小鼠TERT启动子的克隆及在肿瘤细胞中的转录活性研究

目的:克隆不同长度的小鼠端粒酶逆转录酶(mouse telomerase reverse transcriptase,mTERT)启动子,研究其在小鼠肝癌细胞Hepa1-6、结肠癌细胞CT26、恶性黑色素瘤细胞B16和小鼠成纤维细胞NIH3T3中的转录活性。方法:以Hepa1-6细胞的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增不同长度的mTERT启动子片段,分别命名为mTERT1至7;然后分别克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic构建真核表达载体;采用脂质体Lipofectamine2000将重组质粒分别和pRL-CMV共转染Hepa1-6、CT26、B16和NIH3T3细胞,采用双荧光素酶法检测不同长度的mTERT启动子片断在细胞中的转录活性。结果:双酶切和测序鉴定均显示不同长度的mTERT启动子克隆成功及其表达载体构建成功;荧光素酶活性检测显示mTERT1至5在3种肿瘤细胞中有较高的转录活性,而在NIH3T3细胞中的活性较低,mTERT6和mTERT7在所有细胞中均很低;同一片断在不同肿瘤细胞株中活性不同。结论:mTERT核心启动子区位于ATG上游333bp内,且具有肿瘤特异性。