PRRSV经典毒株、高致病毒株、类NADC30毒株及类NADC34毒株鉴别RT-PCR检测方法的建立及应用

为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同流行毒株的快速鉴别诊断能力,本研究对近几年国内外流行的PRRSV不同毒株的Nsp2核苷酸序列进行比对,设计了1对可用于鉴别4类不同PRRSV毒株的简并引物,建立了鉴别PRRSV经典毒株(C-PRRSV)、高致病毒株(HP-PRRSV)、类NADC30毒株(NADC30-like)及类NADC34毒株(NADC34-like)的RT-PCR检测方法。结果显示,C-PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like、NADC34-like毒株Nsp2基因的扩增片段大小分别为1072 bp、982 bp、679 bp、772 bp,检测限分别为4.70×10 copies/μL、3.34×10^(2)copies/μL、8.57×10 copies/μL、5.71×10^(2)copies/μL,对其他常见猪病病原均未扩增出特异性条带,3次重复试验均能够扩增出均匀一致的目的片段;83份临床组织样品共检出阳性27份,其中NADC30-like毒株7份、NADC34-like毒株20份,与GP5基因检测结果的符合率为97.6%。上述结果表明,本研究建立的PRRSV鉴别RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于C-PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like、NADC34-like毒株的快速鉴别和流行病学调查。