溶瘤呼肠孤病毒联合CD30/CD16A双特异性抗体对NK细胞介导的ADCC效应的影响

目的 探究溶瘤呼肠孤病毒(reovirus)联合CD30/CD16A双特异性抗体(Bs Abs)对自然杀伤细胞(NK)活性及抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)的影响。方法 采集健康献血者肝素抗凝静脉血30 m L,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用免疫磁珠筛选获得NK细胞,采用流式细胞术检测NK细胞纯度;溶瘤呼肠孤病毒(reovirus)预处理NK细胞(Reo-NK组),以单独NK组为对照,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测2组NK细胞的活化作用;reovirus联合(CD30/CD16A) Bs Ab杀伤KARPAS-299细胞,分为Ig G1处理组(Ig G1+NK组)、CD30/CD16A处理组(CD30/CD16A+NK组)、病毒联合Ig G1处理组(Ig G1+Reo-NK组)及病毒联合CD30/CD16A处理组(CD30/CD16A+Reo-NK组),采用LDH释放实验检测各组NK细胞的活化作用,采用流式细胞术检测各组NK细胞表面活化标注物CD69和细胞毒性颗粒CD107a的表达;用reovirus联合(CD30/CD16A) Bs Ab处理NK细胞(Reo-NK+CD30/CD16A组),以NK联合(CD30/CD16A) Bs Ab为对照(NK+CD30/CD16A组),采用LDH释放试验检测2组NK细胞对Raji细胞的杀伤效应。结果 体外新鲜分离的NK细胞纯度可达70%以上;与单独NK细胞组相比,Reo-NK组DLD-1细胞的杀伤率明显增高(P<0.01);KARPAS-299细胞上CD30分子的阳性率高达90%以上;Ig G1与(CD30/CD16A) Bs Ab抗体浓度大于1.00×10^-12mol/L时,与NK+Ig G1组相比,NK+CD30/CD16A组促进KARPAS-299细胞死亡率(P<0.05);与Reo-NK相比,Reo-NK+CD30/CD16A组能明显促进KARPAS-299细胞死亡率(P<0.01);随着reovirus滴度增加,NK细胞表面活化标致物CD69及细胞毒性物质CD107a阳性率随之上升;reovirus与(CD30/CD16A) Bs Abs相比可以进一步促进NK细胞的活化。结论 Reovirus可促进NK细胞的活化并增强其细胞毒作用,联合(CD30/CD16A) Bs Abs后可进一步促进NK细胞介导的ADCC效应。

TLR3激动剂对体外NK细胞抗肿瘤活性的影响及机制

目的 探讨TLR3激动剂Poly(I∶C)转染对体外扩增的人自然杀伤(NK)细胞抗肿瘤活性的影响及可能机制。方法 将体外扩增的人NK细胞分为Poly-NKelect.组[人NK细胞经电穿孔转染Poly(I∶C)]、Poly-NK组[脂质体介导的Poly(I∶C)并转染人NK细胞]以及NK组(单独NK细胞),采用CCK-8法检查3组细胞对人结直肠癌细胞株DLD-1细胞的杀伤率;根据实验结果选择Poly-NK组细胞进行后续实验,Poly-NK组细胞经TLR3/ds RNA复合物抑制剂处理(Poly-NKinhib.组)及TLR3下游的TBK1/IKKε复合物抑制剂BX795处理(PolyNK+BX组),采用CCK-8法检测这两组细胞对DLD-1细胞的杀伤率,流式细胞仪检测这两组NK细胞活化标志物CD69的表达,ELISA检测干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及穿孔素(perforin)的表达水平。结果 与NK组比较,Poly-NKelect.组和Poly-NK组对DLD-1细胞的杀伤率增加(P<0.05);与Poly-NKelect.组比较,Poly-NK组对DLD-1细胞的杀伤率更高(P<0.01),因此后续试验均采用Poly-NK组进行比较;与Poly-NK组比较,Poly-NK+BX组对DLD-1细胞的杀伤率降低(P<0.01)、CD69表达降低(P<0.05)、perforin及IFN-γ表达降低(P<0.05);与Poly-NK组相比,Poly-NKinhib.组对DLD-1细胞的杀伤率降低(P<0.05)、CD69的表达下降(P<0.05)、TNF-α及IFN-γ的表达降低(P<0.05)。结论 Poly(I∶C)可促进人NK细胞的体外抗肿瘤活性,TBK1/IKKε激酶复合体可能参与了Poly(I∶C)对人NK细胞的活化。