微生物次级代谢产物多样性发掘方法

微生物次级代谢产物是微生物在生长过程中产生的非必需性代谢产物,其往往具有独特的生物活性。随着对微生物次级代谢产物多样性研究的不断深入开展,研究者逐渐发现在实验室的常规培养条件下微生物的代谢潜能不能完全被激发,从中可获得的天然产物结构类型远远少于其代谢潜能所决定的数量。近年来,随着基因组技术、分子生物学技术特别是合成生物学相关技术的发展,研究人员开发了如OSMAC、表观遗传、异源表达等多种方法,从多个角度多层次地发掘次级代谢产物多样性。这些方法有效激活潜在的生物合成基因簇、提高了微生物次级代谢产物多样性,加之与高通量筛选方法联合应用,能够显著改善了微生物活性天然产物的发现效率。本文综述了微生物次级代谢潜能的激活以及代谢产物高效筛选的方法和技术,为提高微生物次级代谢产物多样性发掘,加快先导化合物的发现提供参考。

乙型肝炎相关性肝硬化患者血清circMTO1表达水平及其与肝纤维化程度、预后的相关性

目的分析乙型肝炎相关性肝硬化患者血清环状RNA线粒体tRNA翻译优化因子1(circMTO1)表达水平及其与肝纤维化程度、预后的关系。方法纳入115例乙型肝炎相关性肝硬化患者(乙肝肝硬化组)及120例慢性乙型肝炎患者(慢乙肝组)作为研究对象。根据治疗后短期预后情况,将乙肝肝硬化组患者分为预后良好组(n=84)与预后不良组(n=31)。比较乙肝肝硬化组与慢乙肝组之间、预后良好组与预后不良组之间的血清circMTO1表达水平。分析乙肝肝硬化组血清circMTO1表达水平与肝纤维化分级的相关性。采用受试者工作特征曲线分析血清circMTO1表达水平对乙肝肝硬化组患者不良预后的预测价值。结果乙肝肝硬化组患者的血清circMTO1表达水平低于慢乙肝组,预后不良组患者的circMTO1表达水平低于预后良好组(P<0.05)。乙肝肝硬化组患者血清circMTO1表达水平与肝纤维化分级呈负相关(P<0.05)。血清circMTO1表达水平预测乙肝肝硬化组患者预后不良的曲线下面积为0.747,敏感度为77.40%,特异度为77.40%,最佳截断值为0.332。结论与未发生肝硬化的慢性乙型肝炎患者相比,乙型肝炎相关性肝硬化患者的血清circMTO1表达水平降低,且其与肝纤维化程度相关。circMTO1或可作为评估乙型肝炎相关性肝硬化患者预后的分子标志物。

鹅细小病毒VP3基因疫苗两种不同免疫方式对细胞免疫的影响

将构建的鹅细小病毒（GPV）VP3基因疫苗（pcDNA-GPV-VP3）转染鹅胚成纤维细胞（GEF），每隔12h检测VP3蛋白的表达情况，同时以不同剂量分别通过基因枪轰击和肌肉注射免疫28日龄健康雏鹅，于免疫后第3、7、14、21、28、35、49、63、77和105d采血，进行淋巴细胞增殖试验（MTT法）。结果，转染后第24h即可在GEF中检测到GPVVP3蛋白，第60h表达量达到高峰。试验组鹅外周血T淋巴细胞D490nm值在免疫后第35d达到最大。肌肉注射组和基因枪组免疫后第14～63d、第7～63d的D490nm值分别与PBS对照组差异板显著；肌肉注射组及基因枪组免疫后第21～49d的D490nm值显著高于弱毒疫苗对照组；肌肉注射组及基因枪组免疫后第14～63d的D490nm值板显著高于空质粒对照组。表明，基因枪轰击和肌肉注射pcDNA—GPV—VP3均能诱导雏鹅产生良好的细胞免疫应答。

基于粗糙集的可拓评判权值确定

为了避免传统的权值确定方法所带来的主观性影响,将粗糙集理论引入可拓权重系数的求解过程中,使权系数问题转化为属性重要度评价问题。通过建立决策表并进行知识约简,确定相应的评价指标,利用各评价指标的重要度计算出相应的权值。这种方法可以更好地避免主观因素对权值的影响,使权值更具有客观性。通过实际工程应用,将粗糙集理论确定的权值与关联函数求得的权值进行对比,证明了基于粗糙集的可拓权值是合理可靠的。

高质量发展背景下山东省城市生态化建设的时空格局演变及影响因素分析

城市生态化建设有助于推动城市可持续发展,同时也是满足高质量发展目标的客观要求。本文旨在将宏观的生态城市转化为落地性更强的城市生态化建设,以山东省16个地市为研究单元,基于创新、生态、文化、民生及空间5个维度16项指标构建城市生态化建设评价指标体系,运用熵值法、空间自相关、地理探测器等方法探讨山东省城市生态化建设的时空格局及其影响因素。结果表明:1)山东省城市生态化建设水平呈现西低东高的空间分异格局,城市生态化建设整体水平逐年提升;2)城市生态化建设的热点区域为省会、胶东两大经济圈,而鲁南经济圈则是冷点地区;3)影响山东省城市生态化建设水平的因素解释力由大到小依次为水资源利用效率>人均GDP>人均土地面积>文化产业占GDP比重>重化工业为主体的产业机构>土地利用效率,水资源利用效率和人均GDP与其他影响因子的交互作用最为明显。未来山东省城市生态化建设应该注重经济发展和资源的高效利用结合,优化产业结构提质增效,加强区域之间的交流合作,缩小区域差异建设高质量生态城市。

小鹅瘟病毒VP3基因疫苗的构建及其诱导小鼠和鹅中和抗体的初报

PCR 扩增小鹅瘟病毒(GPV)CHv 株 VP3基因并克隆入 pMD 18-T-Simple 载体,亚克隆正向插入到真核表达质粒 pcDNA3.1(+)CMV 启动子下游多克隆位点,经 PCR 和HindⅢ与 BamH Ⅰ双酶切鉴定表明成功构建了 GPV VP3基因疫苗(pcDNA3.1-GPV-VP3)。该疫苗以200μg/只肌注免疫 Balb/c 小鼠和鹅,同时分别设肌注 PBS 和 pcDNA3.1(+)作为对照,于免疫后第30、45、60、75、90、105天应用鸭胚原代成纤维细胞(DEF)进行微量中和试验检测小鼠和鹅血清抗100 TCID50 GPV 的抗体效价。结果表明,pcDNA3.1-GPV-VP3免疫小鼠第30天可检测到抗 GPV 的中和抗体,抗体效价缓慢上升至90天达到高峰(平均1:135.8)后下降,105天仍高于75天;免疫鹅的中和抗体效价呈现与小鼠类似的规律,第90天达到高峰(平均1:98.5)。因此,pcDNA3.1-GPV-VP3具有良好的免疫原性,肌注免疫小鼠和鹅后能够诱发产生抗 GPV 的中和抗体,有进一步开展临床研究和应用的前景。

小鹅瘟病毒VP3真核表达质粒与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的比较

【目的】比较小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)和弱毒疫苗免疫鹅体内的免疫应答,以期为进一步研究和阐明pcDNA-GPV-VP3免疫发生机理、免疫持续期等提供基础数据。【方法】将pcDNA-GPV-VP3和小鹅瘟弱毒疫苗分别免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学方法检测免疫鹅体内GPV抗原的分布,用淋巴细胞增殖实验和间接ELISA分别检测免疫鹅的细胞免疫水平和血清抗体滴度,比较GPV基因疫苗与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的能力。【结果】①弱毒疫苗组于免疫鹅的心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、大脑及注射部位肌肉均中检测到GPV抗原;基因疫苗组于免疫鹅的心、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠及注射部位肌肉中检测到GPV抗原。②弱毒疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞14 d后对ConA的反应开始增强,35 d达到最高值后下降;基因疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞OD值先下降,14 d后开始上升并高于空白质粒对照鹅和PBS对照鹅,35 d时达最大值,以后又逐渐下降,第21-63天极显著(P<0.01)高于PBS对照鹅和空白质粒对照鹅,第21-63天时极显著(P<0.01)高于弱毒疫苗免疫鹅。③弱毒疫苗免疫鹅血清抗体第3天开始高于PBS对照鹅,第28天达到最大值后逐渐下降;基因疫苗免疫鹅血清体从第14天开始高于PBS对照组,第28天达最大值,第21-217天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于PBS和空白质粒对照鹅;基因疫苗免疫鹅血清抗体除第28天极显著(P<0.01)高于GPV弱毒疫苗免疫鹅外,其余时间与弱毒疫苗免疫鹅差异不显著。【结论】pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌和各肠段中表达并能够诱导鹅体产生良好的细胞免疫和体液免疫,基因疫苗诱导鹅体产生免疫应答的能力优于弱毒疫苗,结果为阐述pcDNA-GPV-VP3的免疫机制和临床应用提供了数据资料。

基因枪轰击不同剂量小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在雏鹅体内的动态分布

本文开展了检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法的建立和基因枪轰击不同剂量(1、3和6μg)GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)在30日龄四川白鹅体内(心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、血液、脑及注射部位皮肤)分布规律的研究。结果表明:①建立的FQ-PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,核酸模板数与FQ-PCR测定的Ct值相关系数达到0.999,具有很好的直线相关性;②pcDNA-GPV-VP3各剂量免疫雏鹅1 h即可在各组织中检测到,其中注射部位含量最高,肝、肾、淋巴器官(脾、法氏囊、胸腺、哈氏腺)含量较高;③到免疫后217 d时,1μg组免疫雏鹅各个组织器官内仍检测到pcDNA-GPV-VP3的存在,但多数组织器官中的含量比1 h时约少了4个数量级,其中免疫部位减少了7个数量级;④血液中pcDNA-GPV-VP3的含量较少,且免疫后1 h^217 d各时间点的差异不显著(P≥0.05);⑤不同剂量pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅各组织中的含量呈现的总体规律为6μg组>3μg组>1μg组,但差异不显著(P≥0.05)。因此,FQ-PCR是定量检测pcDNA-GPV-VP3在免疫雏鹅体内含量的可靠方法,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后1 h时可分布至雏鹅体内各组织器官中并持续存在217 d以上。

长春季冻区路基土微观孔隙特征的定量评价

路基冻害一直是困扰东北季冻区道路建设的一个重要问题。长春冬季天气寒冷,在温度梯度作用下路基土中水分产生迁移和聚集,引起路基冻胀。春季路基解冻,集聚的冰晶体融化,路基土处于饱和或过饱和状态,承载力极低,在交通车辆作用下发生路面鼓包、弹簧、断裂和翻浆冒泡等现象,给交通运输和经济建设带来极大的危害。孔隙是水分迁移的主要通道,是影响路基冻胀主要因素之一,其特征决定土体的冻胀敏感性。本文利用WD-5配置联机图象处理系统的电子显微镜,通过图像定量分析系统,对长春季冻区路基土的微观孔隙作了定量评价。经过分析得出:3个土样孔隙直径均是小于5μm的占主导地位,都具备冻胀条件;试样水平和垂直两个方向的孔隙分布较均匀,孔隙为辐射状或网状结构,多为扁圆和等轴形状;孔隙形态分维数分析认为,分维数高,大孔隙含量多,孔隙分布比较简单,在研究范围内,有利于水分迁移,冻胀性较强。

鹅细小病毒VP3基因疫苗与弱毒疫苗诱导小鼠免疫应答的比较

为阐明小鹅瘟基因疫苗与弱毒疫苗诱导细胞免疫和体液免疫的不同机理,将小鹅瘟VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别按6μg/只基因枪轰击和100μg/只肌肉注射,小鹅瘟弱毒疫苗按100μL/只肌肉注射免疫BALB/c小鼠,同时以pcDNA3.1(+)和生理盐水为对照。于免疫后第3、7、14、21、28、35、49、63、77、105d采集抗凝血,用淋巴细胞转化试验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)分别检测小鼠外周血T淋巴细胞的转化效果和CD4+、CD8+ T淋巴细胞的动态变化,另外,在以上10个时间段以及免疫后第133、161、189、217d分别采集凝血,用间接ELISA检测小鼠特异性IgG抗体水平。结果显示,pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠的外周血T淋巴细胞对ConA刺激的反应,诱导的CD4+、CD8+T淋巴细胞免疫功能和血清IgG抗体水平在不同时间段都显著或极显著高于弱毒疫苗免疫组。3个免疫组小鼠都能诱导产生细胞免疫和体液免疫应答,并且基因疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫和体液免疫应答比弱毒疫苗免疫组强。

不同剂量小鹅瘟病毒VP3基因疫苗肌肉注射诱导小鼠细胞免疫

将小鹅瘟(Gosling plagne,GP)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别按每只50、100、200μg肌肉注射免疫BALB/c小鼠,以pcDNA3.1(+)和生理盐水为对照,于免疫后7、14、21、28、35、63、105d采血用淋巴细胞转化实验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)分别检测小鼠外周血T淋巴细胞转化效果和CD4+、CD8+T淋巴细胞动态变化。结果表明,pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠能够诱导机体产生良好的细胞免疫应答。50、100μg pcDNA-GPV-VP3免疫后小鼠外周血T淋巴细胞对ConA刺激的反应显著或极显著高于200μg组、空载体和生理盐水对照组,且以100μg组最优,而200μg组的转化效果比空载体组差;100μg pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠后所诱导的CD4+T淋巴细胞免疫功能最强,50μg组次之;50μg pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠后所诱导的CD8+T淋巴细胞免疫功能最强,100μg组次之。

不同剂量小鹅瘟VP3基因疫苗在雏鹅体内的表达时相和分布规律

将小鹅瘟基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200、100和50μg肌肉注射免疫30日龄四川白鹅,以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,于免疫接种后第12h、1d、3d、7d、21d、35d、63d和105d采集各组织器官,用免疫组织化学方法检测pcDNA-GPV-VP3在雏鹅各组织器官中的表达和分布。结果显示,各剂量免疫组第1d在免疫部位肌肉,第3d在心肌中均能检测到pcDNA-GPV-VP3的表达产物,第7d的表达量最大,表达可持续至第63d;第3d时各剂量免疫组均能在各肠段的肠腺、肠绒毛的杯状细胞和肌细胞中检测到pcDNA-GPV-VP3的表达产物,第7d的表达量最多,表达可持续至第35d;肝、肺、肾、脾、胰腺、脑、腔上囊、胸腺中未见表达;不同剂量的pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后各组织器官中表达产物的量和持续时间的总体规律为200μg>100μg>50μg,但非等比例递增。研究证实,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后能在免疫部位肌肉、心肌、小肠肠腺和肠绒毛的杯状细胞、肌细胞内表达。

季冻区土冻胀量影响因素的灰关联度分析

正交试验设计是安排多因素试验的一种科学方法,灰色关联度法可以分析各因素各水平对正交试验结果影响的主次关系.本文用灰关联度分析法对室内正交冻胀试验结果进行分析,得出长春季冻区土的压实度,含水量及冻结温度对冻胀量影响大小的排序,结果表明,土的含水量与冻胀量的关联度最大,与压实度的关联度次之,与温度的关联度最小。

雨生红球藻软胶囊对小鼠的增强免疫力功能实验研究

通过动物试验研究雨生红球藻软胶囊的增强免疫力功能。设置4个试验组,每组设167mg/kg·BW、333mg/kg·BW、500mg/kg·BW 3个剂量组和食用植物油阴性对照组,每天按20mL/kg·BW经口灌胃1次,连续给予30d,分别进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、NK细胞活性测定及淋巴细胞转化实验、抗体生成细胞实验、血清溶血素测定和迟发性变态反应实验、小鼠碳廓清实验。结果表明,三个剂量组动物的足跖肿胀度与阴性对照组比较均有显著性差异(P<0.05、P<0.01、P<0.01),小鼠细胞免疫功能试验结果阳性;三个剂量组动物的溶血空斑数与阴性对照组比较,中、高剂量组有显著性差异(P<0.05、P<0.05),三个剂量组动物的抗体积数与阴性对照组比较均有显著性差异(P<0.01、P<0.01、P<0.01),小鼠体液免疫功能试验结果阳性。可以判定雨生红球藻软胶囊具有增强免疫力功能作用。

基于格网尺度的新城区可持续空间形态要素测度研究——以宁波鄞州新城区为例

基于城市形态学,提出良好的街道可达性、适宜的建设强度与建筑形态、足够的功能混合度是促进城市可持续发展的空间形态基础,以宁波市鄞州新城区为例,通过空间句法、空间矩阵、混合功能指标测度其城市空间形态要素,结果表明:1)鄞州新城区街道网络整体协同能力较强,建筑形态以中层板式及围合式、低层围合式、高层板式为主,单一功能用地占主导地位,完全混合用地仅占1.73%;2)鄞州新城区空间活力中值区占比最高,通过密度-形态关联性分析,其在多层高覆盖率的形态区间被屏蔽;3)功能混合、可达性、建筑强度及形态之间重合度较高,高容积率(>2.2)单元格中有64.54%聚集在可达性高值区,双功能、多功能混合单元有50.25%、85.71%聚集在可达性高值区,混合单元有公共设施用地时混合功能-可达性关联的效应更明显。

基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗诱导鹅体内体液免疫的机制

将小鹅瘟病毒VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只1μg、3μg和6μg的基因枪轰击免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在鹅体内各组织器官表达情况;用间接ELISA检测免疫鹅血清中GPV抗体滴度。结果:①各剂量免疫组1d时能在免疫部位皮肤,3d时能在心脏/十二指肠/空肠/盲肠/肝脏,7d时在回肠/直肠检测到pcDNA-GPV-VP3的表达;7d表达最多;表达可持续至35～63d;表达产物的数量和表达持续时间总体规律为6μg组>3μg组>1μg组。②免疫后第7d血清抗体开始升高,21d达到最大值,免疫后第14～217d极显著(P<0.01)高于PBS和空白质粒对照;体液免疫效果存在一定的剂量依赖。研究表明,pcDNA-GPV-VP3基因枪轰击免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌、肝脏和各肠段中表达并能够诱导雏鹅产生良好的体液免疫。

FQ-PCR检测肌注小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在雏鹅体内的动态分布

将30日龄四川白鹅分别肌肉注射接种50μg、100μg和200μg的GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3),以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,于免疫接种后1h、12h、1d、3d、7d、21d、35d、63d、105d和217d采集全血以及各组织器官,用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测pcDNA-GPV-VP3在雏鹅体内的动态分布。结果表明:①pcDNA-GPV-VP3各剂量免疫雏鹅1h即可在各组织中被检测到,其中注射部位含量最高,肝、淋巴器官(脾、法氏囊、胸腺、哈氏腺)含量较高;②到217d时,50μg组免疫雏鹅各个组织器官内仍检测到pcDNA-GPV-VP3的存在,但多数组织器官中的含量比1h时约少了103～104;③血液中pcDNA-GPV-VP3的含量较少,且1h～217d各时间点的差异不显著(P≥0.05);④不同剂量pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅各组织中的含量呈现的总体规律为200μg组>100μg组>50μg组,但差异不显著(P≥0.05)。因此,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后1h时可分布至雏鹅体内各组织器官中并持续存在217d以上。

百草枯农药对小鼠血液中血细胞参数的影响

目的观察百草枯农药急性经口染毒对小鼠的毒性反应和血细胞参数的影响。方法 SPF级昆明种小鼠60只,随机分为百草枯农药染毒6 h、1 d、3 d和7 d和对照组共5组,百草枯农药60 mg/kg.BW一次经口灌胃染毒,对照组使用蒸馏水灌胃。观察动物的体重和死亡数等中毒表现,并测定血液中14项血细胞参数。结果百草枯农药染毒动物体重下降、活动减少、毛发蓬松、呼吸困难,死亡率为16.67%。百草枯农药染毒3 d组与对照组比较,雌鼠的淋巴细胞百分比(LYMPH%)降低(F=2.96,P<0.05),单核细胞百分比(MONO%)增高(F=3.83,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。结论百草枯农药60 mg/kg经口染毒对小鼠产生明显的毒性反应症状,染毒后3 d血液中淋巴细胞百分比降低,单核细胞百分比增高。

HY公司薪酬管理存在的问题及对策研究

国有企业作为我国经济社会的支柱,在我国经济发展中占有重要地位。目前,国有企业内部管理仍存在一些问题,尤其是在薪酬管理方面,严重影响企业的有序良好发展。HY公司作为山西大型国有企业,肩负着国有资产保值增值的重要历史使命。薪酬管理是现代企业人力资源管理的核心,科学合理的薪酬激励制度能够吸引人才和激励企业员工,从而提高企业的生产率。本文旨在深入分析HY公司其现行薪酬管理存在的问题,找准问题核心,提出解决对策,推动HY公司薪酬体系优化。

抗霉素类化合物的研究进展

本文主要根据抗霉素类化合物的来源、结构特征、生物活性、生物合成途径及化学合成研究进展进行综述。