噬菌体裂解酶在畜禽生产中的应用研究进展

畜禽生产中抗生素的长期、大量不规范使用,导致细菌耐药性问题日益严重,给畜禽细菌性疾病的预防和治疗带来极大困难,甚至已经威胁到公共卫生安全。噬菌体裂解酶是噬菌体编码的一种肽聚糖水解酶,能够高效、特异地杀灭细菌且具有抗生物被膜活性,已经成为一种新型抗菌药物,逐渐被纳入细菌尤其是耐药菌感染的治疗策略。畜禽生产中,噬菌体裂解酶已经成功应用于金黄色葡萄球菌、链球菌等革兰阳性菌引起的畜禽细菌性疾病的防控与治疗中,其在大肠杆菌、沙门菌等革兰阴性菌上的应用尚处于体外研究阶段。笔者对噬菌体裂解酶的结构特点、作用机制及其在畜禽生产中的应用进行综述,探究噬菌体裂解酶在畜禽生产中的应用现状及前景,以期为噬菌体裂解酶更进一步地应用于防控和治疗细菌性疾病提供参考。

血清4型禽腺病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)进行快速检测的胶体金免疫层析法,将FAdV-4的hexon-L1蛋白进行原核表达,免疫兔制备多克隆抗体,将多抗包被在检测(T)线,将羊抗兔IgG包被在质控(C)线,用胶体金标记的多抗作为示踪剂,制备胶体金免疫层析检测卡,用于检测FAdV-4抗原,并对其敏感性和特异性进行评价,用其检测临床样本并与PCR检测结果相比较。结果显示,制备的胶体金检测卡可检出FAdV-4含量为10^(2.094)^(5)EID_(50),FAdV-8、新城疫病毒、禽白血病病毒等均不出现特异性条带,对临床样本的检测与PCR检测的符合率达98%。建立的胶体金检测方法可用于FAdV-4感染的快速检测。

1株鸭疫里默氏杆菌的全基因组测序及耐药性与遗传进化分析

【目的】了解鸭疫里默氏杆菌的耐药性、基因组结构与遗传变异程度,为鸭疫里默氏杆菌耐药性与基因组研究提供参考。【方法】本研究对1株从病死鸭脑组织分离的鸭疫里默氏杆菌疑似菌株进行了PCR鉴定、耐药性检测及全基因组框架图测序,并基于16S rDNA与管家基因对其进行了遗传进化分析。【结果】测序数据经过质控与过滤后成功组装为1个包含38个contigs的基因组框架,使用Abricate软件、CARD在线数据库共检测出6种不同的耐药基因,其中4种与耐药表型符合;将基因序列提交至MLST数据库,发现了一种新ST型,定为ST93。构建的16S rDNA和管家基因进化树结果表明,分离菌株与2株鸭疫里默氏杆菌具有较近的亲缘关系。【结论】分离鉴定得到1株鸭疫里默氏杆菌,该菌株为多药耐药菌株,其基因组中携带多个耐药基因;鸭疫里默氏杆菌的基因变异程度较大,且存在跨区域流行传播风险。在临床用药时应注意合理用药,及时监控抗性基因的水平转移,防止鸭疫里默氏杆菌跨区域流行。

禽腺病毒的结构及其血清4型检测方法研究进展

近年来,由血清4型禽腺病毒引起的肝炎-心包积液综合征给养禽业带来严重的经济损失,该病毒的主要结构蛋白有六邻体、纤突和五邻体,可通过琼脂胶聚免疫扩散试验(AGIDT)、聚合酶链反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等进行诊断,其中聚合酶链反应是最常用的分子生物学诊断方法;血清学检测方法中将禽腺病毒重组蛋白作为包被抗原建立的ELISA方法最为常用。论文对禽腺病毒基因组和蛋白结构及FAdV-4检测方法进行了综述,以期为该病的快速检测及科学防控提供理论和技术支持。

4型禽腺病毒分离株SDLC202011的致病性及全基因组序列分析

为了掌握4型禽腺病毒(FAdV-4)山东聊城分离株SDLC202011的致病特点及遗传变异情况,对其进行了致病性试验和全基因测序分析。结果表明:该分离株对21日龄SPF鸡的致死率为100%,感染鸡的心脏、肝脏、肾脏等器官均具有典型的病理变化,免疫组化显示肝脏、胰腺和肾脏中均检测到该病毒的抗原;全基因组序列长度为43826 bp,编码34个开放阅读框。与国外参考毒株相比,该毒株和国内其他毒株在35473~37439 bp均有1966 bp的缺失,该区域包含ORF19、ORF48和ORF27;与非致病性毒株相比,高致病力毒株在hexon、fiber1和fiber2分别有1、3和12个氨基酸位点突变,突变主要集中在fiber2。本研究结果表明分离株SDLC202011为高致病力毒株,可在肝脏、胰腺和肾脏等脏器中增殖,为进一步研究FAdV-4的致病机制及疫苗研发奠定了基础。

一株鸡大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及治疗试验

为探究大肠杆菌噬菌体的生物学特性及其治疗效果,本研究采用双层平板法分离纯化大肠杆菌噬菌体,并测定噬菌体的效价、温度稳定性、p H稳定性、感染复数(MOI)、一步生长曲线等生物学特性,以及噬菌体治疗大肠杆菌病的效果。结果显示分离的噬菌体Bp1805最佳MOI为1时,其效价可达2.4×10^10 pfu/m L;噬菌体Bp1805对温度的耐受范围较广,在p H5~p H10范围内非常稳定,该噬菌体潜伏期为20 min,裂解期为50 min。大肠杆菌病治疗试验结果显示,注射噬菌体比口服噬菌体治疗效果好,大肠杆菌病的防治效果与噬菌体治疗方式和治疗时间有关;噬菌体治疗大肠杆菌病效果优于恩诺沙星和硫酸庆大霉素。噬菌体Bp1805能够裂解致病性大肠杆菌,为临床大肠杆菌病的噬菌体防治提供参考依据。

用免疫胶体金试纸膜检测超强毒IBDV对SPF鸡侵染性变化研究

用免疫胶体金试纸膜检测人工感染GX_8/99株超强毒株传染性法氏囊病病毒(vvIBDV)SPF鸡,检测9天内这九种病料病毒含量的变化,进一步揭示了VVIBDV对鸡体内各组织的侵染性变化规律。

鸡传染性法氏囊病与鸡伤寒混合感染的诊断

鸡传染性法氏囊病（IBD）是主要危害雏鸡的一种急性、高度接触性、病毒性传染病，病原为鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）。鸡伤寒是由鸡伤寒沙门菌引起的一种急性、败血性或慢性经过的传染病，主要危害2～3周龄雏鸡。现将实际工作中遇到的IBDV和伤寒沙门菌混合感染的诊断过程介绍如下。

奶牛乳房炎致病菌的分离鉴定

对山东聊城地区多家奶牛养殖场和养殖户采集的63份乳房炎奶样进行细菌分离鉴定。采用鉴别培养基及生化鉴定方法对奶样中的病原菌进行分离鉴定并做了药敏实验。分离菌鉴定为链球菌,葡萄球菌,大肠杆菌,棒状杆菌,绿脓杆菌等。药敏试验表明:氧氟沙星、强力霉素、氯霉素、庆大霉素为较为敏感的治疗药物。

鸡传染性法氏囊病继发大肠杆菌感染的诊断研究

笔者饲养的200多只蛋鸡用种公鸡于50日龄左右突然发病,主要症状为食欲剧减甚至废绝,羽毛逆立,缩颈嗜眠。倒提时口内流出大量黏液状液体,排恶臭白色或微黄带泡沫稀粪,呈水样。发病率达80%,死亡率达32%。剖检可见部分鸡胸肌和腿肌出血,法氏囊水肿出血,个别鸡法氏囊内有黄色较硬的球状分泌物,有的鸡有心包炎和肝周炎,肠道、脾脏和肾脏有出血点。综合以上症状和实验室病毒学和细菌学检测,确诊为传染性法氏囊病继发大肠杆菌感染。

免疫胶体金试纸膜和AGP检测vvIBDV GX株在SPF鸡体内的侵染性变化规律

对28日龄无特定病原(SPF)鸡通过点眼、滴鼻方式人工感染了传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒株GX;自感染第2天至第9天,每天用免疫胶体金试纸膜和琼脂扩散试验(AGP)两种方法检测九种组织(法氏囊、脾脏、胸腺、肾脏、肝脏、盲肠、扁桃体、肺脏、心脏、直肠内容物)的病毒含量变化,初步探索出传染性法氏囊病病毒在鸡体内各组织的侵染性变化规律。

鸡奇异变形杆菌的分离、鉴定及流行病学调查

从山东省某一地区发病肉鸡中分离到一株细菌,根据培养特性、形态学特性、生化特性及药物敏感性等鉴定所分离的菌株为奇异变形杆菌。采用自行研制的奇异变形杆菌诊断抗原,通过平板凝集试验对河南、山东、广西等省(自治区)共26个鸡场的739份血清样品进行了奇异变形杆菌病的血清学调查。结果表明70日龄以下商品代和父母代肉鸡抗体阳性率较低(6.85%),70日龄以上父母代肉种鸡阳性率较高(20.10%)。回归分析表明,鸡奇异变形杆菌抗体阳性率与日龄呈显著正相关(r=0.954)。

AA肉鸡群中免疫抑制性病毒分子流行病学调查及对疫苗免疫效果影响分析

为了解AA肉种鸡群中免疫抑制性病毒的存在状况及其对NDV疫苗免疫效果和对商品鸡生长的影响,采用多重PCR、RT-PCR和血清学方法对山东某规模化大型AA父母代肉种鸡场的28日龄、180日龄左右种鸡及其所生产的1日龄、30日龄左右商品鸡进行IBDV、MDV、ALV、REV、CIAV及REOV感染状况的调查,并同时对鸡群NDV免疫后抗体水平进行跟踪监测。结果表明种鸡和商品鸡均存在CIAV的感染,并不同程度地存在CIAV与MDV、IBDV等的共感染;发病鸡群NDV抗体水平明显偏低的原因是由于鸡群感染免疫抑制性病毒所致;种鸡群感染CIAV并垂直传播给商品鸡,间接引起商品鸡发生免疫抑制性病毒的共感染,导致商品鸡群30日龄左右生长受阻、免疫能力降低、疾病爆发。

羊白细胞介素-18成熟蛋白的酵母表达和生物学活性研究

为了研究重组羊白细胞介素(gIL)-18在酵母系统中的高效表达,进一步阐明该重组蛋白的生物学活性,以含有gIL-18基因的重组质粒为模板进行PCR扩增,构建重组表达质粒pPICZ-gIL-18,转化于毕赤酵母GS115,以甲醇诱导表达,经SDS-PAGE和western blot分析证实了重组蛋白的表达,分泌的重组gIL-18表达量为100mg/L。经纯化后用MTT法和MDBK-VSV法检测表达的重组IL-18体外生物活性,利用免疫试验检测了重组蛋白对羊痘疫苗的免疫增强作用。实验结果表明,该蛋白具有诱导MDBK细胞分泌IFN-γ和刺激PBMC增殖的生物学活性,比活性为1.5×105u/mg。体外具有增强羊痘疫苗的活性。毕赤酵母分泌表达的重组gIL-18具有良好的生物学活性,为gIL-18作为免疫佐剂和免疫治疗剂的大规模应用奠定了基础。