列标签 (ESTs)。选其 1个 1月龄高表达的EST为探针 ,从小鼠胸腺cDNA文库中筛选出一个 82 7bp的阳性克隆 ,并用PCR扩增延长为 140 6bp的cDNA片段 (mt2 2 140 6 )。结果 :同源性分析结果表明 ,mt2 2 140 6含一编码 438AA的开放阅读框 ,与人延伸因子 1γ(EF1γ)高度同源 ,其Genbank接收号为BE2 410 6 2。结论 :获得一个含完整开放阅读框与小鼠胸腺增龄相关的基因。