天然药物化学创新实验教学探索——以余甘子多糖的提取分离为例

天然药物化学是药学专业的重要专业基础课,天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分,随着科学技术的发展,多种色谱法联用技术在天然药物的提取分离中应用越来越广泛。为提高学生的天然药物化学研究与综合实践技能,以余甘子多糖的提取分离为例,我们探索了多种色谱法联用在天然产物实验教学的应用,为天然药物创新实验教学提供借鉴和参考。

药物分子设计前沿技术融入药物化学实验教学——基于分子对接技术的抑制PERK的活性化合物筛选实验

药物化学是一门实践性较强的课程,药物分子设计的快速发展,对于药物化学的实践学习具有非常重要的指导作用。因此,我们设计了一个基于分子对接技术的抑制蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase, PERK)活性化合物的虚拟筛选实验。该实验可以帮助学生掌握分子对接技术的基本原理,熟悉分子对接技术筛选活性化合物的基本操作方法,并学会药物分子设计相关专业软件的使用及实验数据的分析。通过具体的实践练习,使学生了解药物设计前沿技术,提升学生从事药物研发的素养。

苦丁茶冬青化学成分和药理作用研究进展

冬青属植物苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C.J.Tseng)的叶或嫩叶,是民间常用的中草药,有清热解毒之功效。现代药理研究表明,苦丁茶冬青具有降脂减肥、降血糖、抗动脉粥样硬化、抗氧化和抗菌、抗病毒等活性。目前从苦丁茶冬青中已分离出大量的三萜及其皂苷类和酚酸类等化学成分,但其发挥功效的药效物质基础及其分子机制有待进一步研究。因此本文就近年来苦丁茶冬青叶化学成分及药理作用进行了分析和总结,为苦丁茶冬青药用资源的开发利用提供参考。

楤木芽对脂肪变性肝L-02细胞脂代谢影响研究

目的：探讨野生与栽培楤木芽水提物、总皂苷及其化学成分楤木皂苷A对脂肪变性肝细胞L-02脂代谢的干预作用。方法：采用含医用脂肪乳的培养液诱导建立肝细胞脂肪变性模型,分别给予高浓度组（100μg/m L）、中浓度组（50μg/m L）和低浓度组（10μg/m L）野生与栽培楤木芽水提物、野生与栽培楤木总皂苷和楤木皂苷A进行培养,24 h后测定肝细胞内甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）的含量。结果：该研究细胞造模成功。与对照组比较,模型组TC和TG含量均显著升高（P〈0.05）。与模型组比较,野生楤木芽总皂苷、栽培楤木芽总皂苷和楤木皂苷A均可降低TC的含量（P〈0.05）,其中栽培楤木芽总皂苷低浓度组降低TC效果优于其他组（P〈0.05）,且在10~100μg/m L范围内呈现量效关系;野生楤木芽总皂苷（低、中浓度组）、野生楤木芽水提物（中浓度组）和楤木皂苷A（低、中、高浓度组）可降低细胞内TG的含量（P〈0.05）。结论：楤木芽总皂苷和楤木皂苷A对体外肝细胞脂肪变性模型可产生积极的脂代谢影响,具有一定的潜在开发价值。

龙胆属植物研究进展

以近年来国内外发展的文献为依据,从化学成分、药理作用等方面综述了龙胆属植物的研究进展。龙胆属植物含有多种活性成分,具有很好的药用前景。

云南河口县瑶族医药传承和保护现状分析与对策研究

通过文献调研、田野调查和记录文本等方法,以河口县民间瑶医从业人员的访谈资料为基础,总结和分析河口县瑶医药概况及其现状,并在此基础上提出传承和保护瑶族医药的对策。

芡实化学成分研究

目的:研究睡莲科芡属植物芡Euryale ferox Salisb.的成熟种仁芡实的化学成分。方法:对芡实95%乙醇提取物的石油醚和乙酸乙酯部位采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法分离纯化;根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果:从芡实中分离并鉴定了7个化合物,分别为:原儿茶酸(1)、没食子酸(2)、没食子酸乙酯(3)、5,7-二羟基色原酮(4)、β-谷甾醇(5)、胡萝卜苷(6)、5,7-二羟基-6,4'-二甲氧基黄酮(7)。结论:以上化合物均为首次从该植物中分离得到。

中药化学课程教学改革初探

针对当前社会对药学、中药学人才的培养需求,结合中药化学教学的现状,从传统中药内容的强化,学科前沿成果与社会热点的引入,双语教学,多种授课方式这四个方面对中药化学课程改革进行研究与探讨。

超临界CO_2流体萃取滇红茶及其提取物成分分析

目的考察超临界二氧化碳提取滇红茶香气成分的最佳工艺,并对提取物成分进行分析。方法采用单因素试验考察夹带剂、茶叶粒度、萃取时间、萃取压力、萃取温度对提取率的影响,再通过正交试验优化工艺条件;用GC-MS方法进行化学成分分析。结果最佳工艺条件为:夹带剂250m L无水乙醇、茶叶粒度20目、提取时间0.5h、萃取压力25MPa、萃取温度45℃,萃取率为0.46%,提取物经GC/MS检测到近50种成分。结论超临界CO2流体萃取技术可用于滇红茶有效成分的提取。

UPLC法测定余甘子中4种抗氧化活性成分的含量

目的:评价余甘子中没食子酸、柯里拉京、诃子鞣质和鞣花酸4种酚类成分的抗氧化能力,同时建立其UPLC含量测定方法。方法:采用DPPH·清除自由基能力活性评价法测定4种酚类成分体外抗氧化活性;采用Agilent ZORBAX SB-Aq C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱;以0.3%甲酸溶液-乙腈∶甲醇(1∶5)为流动相梯度洗脱;流速0.2 mL/min;检测波长254 nm;柱温30℃。结果:4种酚酸类成分均有较强的抗氧化能力,并且随着浓度的增大,对DPPH·自由基的清除能力也增强;没食子酸、柯里拉京、诃子鞣质和鞣花酸分别在12.8~332.8μg/mL、12.8~332.8μg/mL、17.6~457.6μg/mL、23.6~613.6μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为94.6%、93.1%、95.8%和100.4%,RSD均小于4.0%。结论:该方法可以同时测定余甘子中4种抗氧化活性成分的含量,结果准确、快速、重现性好,可以作为余甘子药材的质量控制方法。

柯里拉京调节自噬影响巨噬细胞源性泡沫细胞形成的研究

目的:探讨柯里拉京(Cor)通过自噬抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成及其机制。方法:以THP-1和J774A.1巨噬细胞为研究对象,分别设正常组、泡沫细胞模型组(ox-LDL+LPS组/ox-LDL组)和不同浓度Cor处理组(Cor组)。油红O染色观察各组细胞内脂滴沉积情况,ELISA法检测各组细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量及细胞上清液白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;分子对接建模预测Cor与自噬和炎症相关靶点的作用;Western blot检测各组细胞中自噬和炎症相关蛋白的表达水平,试剂盒检测caspase-1活性。结果:与模型组比较,Cor中、高剂量组可显著减少THP-1和J774A.1两种巨噬细胞内的红色脂滴;Cor可减少细胞脂滴沉积,呈浓度依赖性降低胆固醇酯(CE)/TC(P<0.05或P<0.01),显著降低IL-6、MCP-1、IL-1β和TNF-α的含量(P<0.01);Cor与受体哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的结合亲和力最好,最佳结合亲和力是−9.8 kcal/mol;同时Cor高剂量组可显著上调磷酸化AMP活化蛋白激酶(p-AMPK)/AMPK的蛋白表达水平(P<0.01),显著下调磷酸化mTOR(p-mTOR)/mTOR、P62、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和caspase-1的蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),beclin-1和LC3的蛋白表达无显著性差异(P>0.05);此外,Cor也显著抑制了caspase-1的活性(P<0.05)。结论:Cor可以抑制THP-1巨噬源性泡沫细胞的炎症反应,其机制可能与抑制mTOR,激活自噬有关。

柯里拉京调节巨噬细胞胆固醇代谢的作用及其机制

目的探究柯里拉京(corilagin,Cor)调节巨噬细胞胆固醇代谢的作用及机制。方法采用分子对接技术,预测Cor调节胆固醇代谢的蛋白靶点。结合80 mg·L^(-1)氧化修饰型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoproteins,ox-LDL)诱导建立的RAW264.7巨噬细胞泡沫模型评价其活性;采用实时聚合酶链式反应和免疫印迹方法检测胆固醇代谢相关基因和蛋白表达;并通过高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型研究其活性及其机制。结果Cor与胆固醇代谢相关的A类清道夫受体(class A scavenger receptor,SRA)和CD36以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)和细胞膜上的ATP结合盒转运体G1(ATP binding cassette transporter G1,ABCG1)蛋白能形成氢键和疏水相互作用。细胞实验表明,Cor(60、120和240μmol·L^(-1))降低巨噬细胞内TC的含量,下调SRA的基因和蛋白表达,下调CD36的基因表达,并上调了ABCA1和ABCG1的基因和蛋白表达。动物实验表明,Cor(15、30和60 mg·kg-1)降低小鼠血清中的TMAO含量,减少主动脉根部的斑块形成,降低了主动脉根部斑块中CD36、SRA的荧光蛋白表达水平。结论Cor能够通过调节CD36、SRA、ABCA1和ABCG1介导的胆固醇代谢,抑制巨噬细胞泡沫化,发挥抗AS作用。

中药治疗结直肠癌代谢标志物的研究进展

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)作为常见的消化道恶性肿瘤疾病对人们的生存带来了巨大的挑战.研究表明,体内代谢物与结直肠癌有着密切的关系,探究结直肠癌及其代谢物之间的关系尤为重要.代谢组学在研究生物体代谢途径中表现出极强的统一性,可以在中药多靶点、多途径治疗结直肠癌的基础上,鉴定出有效的生物标志物,为中药治疗结直肠癌提供了新的技术方法.文中对中药复方、单味中药和中药单体在代谢标志物对结直肠癌的研究进行了归纳和分析,总结了中药干预结直肠癌的生物标志物及相关代谢通路,旨在为中药治疗结直肠癌的深入研究和临床应用提供参考.

天然纯鲜粉葛饮料通过TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制小鼠酒精性肝损伤研究

目的:探讨超高温瞬时灭菌全新工艺制备的无化学添加剂的天然纯鲜粉葛饮料对酒精性肝损伤小鼠的保护作用以及对TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法:采用高效液相色谱法对鲜粉葛饮料中异黄酮成分进行含量测定。采取43%酒精灌胃的方法建立小鼠酒精性肝损伤模型。检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)及炎症因子水平;苏木素-伊红(HE)染色分析各组肝脏病理形态变化;免疫组化检测肝组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化分子88(MyD88)、核转录因子(NF-κB p65)的表达。结果:天然纯鲜粉葛饮料中检测到6种异黄酮成分,其中葛根素含量最高,达到622.6μg/mL。天然纯鲜粉葛饮料预处理能降低小鼠体内两种血清转氨酶含量水平(P<0.01);饮料高剂量组能降低血清中TG、TC、LDL、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量水平(P<0.001),提高HDL含量水平(P<0.05)。病理切片结果显示天然纯鲜粉葛饮料能有效改善小鼠肝组织出现的脂肪空泡,胞质疏松,细胞核排列不规则等情况,并抑制小鼠肝组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达(P<0.01,P<0.001)。结论:无化学添加剂的天然纯鲜粉葛饮料可减少小鼠肝脏内脂质沉积和降低炎症因子水平,对酒精性肝病具有一定的预防保护作用,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路的激活有关。

葛根中3个异黄酮类化合物对ox-LDL诱导的脂质沉积和LPS诱导的炎症的影响

目的探究葛根中葛根素、大豆苷和大豆苷元3种异黄酮类成分对ox-LDL诱导的脂质沉积和LPS诱导的炎症的影响。方法采用MTT法确定药物浓度和作用时间。以ox-LDL诱导Raw264.7细胞建立泡沫细胞模型,油红O染色后观察细胞泡沫化情况,酶法检测TC和TG的含量。以LPS诱导Raw264.7细胞建立炎症模型,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)水平。结果经ox-LDL诱导后,模型组细胞内出现大量红色脂滴,细胞泡沫化明显,与模型组比较,3个化合物各浓度组的泡沫细胞中脂滴变小、颜色变浅。ox-LDL诱导后泡沫细胞中TC和TG水平显著升高,与模型组比较,3个化合物均可显著降低泡沫细胞中TC和TG水平。LPS诱导后模型组细胞内TNF-α和IL-1β大量分泌,与模型组比较,3个化合物均可显著抑制模型细胞TNF-α的分泌,葛根素和大豆苷元能显著抑制模型细胞IL-1β的分泌。结论葛根素、大豆苷和大豆苷元能明显抑制ox-LDL诱导的脂质沉积和LPS诱导的炎症因子分泌。

不同产地干、鲜粉葛HPLC指纹图谱及6种成分含量测定

目的:比较不同产地干、鲜粉葛中化学成分及对其中葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、染料木苷和大豆苷元6种异黄酮类成分的含量进行测定。方法:选用Symmetry C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-0.2%冰乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,紫外检测波长为250 nm。利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2.0版)”软件处理色谱数据,建立了粉葛指纹图谱,同时进行相似度评价。另外,采用HPLC对6种成分进行了含量测定。结果:建立了粉葛的指纹图谱,共标定了26个共有峰,指认了9种成分,分别是3′-羟基葛根素、葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素及芒柄花素。对其中6种指认的成分进行含量测定,发现各地葛根素含量最多。各地鲜品葛根素平均含量为4.48 mg/g,各产地含量排名前三依次是:文山>丽江>红河,各产地6种异黄酮总含量排名前三依次是:红河>文山>丽江;不同产地6种异黄酮总含量均是鲜品大于烘干粉葛。结论:不同产地粉葛干、鲜的化学成分较相似,但含量存在明显差异,且鲜品粉葛中6种异黄酮总含量高于干品,可为粉葛资源的相关开发利用提供有效的科学依据。

一种快速测定苦丁茶中苦丁茶皂苷A含量的方法

建立一种高效液相色谱法快速测定苦丁茶中苦丁茶皂苷A含量,采用Kromasil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水,梯度洗脱;流速为0.8 mL/min;检测波长226 nm;柱温30 ℃;进样量10 μL。结果表明,苦丁茶皂苷A在进样量0.102~3.06 μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为99.6%,RSD为0.86%(n=6)。该方法精密度高,简便快捷,具有良好的重复性和稳定性,可为评价苦丁茶质量提供参考。

亲水色谱-超高效液相-串联质谱法测定滇橄榄中水解氨基酸研究

目的:建立滇橄榄中的水解氨基酸的亲水色谱-超高效液相-串联质谱法测定方法。方法:采用盐酸水解滇橄榄中的17种氨基酸,DE-52纤维素除氯离子后,利用亲水色谱柱,结合超高效液相色谱-串联质谱仪,采用正离子模式,多反应监测(MRM),外标法定量,测定滇橄榄中17种水解氨基酸。结果:DE-52纤维素能够有效去除水解溶液中的氯离子,亲水色谱柱对于亮氨酸和异亮氨酸等具有较好的分离效果,在0.0003~2.0μg·mL^-1质量浓度范围内,17种氨基酸的线性关系较好,检出限为0.015~13.0 mg·kg^-1,回收率为73.8%~98.8%,RSD为3.25%~7.79%。结论:该方法重复性好、灵敏度高,适合滇橄榄中17种水解氨基酸的测定。

PBL教学法在天然药物化学实验教学中的应用

探索PBL教学法在《天然药物化学》实验课教学中的应用。将2013级药学1班和2班,共80人平均分为对照组和观察组。对照组采用传统讲授法进行教学,观察组应用PBL教学法进行实验课教学;比较两组学生所学知识的掌握情况,以问卷调查和实验方案设计评估教学效果。实施PBL法教学的学生和传统教学组学生相比综合能力考评存在差异,问卷调查结果显示大部分学生对PBL教学模式比较满意。实验教学中尝试采用PBL教学法,设计并具体实施,取得较为满意的教学效果,为以后在《天然药物化学》课程深入开展PBL教学法奠定基础。

余甘子的酚类成分及药理活性研究进展

余甘子为我国传统中药,药用历史悠久,具有清热凉血、生津止咳、消食健胃功效,在我国资源丰富。酚类成分为余甘子的主要有效成分,分为鞣质类(没食子酸鞣质类、逆没食子酸鞣质类)、酚酸类(没食子酸类衍生物、粘酸类衍生物)、黄酮类,其中鞣质以可水解鞣质为主。现代药理学研究表明,余甘子具有心血管保护、抗肿瘤、抗炎和抑制氧化应激、降血糖、抗菌和抗真菌、止泻与痉挛等活性,其中心血管保护作用尤为显著,在临床试验和药理实验均表现良好。现代药理学研究结果与传统药物余甘子的治疗功效相互印证。本文对余甘子酚类成分及药理活性研究进展进行综述,以期为进一步研究和开发余甘子资源提供参考。