利用牛乳腺细胞和小鼠乳腺组织分析异绿原酸C通过NF-κB信号通路对乳腺炎症反应的抑制效应

旨在探究异绿原酸C(ICAC)对乳腺炎及NF-κB炎性通路的抑制作用。本研究以脂多糖(LPS)分别刺激牛乳腺上皮细胞(MAC-T)和小鼠乳腺组织建立体外和体内炎性模型,采用MTT方法筛选ICAC处理MAC-T细胞的适宜浓度,ELISA检测炎性因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)和炎性介导因子(COX-2和iNOS)的表达水平,Western blot方法检测NF-κB信号通路关键蛋白(IκB和p65)的表达水平和磷酸化水平。结果发现:1)ICAC在20~100 mg·L^(-1)的浓度下对MAC-T细胞没有显著的生长抑制作用(P>0.05);2)1 mg·L^(-1)的LPS处理引起MAC-T细胞中IL-1β、IL-6的蛋白质表达量极显著高于对照组(P<0.01),ICAC处理(20、50、80 mg·L^(-1))极显著下调了MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2和iNOS的表达量(P<0.01);3)小鼠腹腔注射的ICAC(60、80、100 mg·kg^(-1))均降低了LPS诱导的CD3的表达,小鼠乳腺组织T淋巴细胞浸润减少;4)ICAC显著降低了LPS诱导的MAC-T细胞和小鼠乳腺组织中p65和IκB的磷酸化水平(P<0.05),抑制了p65的核转移。上述结果说明,异绿原酸C通过NF-κB炎性通路抑制MAC-T细胞和小鼠乳腺组织的炎性反应,但是异绿原酸C在奶牛乳腺炎防治中的应用有待进一步研究。

不同添加物和密度对杂交狼尾草青贮效果的影响

本研究采用四因素三水平正交设计试验,探讨了玉米粉(A)(0、3%、6%)、尿素(B)(0、0.3%、0.6%)、乳酸菌(C)(0、5、10 g·t^(−1))、密度(D)(700、800、900 kg·m^(−3))对高水分杂交狼尾草(Pennisetum americanum×P.purpureum)青贮品质及营养价值的影响,筛选出最佳的青贮密度以及玉米粉、乳酸菌和尿素添加量,以提高杂交狼尾草的青贮品质。结果显示:(1)6个处理组感官评定综合评分9~15分,等级为二级以上。(2)随着玉米粉剂量的增加,极显著地提高了青贮料粗蛋白(crude protein,CP)含量和相对饲用价值(relative feeding value,RFV)(P<0.01),极显著地降低了中性洗涤纤维(neutral detergent fiber,NDF)、酸性洗涤纤维(acid detergent fiber,ADF)、粗灰分(crude ash,Ash)含量、pH以及氨态氮的水平(P<0.01)。(3)尿素极显著地提高了青贮料中CP含量与RFV(P<0.01),显著地降低了NDF和ADF含量(P<0.05),当尿素的添加量为0.6%时,CP含量提高了7.05%,NDF和ADF含量分别降低了1.38%和1.45%。(4)当乳酸菌剂添加量和青贮密度分别为5 g·t^(−1)和700 kg·m^(−3)时,RFV最高,NDF含量最低,干物质(dry matter,DM)含量介于其他处理之间。上述结果表明,3种添加物均能显著改善杂交狼尾草青贮发酵效果,其主次影响顺序分别为玉米粉>尿素>乳酸菌剂,且密度为700 kg·m^(−3)时效果最好。最优配比为6%的玉米粉、0.6%的尿素、5 g·t^(−1)的乳酸菌、700 kg·m^(−3)的密度。

芹菜素通过NF-κB和MAPK通路抑制MAC-T细胞和小鼠乳腺的炎性反应

为揭示芹菜素对奶牛乳腺炎的抑制作用及其机制,本研究采用脂多糖(LPS)刺激MAC-T细胞,MTT方法检测芹菜素对奶牛乳腺上皮细胞MAC-T的毒性;real-time PCR和Western blot方法检测炎性因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及氧化应激因子诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧酶2(COX-2)的表达水平;Western blot检测核因子κB(NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路关键蛋白的表达水平和磷酸化水平;免疫荧光检测NF-κB的核转移情况。结果表明:芹菜素(1,7,15 mg/L)显著降低了MAC-T细胞和小鼠乳腺中LPS诱导的COX-2、iNOS、IL-1β、IL-6的mRNA与蛋白质的表达水平(P<0.01)。而且,芹菜素显著降低了MAC-T细胞以及小鼠乳腺中LPS诱导的NF-κB(p65和IκBα)(P<0.05)和MAPK(p38、JNK1/2和ERK1/2)(P<0.01)的磷酸化水平,抑制了NF-κB p65的核转移。这些结果说明芹菜素通过抑制NF-κB和MAPK信号通路活性抑制乳腺细胞的炎性反应,但是芹菜素在奶牛乳腺炎防治中的应用有待进一步研究。