Sqt-1的5'端侧翼序列在旋毛虫rol6基因中的启动功能验证

为验证秀丽隐杆线虫(C.elegans)sqt-1的5'端侧翼序列(5'-FSsqt-1)是否具有启动旋毛虫(T.spiralis)基因表达的功能,本研究采用PCR方法从C.elegans全基因组DNA中扩增5'-FSsqt-1,并将其克隆至以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的C.elegans启动子验证载体p PD95.77中,构建重组质粒p PD-sqt-GFP。将T.spiralis表皮胶原蛋白rol6编码序列克隆至5'-FSsqt-1下游,构建重组质粒p PD-sqt-rol6-GFP。通过显微注射法将p PD-sqt-GFP和p PD-sqt-rol6-GFP分别转入C.elegans体内,进行荧光观察及western blot鉴定。结果显示,T.spiralis表皮胶原蛋白Rol6能够在C.elegans体内获得表达。研究表明,5'-FSsqt-1具有启动T.spiralis基因表达的功能,为T.spiralis基因在C.elegans体内表达奠定了基础。

旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂的原核表达及免疫原性研究

以旋毛虫成虫的总RNA为模板,应用RT-PCR扩增获得旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsAdSPI)基因。经克隆鉴定正确后,将TsAdSPI基因连接到pET-28a表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,并将纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。应用Western-blot及ELISA方法对重组蛋白的免疫原性和抗体效价进行分析。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白分子质量为44 k Da,以包涵体形式表达。经Western-blot和ELISA方法分析,制备的多克隆抗体效价可高达1∶51200,表明该蛋白具有较好免疫原性。表明TsAdSPI蛋白可作为旋毛虫感染早期血清学诊断方法的候选抗原,为新型的抗旋毛虫及相关寄生虫药物研发打下结实基础。

吉林省中部粳稻品种高产优质机理研究

为了研究吉林省中部不同水稻品种的产量和品质潜力,明确各品种类型间的产量、品质及形成机理的差异,选取15个吉林省主栽品种,测定其农艺性状、产量、食味值、直链淀粉含量、蛋白质等指标,并进行相关分析。结果表明:株高与穗长之间达到了显著正相关,与产量达到了显著负相关;穗长与每穴有效穗数呈极显著正相关,与产量呈负相关,但是没有达到显著水平;每穴有效穗数与每穗粒数和着粒密度呈极显著和显著负相关;着粒密度与产量呈显著正相关,与蛋白质含量和食味值分别呈显著负相关和极显著正相关;千粒重与蛋白质之间呈极显著正相关,与直链淀粉含量和食味值呈显著负相关。综上所述,适当的降低株高,减小千粒重,提高着粒密度可以稳固产量的同时对品质提升有促进作用。

鸽源奇异变形杆菌中磷霉素耐药基因fosA3的流行与传播特征

为研究鸽源奇异变形杆菌中磷霉素耐药基因fosA3的流行与传播特征,从广东省佛山市某鸽场采集鸽子及环境样品72份,采用选择性培养基及MALDI-TOF-MS分离鉴定奇异变形杆菌。采用PCR检测质粒介导磷霉素耐药基因fosA3、fosC2以及fosA,采用微量肉汤稀释法测定阳性菌株耐药表型。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、全基因组测序以及构建核心基因组进化树分析菌株的亲缘关系。采用接合转移、Southern杂交及PCR-mapping方法探究fosA3的分子传播特征。结果显示,72份样品中共获得22株奇异变形杆菌,16株菌中检出fosA3,没有检出fosC2和fosA。fosA3阳性菌株均对磷霉素表现高水平耐药(MIC>256 mg/L),对受试9种抗菌药物耐药,呈现多重耐药表型。16株fosA3阳性菌株主要分为2种不同PFGE谱型,随机挑选2株代表性菌株进行全基因组测序并进行遗传进化树分析,发现其中1株fosA3阳性菌与数据库中1株人源奇异变形杆菌之间亲缘关系最近。16株阳性菌株中fosA3均位于染色体上,不能发生接合转移。有阳性菌株中均检测到IS26-orf3-Δorf2-orf1-fosA3-IS26的遗传结构。本研究鸽场奇异变形杆菌中染色体编码的fosA3存在较高的流行性,该基因主要通过菌株的克隆传播以及插入元件IS26介导的水平转移进行传播,应引起高度重视。