脂多糖诱导C57/BL6小鼠骨髓巨噬细胞表达共刺激分子CD80、CD86实验研究

目的:探究细菌脂多糖(LPS)诱导C57/BL6小鼠骨髓巨噬细胞表达共刺激分子CD80、CD86的情况。方法:从C57/BL6小鼠的股骨和胫骨中无菌分离骨髓细胞并使用25 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)进行刺激。通过换液对其进行纯化和扩增培养,经过7 d的分化培养和形态学观察,获得骨髓来源单核细胞。用异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗小鼠F4/80抗体,用藻红蛋白(PE)标记抗小鼠CD11b抗体,流式细胞仪检测确定该细胞是否为小鼠骨髓巨噬细胞(BMDM)。观察组用LPS 1μg/ml刺激培养BMDM,对照组用含10%胎牛血清(FBS)的等量L-DMEM培养。培养24 h后用流式细胞仪检测FITC标记的抗CD80(B7-1)抗体和抗CD86(B7-2)抗体。结果:新分离的小鼠骨髓单核细胞呈小圆形,两端伸出触角,培养5 d后细胞呈椭圆形,两端的触角更明显,增殖依赖M-CSF。流式细胞仪检测结果显示,分离的小鼠骨髓单核细胞CD11b抗体阳性,纯度较高;LPS刺激后实验组较对照组表达共刺激分子CD80、CD86明显增多。结论:LPS刺激可使C57/BL6小鼠骨髓巨噬细胞表达共刺激分子CD80、CD86。

灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞产生白介素10的影响

目的探讨灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞产生白介素10(IL-10)的影响。方法分别将不同浓度灵芝多糖作用于B16F10黑素瘤细胞,通过RT-PCR方法和蛋白印迹(Western-blot)技术检测IL-10的表达情况。结果在不同浓度灵芝多糖作用下,经RT-PCR方法检测发现,加入0μg/mL、0.2μg/mL、0.8μg/mL、3.2μg/mL、12.8μg/mL灵芝多糖的B16F10黑素瘤细胞释放IL-10的量分别为1.03±0.15、1.15±0.25、0.92±0.11、0.86±0.64、0.75±0.12,与0μg/mL灵芝多糖组相比较,除0.2μg/mL灵芝多糖组,其他组差异均具有统计学意义,P<0.05。经Western-blot法检测,加入0μg/mL、0.2μg/mL、0.8μg/mL、3.2μg/mL、12.8μg/mL灵芝多糖的B16F10黑素瘤细胞IL-10表达量分别为1.47±0.43、1.58±0.31、0.93±0.12、0.89±0.26、0.40±0.29,与0μg/mL灵芝多糖组相比较,12.8μg/mL灵芝多糖组差异有统计学意义,P<0.05。结论灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞产生IL-10具有抑制作用。

黑素瘤细胞对同基因小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α抑制作用

探讨黑素瘤细胞对同基因小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α(tumor necrosis factor)的抑制作用。方法:制备B16F10黑素瘤细胞培养上清,作用于同基因小鼠腹腔巨噬细胞,经脂多糖(LPS)刺激,通过蛋白印迹(Western-blot)技术检测巨噬细胞释放TNF-α的情况。结果:在B16F10黑素瘤细胞培养上清的作用下,经LPS诱导,经Western-blot法检测发现:加B16F10黑素瘤细胞培养上清组TNF-α表达量为0.84±0.21低于对照组表达量3.22±0.33,t=8.55,P<0.05,差异有统计学意义。结论:B16F10黑素瘤细胞培养上清对同基因小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α具有抑制作用。