旋毛虫Serpin基因在不同发育时期的mRNA表达水平变化及虫体表达特性

为研究旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin),基因在不同发育时期的mRNA表达水平变化,本研究应用实时荧光定量PCR技术对不同发育时期的虫体的Serpin在mRNA表达水平进行检测。同时利用鼠抗重组蛋白血清对Serpin在旋毛虫成虫、新生幼虫、成囊前期幼虫及肌幼虫中进行定位,以鉴定该Serpin基因的表达特性。研究结果显示,在成虫时期,3 d时表达量明显高于6 h和5 d的表达量(P﹤0.05);成囊前期表达量很低,其中18 d时表达量最低(P﹤0.05);肌幼虫时期在26 d、38 d和48 d均有大量表达(P﹤0.05)。免疫荧光染色结果表明,Ts Serpin蛋白在5 d成虫期的体表表达;在新生幼虫和14 d成囊前期幼虫的体内体表均有表达;38 d肌幼虫时期明显可见表皮及体内均有表达。本实验为探究旋毛虫在宿主体内免疫逃避机制奠定基础。

佐剂对两种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂免疫影响的研究

在寄生虫感染过程中,丝氨酸蛋白酶抑制剂在虫体与宿主相互作用间发挥着重要作用。在免疫过程中,不同佐剂的促免疫应答能力和提高免疫保护能力均不同。为了比较不同佐剂对两种丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsAdSPI和TsKaSPI)免疫保护性的影响,通过对免疫剂量进行优化,应用间接ELISA的方法分析两种SPIs抗体应答,分别在肌肉虫攻击感染后第1天、第3天、第7天、第10天剖杀小鼠取成虫并计数,计算成虫减虫率。结果显示,用3种不同剂量(20、50μg和100μg)的重组蛋白免疫小鼠,50μg与100μg蛋白剂量免疫组诱导产生类似的抗体水平,且均高于20μg组;免疫组弗氏佐剂、ISA 206佐剂和铝佐剂分别与重组蛋白乳化后免疫,可诱导相似的免疫应答及成虫减虫率,其中佐剂ISA 206和氢氧化铝的保护效果更好。

旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对旋毛虫体外入侵肠上皮细胞的影响

为探究2种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts Ad SPI和Ts Ka SPI对旋毛虫体外入侵肠上皮细胞的影响,建立了旋毛虫-Caco-2体外侵染模型,采用IPTG诱导大肠杆菌表达这2种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白并大量纯化,探究不同剂量、不同作用时间Ts Ad SPI和Ts Ka SPI单独及共同作用于侵染模型对旋毛虫体外入侵肠上皮细胞的影响。结果表明：Ts Ad SPI和Ts Ka SPI对旋毛虫入侵肠上皮细胞均有促进作用：2种蛋白单独作用时,剂量为100 g且作用时间为5 h时,入侵率最高;2种蛋白共同作用时,剂量为100 g且作用时间为3 h时,入侵率最高;并且这2种蛋白的单独作用效果优于共同作用效果,这2种蛋白共同作用产生拮抗效果。为进一步研究旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对旋毛虫入侵宿主的影响奠定了基础。