坏死细胞释放IL-1对血管平滑肌细胞增殖及炎性反应的影响

目的研究坏死血管平滑肌细胞对周围正常细胞增殖及炎性因子分泌的影响,并探讨其可能的作用机制。方法无血清低糖低氧条件下培养细胞,建立细胞坏死模型,收集坏死细胞培养上清液,用于干预正常血管平滑肌细胞。实验设坏死上清组、IL-1组、坏死上清+IL-1RA组和对照组。MTT法检测各组细胞增殖情况;RT-PCR检测各组MCP-1、IL-6和IL-8 mRNA的表达;ELISA检测各组MCP-1、IL-6和IL-8的分泌;Western blot检测各组NF-kB的激活情况。结果NCS组和IL-1组细胞增殖能力均显著高于对照组(P<0.01),NCS+IL-1β组细胞增殖能力显著低于NCS组和IL-1组(P<0.01);NCS组和IL-1β组MCP-1、IL-6、IL-8 mRNA的表达均显著高于对照组(P<0.05),NCS+IL-1RA组MCP-1、IL-6、IL-8 mRNA的表达均显著低于NCS组和IL-1组(P<0.05);NCS组和IL-1β组的MCP-1、IL-6及IL-8蛋白的分泌均显著高于对照组(P<0.05),NCS+IL-1RA组MCP-1、IL-6和IL-8蛋白的分泌显著低于NCS组及IL-1组(P<0.05);NCS组和IL-1组NF-kB的活性显著高于对照组(P<0.05),与NCS组和IL-1组相比NCS+IL-1RA组NF-kB的活性显著降低(P<0.05)。结论坏死血管平滑肌细胞能够促进正常细胞的增殖,诱导NF-kB的激活以及炎性因子的释放,并且这种促进作用可能与IL-1的大量释放有关。

坏死细胞释放IL-1对血管平滑肌细胞氧化应激的影响

目的研究坏死细胞对正常血管平滑肌细胞氧化应激的影响及其主要作用因子。方法体外培养的血管平滑肌细胞以无糖低氧条件诱导细胞坏死,收集坏死细胞培养上清液。体外培养且生长正常的血管平滑肌细胞根据不同的干预方式分为对照组(不予任何干预)、坏死上清组(NCS组,以坏死细胞培养上清液进行干预)和NCS+白介素1受体拮抗剂(IL-1RA)组(NCS+IL-1RA组)。对各组氧化应激指标细胞活性氧(ROS)生成以及培养细胞上清液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性进行检测;RT-PCR和Western blotting检测各组细胞内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和氧化酶亚基p47phox mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,NCS组ROS生成和MDA含量明显增多(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05);与NCS组比较,NCS+IL-1RA组ROS生成和MDA含量明显减少(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05)。RT-PCR和Western blotting检测结果显示:与对照组比较,NCS组和NCS+IL-1RA组细胞中iNOS、eNOS和p47phoxmRNA和蛋白的表达均显著上调(P<0.05),且NCS+IL-1RA组较NCS组显著下调(P<0.05)。结论坏死细胞可诱导正常血管平滑肌细胞的氧化应激反应,抑制IL-1信号通路能减轻由坏死细胞引发的氧化应激反应。

大黄素对IL-1β诱导血管平滑肌细胞迁移及VCAM-1、MCP-1表达的影响

目的探讨大黄素对IL-1β诱导下的血管平滑肌细胞迁移以及VCAM-1、MCP-1表达的影响。方法将10ng／ml的IL-1β作用于血管平滑肌细胞，加入10μmol／L大黄素进行干预，实验设置对照组、IL-1β组、IL-1β＋大黄素组。Transwell法检测各组细胞的迁移能力；RT—PCR和ELISA检测各组细胞MMP-2、MMP-9的表达；RT-PCR和Western检测各组细胞VCAM-1和MCP-1的表达。结果IL-1β组细胞迁移能力显著高于对照组（P〈0．05），IL-1β＋大黄素组细胞迁移能力显著低于IL-1β组（P〈0．05）；IL-1β组MMP-2、MMP-9、VCAM-1、MCP-1mRNA以及蛋白的表达均显著高于对照组（P〈0．05），与IL-1β组相比IL-1β＋大黄素组MMP-2、MMP-9、VCAM-1、MCP-1mRNA以及蛋白的表达均显著降低（P〈0．05）。结论大黄素能够有效抑制IL-1β诱导的血管平滑肌细胞迁移并降低其VCAM-1、MCP-1的表达。