miR-4505靶向SOX-10在先天性巨结肠中的作用及机制

目的 探讨miR-4505在先天性巨结肠(HSCR)中的作用及分子机制。方法 选取HSCR病变段肠管及扩张段肠管组织标本,q RT-PCR检测组织标本miR-4505表达量;分别选用miR-4505模拟物及抑制剂转染人神经母细胞株SH-SY5Y,q RT-PCR检测转染后miR-4505表达,CCK-8及Transwell检测miR-4505对细胞增殖及细胞迁移的影响;生物信息学预测、双荧光素酶报告基因实验、Western blot以及免疫组织化学在细胞及组织层面证实SOX-10是miR-4505的作用靶点。结果 与扩张段肠管相比,HSCR病变段肠管的miR-4505呈高频高表达(t=11.25,P <0.001);过表达miR-4505可以抑制细胞增殖及迁移,敲低其表达后细胞的增殖及迁移能力增强;靶基因预测及双荧光素酶报告基因检测证实miR-4505可与SOX-10的3′-UTR结合,Western blot证实其可降低细胞SOX-10蛋白含量,而免疫组化证实SOX-10在HSCR病变段肠管中呈低表达。结论 miR-4505在HSCR病变段及扩张段肠管之间存在表达差异,miR-4505可以抑制细胞的增殖及迁移,其在HSCR中发挥作用可能与抑制SOX-10基因表达有关。

胸腔镜与开胸手术治疗Ⅲ型先天性食管闭锁伴有食管气管瘘的多中心回顾性研究

目的 比较胸腔镜与开胸手术治疗Ⅲ型食管闭锁伴食管气管瘘的临床疗效。方法 回顾性分析在南方医科大学珠江医院及中山市博爱医院小儿外科治疗的Ⅲ型先天性食管闭锁手术临床资料,分为开胸组及腔镜组,对两组患儿的一般情况、围手术期情况、术后治疗效果及术后并发症进行比较。结果 两家医院共完成135例Ⅲ型食管闭锁手术,排除合并严重畸形、中转开放及死亡病例,共纳入119例病例,其中开胸组68例,腔镜组51例。两组患儿性别、入院年龄、体重、术前上机率、食管闭锁分型差异均无统计学意义(均P>0.05),腔镜组需要更长的手术时间(t=5.414,P<0.001),两组患儿术后呼吸机辅助通气时间、开始进食时间及住院时间差异无统计学意义(均P>0.05);两组吻合口狭窄及吻合口漏发生率相当,开胸组伤口感染6例、胸廓畸形1例、食管气管瘘复发3例及贲门失弛缓1例,腔镜组食管气管瘘复发2例,气管憩室1例,胸腔镜可以降低术后切口感染的发生率(χ2=4.739,P=0.029)。结论 胸腔镜手术治疗Ⅲ型食管闭锁伴食管气管瘘是安全可行的,胸腔镜手术需要更长的手术时间,但并不会增加术后康复时间及手术并发症发生率,术后切口更加美观。

MicroRNA-145-3p在先天性巨结肠中的作用及机制研究

目的探讨micro RNA-145-3p(miR-145-3p)在先天性巨结肠(HD)中的表达及其发挥作用的可能分子机制。方法选取2013年2月-2018年6月南方医科大学珠江医院40例HD病变段肠管(HD病变肠管组)及40例正常肠管(正常肠管组)组织标本。采用qRT-PCR检测组织标本miR-145-3p相对表达量。过表达细胞miR-145-3p后,CCK-8法检测细胞的增殖情况;Transwell检测细胞迁移情况;双荧光素酶报告基因实验、Western blotting及免疫组织化学染色明确miR-145-3p对靶基因GDNF的影响。结果HD病变肠管组miR-145-3p相对表达量高于正常肠管组(P<0.05)。过表达细胞miR-145-3p后,细胞增殖能力下降(P<0.05),细胞迁移能力降低(P<0.05);靶基因预测软件筛选出GDNF是miR-145-3p的潜在靶点;双荧光素酶报告基因实验证实,miR-145-3p可以与GDNF的3’-UTR结合(P<0.05);Western blotting检测证实,miR-145-3p可使SH-SY5Y细胞的GDNF蛋白相对表达量降低(P<0.05);而免疫组织化学染色证实,GDNF在miR-145-3p高表达的HD组织标本中存在高频低表达。结论miR-145-3p可以抑制神经母细胞的增殖及迁移,是一个重要的HD分子标志物,其作用机制可能与抑制GDNF蛋白表达有关。

miR-145-3p对大鼠肠神经干细胞增殖与分化的影响

【目的】探讨微小核糖核酸145-3p(miR-145-3p)对SD大鼠肠神经干细胞(ENSCs)增殖及分化的影响。【方法】原代培养法提取孕18 d的SD大鼠肠神经干细胞(ENSCs),观察其细胞学特性,采用巢蛋白(Nestin)及神经胶质纤维蛋白(GFAP)免疫荧光进行鉴定。分别采用脂质体及慢病毒载体过表达ENSCs的miR-145-3p进行转染,采用荧光显微镜及实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测转染效果。Edu细胞增殖实验及诱导分化实验明确miR-145-3p对ENSCs增殖及分化的影响。【结果】原代培养ENSCs可见大量神经球样结构形成,免疫荧光证实细胞Nestin和GFAP均阳性,具有干细胞特性;在慢病毒转染组内,miR-145-3p过表达组的miR-145-3p相对表达量为3.52±0.24,显著高于阴性对照组的0.01±0.01,其差异具有统计学意义(P<0.05);miR-145-3p过表达组的Edu阳性率为(15.23±1.17)%,显著低于阴性对照组的(22.38±1.52)%;采用分化培养基处理后,miR-145-3p慢病毒载体转染组的GFAP阳性细胞比例为(21.47±1.98)%,显著低于阴性对照组的(33.86±2.52)%。【结论】对于ENSCs而言,慢病毒载体转染效率较高,miR-145-3p可抑制ENSCs的增殖与分化,其可能在肠神经系统发育过程中发挥重要作用。

常染色体显性Pallister-Hall综合征患儿1例的GLI3基因变异分析

目的探讨1例Pallister-Hall综合征(PHS)患儿的临床特点及遗传学病因。方法选取2020年6月2日于南方医科大学珠江医院就诊的1例PHS患儿为研究对象。对患儿进行全外显子组检测,对候选变异进行Sanger测序家系验证。结果基因检测提示患儿携带GLI3基因(NM_000168)c.3320_3330delGGTACGAGCAG(p.G1107Afs×18)杂合变异,其父母均未携带相同变异。结论GLI3基因c.3320_3330delGGTACGAGCAG(p.G1107Afs×18)移码变异可能是患儿的遗传学病因。对于以下丘脑错构瘤、中心性多指(趾)畸形为主要特征的患儿,应考虑PHS并进行GLI3基因的变异检测。