镍螯合脂质体修饰对TRAIL稳定性及半衰期的影响

目的:将TRAIL用镍螯合脂质体进行修饰,研究其对TRAIL稳定性及半衰期的影响。方法:制备镍螯合脂质体(LS-Ni),将其与含6His标签的TRAIL孵育,得到TRAIL脂质体(LS-Ni-T);采用离心法与SDS-PAGE研究TRAIL与LS-Ni的亲和吸附效果;在正常及肿瘤细胞中检测LS-Ni-T的细胞毒性;评估LS-Ni-T在储存条件(4℃)和生理条件(37℃)下的稳定性;将LS-Ni-T经尾静脉注射小鼠体内,一定时间后分离血浆,测试其对Colo205细胞的细胞毒性以反映LS-Ni-T体内半衰期。结果:LS-Ni-T平均粒径为127.33±0.87 nm,电泳显示TRAIL可高效与LS-Ni结合,LS-Ni-T与TRAIL对正常及肿瘤细胞的毒性无显著性差异,LS-Ni-T在4℃和37℃下的稳定性显著优于TRAIL,药代动力学实验表明LS-Ni-T血浆代谢显著慢于TRAIL。结论:镍螯合脂质体修饰可增强TRAIL蛋白的体外稳定性并延长体内血浆半衰期。

甘露糖修饰提高瑞喹莫德脂质体对肿瘤的靶向和免疫治疗作用

目的利用甘露糖(Mannase)修饰瑞喹莫德(R848)脂质体,赋予其对肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)的主动靶向能力,以提高其对小鼠移植瘤的免疫治疗作用。方法用二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-甘露糖(Mannase-PEG_(2000)-DSPE)脂材掺入脂质体,并采用pH梯度主动载药法包封R848,制备获得甘露糖修饰的R848脂质体(M-LS/R848)。利用粒度仪、透射电镜等表征其理化性质,透析法分析其释药稳定性。体外考察其对小鼠巨噬细胞RAW264.7的靶向性,体内评估其对小鼠结肠癌细胞MC38移植瘤的靶向性和免疫治疗效果,并利用免疫荧光染色探讨其免疫治疗机制。结果本研究制备的M-LS/R848大小均一,平均粒径为(123.43±2.43)nm,Zeta电位为(-0.33±0.24)mV,为球形或类球形粒子,R848包封率达(85.59±0.37)%,48 h R848释放率为(46.73±0.54)%,稳定性较高。体外靶向实验表明RAW264.7细胞对M-LS/R848的摄取率为(5.29±0.16)%,显著高于LS/R848的摄取率[(1.38±0.15)%]。体内靶向实验表明甘露糖修饰脂质体在MC38肿瘤中的累积显著高于非修饰脂质体。体内抑瘤实验表明M-LS/R848治疗组肿瘤平均体积和重量显著小于LS/R848组,甚至有两只小鼠肿瘤治愈并产生对MC38肿瘤的免疫记忆效应。免疫荧光分析显示M-LS/R848给药组肿瘤组织中M1型巨噬细胞和CD8阳性细胞较LS/R848组明显增多。结论利用甘露糖修饰R848脂质体可有效提高其对肿瘤的靶向性并增强免疫治疗效果。