癫痫发病机制的研究进展

癫痫是神经系统常见疾病之一,其发病机制非常复杂,迄今尚未完全阐明。近年来的研究表明,癫痫发作时大脑神经元的异常放电与神经递质、离子通道、神经胶质细胞、突触联系、遗传及免疫等的异常有密切关系。本文就以上方面对癫痫发生机制的研究进展进行综述,以便深入理解癫痫发病机制,为诊断、预防与治疗提供必要的理论依据。

结核分枝杆菌Rv1446c、Rv2145c、Rv2971、Rv0491基因的克隆表达研究

目的在大肠杆菌中高效表达结核分枝杆菌Rv1446c、Rv2145c、Rv2971、Rv0491的蛋白。方法通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增Rv1446c、Rv2145c、Rv2971、Rv0491基因,以质粒pET28a为表达载体,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)。以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,通过SDS-PAGE鉴定rRv1446c、rRv2145c、rRv2971、rRv0491在大肠杆菌中的表达。经质谱仪测定重组蛋白的分子量。结果与结论4个重组蛋白成功在大肠杆菌中表达,分子量实测值与理论相近。

不同毒力结核杆菌的纯化蛋白质衍生物对人巨噬细胞凋亡的诱导及其与Toll样受体-2的相关性

目的了解两种不同毒力结核杆菌的纯化蛋白衍生物刺激下人单核-巨噬细胞（THP-1）凋亡的差异及其与Toll样受体-2（TI。R2）的相关性。方法分别用等浓度的高毒力结核杆菌衍生蛋白（H37Rv-PPD）和低毒力结核杆菌衍生蛋白（BCG-PPD）在3、8、15和24h刺激分化成熟的THP-1细胞；Hochest染色后观察细胞凋亡及坏死情况。流式细胞仪检测细胞AnnexinV蛋白以判定凋亡及TLR-2表达情况；加入TI。R2阻断剂后，再用流式细胞仪测定细胞表面TI。R-2的阻断效果及凋亡情况。结果BCG-PPD刺激下细胞以凋亡多见，而H37Rv-PPD刺激下细胞核则多呈坏死状。凋亡率随时间升高，第24小时凋亡比例高达30．2％，而同时间点TI。R2的比例为8．8％；应用TLR-2阻断剂后，每个时间点TLR2表达比例均在3％以下，对应时间点凋亡比例下降，第24小时凋亡比例仅为10．50o。H37RvPPD可引起TLR-2高表达，第24小时TLR-2表达率为17．2％，该时间点凋亡率仅为7．7％；TLR2阻断后，其表达率在对照波动范围内，但凋亡率与TI。R-2未阻断前相比变化不大。结论BCG-PPD主要诱导THP-1的凋亡，且与TI．R2有一定的相关性；而H37Rv-PPD主要诱导THP-1的坏死。

BCG-PPD、H37Rv-PPD诱导入巨噬细胞死亡及TNF-α、IL-1β和IL-10的表达差异

目的 本实验对不同毒力结核杆菌的衍生蛋白（PPD）对人巨噬细胞（THP-1）的影响及其与TNF-αt、IL-1 β及IL-10的差异性进行研究.方法 用H37Rv-PPD和BCG-PPD分别在3 h、8 h、15 h及24 h四个时间点刺激分化成熟的THP-1细胞,再应用Hochest染色法,荧光镜下观察细胞的转归差异（凋亡及坏死情况）,同时取上清用ELISA法测TNF-α、IL-1β及IL-10的浓度.结果 BCG-PPD刺激下细胞核以椭圆凋亡小体多见,而H37Rv-PPD刺激下细胞核则多呈坏死状,以坏死多见;BCG-PPD刺激下上清中TNF-α及IL-10的表达量低于H37Rv-PPD刺激组,但BCG-PPD刺激下IL-1β的表达量却高于后者.结论 提示高毒力菌株衍生蛋白（H37Rv-PPD）引起THP-1坏死的原因可能与TNF-α的过度表达有关,而凋亡少见可能与IL-10抑制凋亡作用有关,而低毒力菌株衍生蛋白诱导凋亡与IL-1β有关.可能菌株毒力差异就存在于菌株的蛋白成分之中,且与上述几种细胞因子密切相关.

Rv0927c基因的克隆表达及其在结核分枝杆菌基因分型中的作用

北京基因型菌株是结核分枝杆菌中最大的一个基因家族，于1995年由vall Soolingen等在北京地区发现并命名。该型菌株在实验室中对小鼠有很强的感染性，而且诱导机体产生的细胞因子水平较低，使Th1型免疫反应不能发挥作用。它在人源单核细胞中生长速率较快，可能与结核分枝杆菌的耐药H引及卡介苗对其缺乏免疫保护有一定相关性。有研究者预测该型菌株可能是将来全球结核病流行的重要因素。