大肠杆菌DPS表达、体外自组装及抗氧化作用研究

DNA结合蛋白(DNA-binding proteins from starved cells,DPS)是细菌一类重要的抗逆境保护蛋白。对大肠杆菌DPS蛋白进行原核表达和纯化旨为研究其体外自组装和抗氧化活性。构建表达载体p BVDPSHis,诱导表达并纯化DPS单体蛋白,通过非变性PAGE检测DPS单体自组装情况,通过质粒在Fenton反应时的降解情况检测DPS对DNA的抗氧化保护作用。结果表明,PCR扩增得到522 bp的特异性基因片段,成功构建表达载体p BVDPSHis,诱导表达了分子量为19.5 k D的DPS单体蛋白,亲和层析法纯化的单体DPS经非变性PAGE电泳证实以多聚体蛋白形式存在,Fenton反应说明DPS具有保护质粒DNA抗氧化损伤作用。原核表达的DPS在体外可以自组装成多聚体结构具有抗氧化保护DNA作用。