广灵大尾羊HSD17B12基因克隆、生物信息学分析及表达规律的研究

本研究旨在克隆广灵大尾羊HSD17B12基因CDS,预测HSD17B12蛋白及其基因启动子区的结构和功能特性,探究HSD17B12基因在前体脂肪细胞分化过程中的表达。采用PCR法克隆HSD17B12基因CDS全长序列;生物信息学软件分析HSD17B12蛋白的理化性质、结构、功能位点和结构域,并进行亚细胞定位、序列相似性分析及其基因核心启动子区和转录因子潜在结合位点的预测;采用实时荧光定量PCR检测HSD17B12基因以及部分转录因子在前体脂肪细胞分化过程中的相对表达量。结果显示,广灵大尾羊HSD17B12基因CDS全长939bp,编码312个氨基酸;HSD17B12蛋白主要定位于内质网,有3个跨膜结构域和33个磷酸位点,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,其氨基酸序列与山羊相似性最高;HSD17B12基因有5个潜在的核心启动子区,存在SP1、ATF2和CREB1等10个转录因子的结合位点;在前体脂肪细胞分化过程中,SP1、ATF2和HSD17B12基因的mRNA表达均呈上升趋势,说明ATF2和SP1可能正向调控HSD17B12基因的表达,促进脂质沉积。本研究为进一步揭示HSD17B12基因在绵羊成脂分化过程中的调控机制奠定了基础。

miR-128-1-5p对绵羊前体脂肪细胞增殖和分化调节作用的研究

旨在研究miR-128-1-5p对绵羊前体脂肪细胞增殖与分化的调节作用。本研究经理论预测和试验研究验证miR-128-1-5p的靶基因;过表达miR-128-1-5p后,用qPCR检测增殖标志基因的表达,CCK-8和EdU检测细胞增殖情况;用qPCR和Western blotting检测miR-128-1-5p和其靶基因在前体脂肪细胞分化中的表达趋势;通过过表达或抑制miR-128-1-5p研究其对绵羊前体脂肪细胞分化的调节机制;用油红O染色检测成脂能力。结果表明,KLF2是miR-128-1-5p的靶基因。前体脂肪细胞增殖过程中,过表达miR-128-1-5p后,增殖标志基因的表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞活力显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),新生细胞数显著减少(P<0.05)。前体脂肪细胞分化过程中,miR-128-1-5p与KLF2的表达呈负相关;过表达miR-128-1-5p极显著下调了KLF2 mRNA的表达量(P<0.01),显著下调了KLF2蛋白的表达量(P<0.05),显著或极显著上调了分化标志基因mRNA的表达(P<0.05或P<0.01),产生更多脂滴;抑制miR-128-1-5p则结果相反。综上所述,miR-128-1-5p与KLF2存在结合位点。miR-128-1-5p抑制绵羊前体脂肪细胞的增殖,在分化过程中通过靶向抑制KLF2的表达,促进前体脂肪细胞分化和脂滴沉积。

广灵大尾羊FITM2基因扩增、序列及表达特性分析

本实验旨在克隆广灵大尾羊FITM2基因并进行序列分析,探究FITM2基因在不同组织中的表达规律,分析FITM2基因启动子序列及可能与之结合的转录因子,并揭示在脂肪细胞分化过程中的表达规律。PCR扩增并利用生物信息学软件分析FITM2基因CDS区,预测编码蛋白特性;预测FITM2基因启动子及可能与之结合的转录因子;采用qPCR检测FITM2基因和部分转录因子在不同组织或前体脂肪细胞分化过程中的表达模式。结果预测广灵大尾羊FITM2蛋白主要定位于内质网,有6个跨膜结构域,不存在信号肽,有26个磷酸化位点;二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角4种结构组成;预测出FITM2基因启动子上有3个核心区域;FITM2基因在脂肪组织中的表达量高于其他组织,在前体脂肪细胞分化过程中整体呈上升趋势;转录因子STAT5A、YY1和USF2在分化过程中可能正调控FITM2。本研究为进一步探究广灵大尾羊FITM2基因在脂肪沉积过程中的作用提供理论依据。

广灵大尾羊TP53INP2基因的克隆、生物信息学分析及其在不同脂肪组织中的表达研究

本研究旨在克隆绵羊TP53INP2基因CDS区,分析基因mRNA序列及其编码蛋白的性质,并检测该基因在5种脂肪组织中的表达情况。选择广灵大尾羊为研究对象,PCR扩增TP53INP2基因的CDS区,生物信息学软件分析其性质,实时荧光定量PCR检测脂肪组织表达量。结果显示:绵羊TP53INP2基因CDS全长为675 bp,可编码224个氨基酸,mRNA序列与山羊相似性最高。TP53INP2蛋白为不稳定亲水性蛋白,主要分布在细胞核中,有17个潜在的磷酸化位点和7个O-糖基化位点,无N-糖基化位点、跨膜区结构和信号肽。二级结构和三级结构预测发现,TP53INP2蛋白主要由α-螺旋和无规则卷曲构成。TP53INP2基因在广灵大尾羊皮下脂肪组织中表达量最高,腹膜后脂肪表达量最低,整体表现为皮下脂肪表达量高于内脏脂肪,提示该基因有促进脂肪沉积的作用。本研究结果可为进一步研究TP53INP2基因参与绵羊脂质代谢过程和改善绵羊肉品质奠定基础。

晋中地区鸡致病性大肠杆菌分离株的鉴定及其16S rDNA序列的同源性分析

为了鉴定晋中地区鸡致病性大肠杆菌,利用传统细菌鉴定方法及16S rDNA序列分析,对分离自晋中地区养殖场送检的30只病死鸡肝中的疑似大肠杆菌菌株进行鉴定及遗传进化分析。结果表明:分离出8株致病性不同的大肠杆菌;鉴定出O78、O2、O11共3种血清型;8株菌均为多药耐药菌,其中对5种及5种以上抗菌药物耐药的菌株达到总分离菌株的87.5%;将8株菌株的16S rDNA基因序列与GenBank中登录的大肠杆菌参考株的16S rDNA基因序列进行比对,同源率均达到99%。经MEGA6.0软件分析后,其位于不同的分支上。本研究结果为进一步研究致病性大肠杆菌的耐药性和对晋中地区大肠杆菌病的有效防治奠定了一定基础。