戊二醛交联时间对人脱细胞真皮基质生物学性质的影响

目的:探讨戊二醛交联时间对人脱细胞真皮基质(ADM)生物学性质的影响。方法:用低浓度戊二醛交联高渗盐-NaOH消蚀法制备的人ADM,根据交联时间的不同分为交联10、15、20、30min组,大体观察各组的物理性状;免疫组织化学检测各组Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达;MTT细胞毒性实验评价4组ADM的细胞毒性反应;将NIH3T3细胞接种于各组ADM上,比较24h细胞贴壁数并观察细胞生长情况;将人成纤维细胞与交联10、15min组ADM体外复合培养,观察细胞生长和增殖情况。结果:随着交联时间延长,ADM的韧性逐渐增加;各组ADMⅠ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达阳性;ADM细胞毒性反应交联10和15min组0～1级、20min组1～2级、30min组1～3级;交联10、15min组分别与20min组24h3T3细胞贴壁数比较有统计学意义;而交联10、15min两组间无统计学意义;3T3细胞能够在交联10、15min组ADM表面贴附、增殖;免疫荧光法显示鼠抗人波形蛋白抗体呈阳性,有较多的人成纤维细胞黏附于交联10和15min组ADM上,生长和增殖良好。结论:戊二醛化学交联10～15min的人ADM蕴涵丰富的生物信息,细胞毒性小,生物相容性好,是一种很好的生物支架材料。

优选人脱细胞真皮基质及荧光标记示踪与其复合培养的成纤维细胞

目的优选人脱细胞真皮基质（ADM）并评价其生物学特性。方法通过高渗盐-NaOH消蚀法（A组）、高渗盐-十二烷基硫酸钠（SDS）法（B组）和DispaseⅡ-Triton X-100法（C组）制作人脱细胞真皮基质,以特殊染色、免疫组织化学观察3种方法制作ADM的组成成分;四甲基偶氮唑盐（MTT）细胞毒性实验评价3种方法制作ADM的细胞毒性反应;细胞培养法评价其细胞相容性,优选ADM。重组腺病毒绿色荧光表达载体（Ad-GFP）转染的人成纤维细胞（FB）接种在优选ADM上,荧光显微镜观察FB的生长情况。结果3种方法均能够保留胶原纤维、弹性纤维,A组和C组能够完全脱去细胞,B组未能完全脱去细胞;A组和B组制备ADM细胞毒性反应小于1级;C组制备ADM细胞毒性反应大于1级。A组与B组24h 3T3细胞贴壁数有统计学意义（P＆lt;0.05）,3T3细胞能够在A组ADM表面贴附;优选A组ADM。转染Ad-GFP的FB在优选ADM上生长和增殖良好。结论高渗盐-NaOH消蚀法制备的ADM蕴涵丰富的生物信息,细胞毒性小,生物相容性好,是一种很好的生物支架材料。

戊二醛交联优化脱细胞真皮基质的生物相容性

目的通过体内包埋实验将优化的脱细胞真皮基质(ADM)与成纤维细胞(FB)体外培养,探讨是否具有生物相容性。方法用高渗盐-NaOH消蚀法制备得到大鼠ADM,用低浓度戊二醛交联ADM,未交联A组(0min)作为对照,根据交联时间不同分成B组(10min)、C组(15min)和D组(30min)。通过大鼠体内包埋实验对比各组ADM物理性状、包埋后面积、炎性反应、浸润生长的FB和毛细血管数目,选择出最佳交联时间。制备优化的人ADM,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测ADM的细胞毒性;人FB与ADM复合培养检测其细胞相容性,用免疫组织化学和透射电镜观察FB的生长和增殖情况;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测FBⅠ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果大鼠体内包埋实验显示,4周取材,未交联组不易触及移植物,植入物和周围的软组织基本融合难以分开;未交联组ADM的面积较包埋前缩小;未交联组ADM内有少量炎性细胞,胶原纤维嗜酸性弱;交联组ADM内未见炎性细胞,浸润生长的FB数目、血管数目与戊二醛交联时间的单因素相关性分析呈负相关;最佳的交联时间为10min。体外培养显示,优化ADM的细胞毒性反应0～1级;人FB能够很好地在优化的ADM表面贴附、生长和增殖;ADM内FBⅠ型、Ⅲ型前胶原mRNA的表达降低。结论高渗盐-NaOH消蚀法制备ADM,工艺简单、成本低、生物相容性好,可以提供细胞生长的空间,并可在细胞间转导通讯和信号,下调细胞外基质代谢系统。

成纤维细胞与脱细胞真皮基质复合培养的实验研究

目的本研究用酶消化法体外培养高纯度的人皮肤成纤维细胞(FB),将FB与高渗盐-氢氧化钠(NaCl-NaOH)消蚀法制作的人脱细胞真皮基质(ADM)复合培养并评价其生物相容性。方法中性蛋白酶-Ⅰ型胶原酶消化法体外培养人FB,通过组织学方法鉴定其纯度。携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染人FB,组织学方法观察荧光蛋白的表达情况,流式细胞仪检测转染比例。将FB和Ad-GFP转染的FB接种在NaCL-NaOH消蚀法制作的人ADM上,组织学方法观察细胞的生长和增殖情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ADM内FB角质细胞生长因子(KGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的蛋白表达。结果体外培养的人FB形态为细长梭形,有较长的突起和明显的核分裂相,波形蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达均为阳性。Ad-GFP转染FB的比例为72%。复合培养显示人FB不仅黏附在ADM表面,还可以较为均匀地在ADM天然孔隙中生长和增殖;与正常FB比较,ADM内FB KGF、bFGF mRNA的蛋白表达无明显变化。结论中性蛋白酶-Ⅰ型胶原酶消化法体外可以培养出高纯度的人FB。Ad-GFP转染FB获得成功。NaCL-NaOH消蚀法制作的ADM蕴含丰富的生物信息,FB作为种子细胞与其生物相容性好,为进一步开展皮肤创伤修复的实验研究奠定了基础。

ADM调控细胞生长的生物学性质及修复皮肤缺损的实验研究

目的:探讨高渗盐-NaOH消蚀法制备脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)调控成纤维细胞(fibroblast,FB)生长的生物学性质并进行皮肤缺损修复的动物实验。方法:用高渗盐-NaOH消蚀法制备得到人ADM,将人FB与ADM体外复合培养,免疫组化和透射电镜鉴定细胞生长和增殖情况;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测FBⅠ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。同样方法制备大鼠ADM,观察其结构;制备SD大鼠全厚皮肤缺损的模型,将ADM移植到创面进行修复。术后2周、4周、6周对修复创面进行大体形态学和组织学观察。结果:人FB可以在ADM上贴附、生长和增殖;与培养板上的人FB相比,ADM内FBⅠ型、Ⅲ型前胶原mRNA的表达降低。鼠ADM三维结构完整,排列整齐;移植后6周,皮肤表面光滑韧性好;表皮、真皮交界处乳头状结构出现,表皮细胞分化良好,约7～8层细胞,真皮内胶原纤维排列整齐。结论:ADM具有良好的调控细胞生长的生物学特性,修复皮肤创伤效果好。

用于修复组织缺损的人真皮成纤维细胞体外培养

目的 体外培养人真皮成纤维细胞。方法 利用胶原酶消化法培养人真皮成纤维细胞 ,然后通过细胞形态学、免疫组织化学等方法进行分析鉴定。结果 培养的细胞为长梭形 ,并表达成纤维细胞波形蛋白、Ⅰ型胶原蛋白。结论 培养出高纯度的人真皮成纤维细胞 。

构建独立学院形态学教学新模式的初探——以病理学课程示例

以数字切片为切入点,结合病理数字资源平台、BB教学平台和翰博尔远程教学系统,通过数字网络互动+数字切片为载体改革独立学院病理学教学手段和方法,然后推广到组织与胚胎学、病原生物学、口腔组织病理学等课程,提高学生自主学习能力,旨在培养学生独立思考、分析和解决问题的能力。

人成纤维细胞饲养层促进人角朊细胞生长

目的探讨人成纤维细胞(HFB)是否可作为饲养层支持人角朊细胞(KC)的生长。方法分离培养人真皮FB,用丝裂霉素C处理制成饲养层,应用RT-PCR、免疫细胞化学染色方法检测Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白的表达;在FB饲养层上接种人KC,观察其促进KC贴壁、生长、移行及分化的作用;并设置NIH3T3细胞饲养层为对照组,在其上接种人KC,观察KC贴壁数和膜片完全融合时间。结果FB饲养层Ⅰ型前胶原mRNA的表达有所增加(P<0.05)、Ⅲ型前胶原mRNA的表达无明显变化,抗Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白抗体阳性;以适宜密度接种的成纤维细胞饲养层,KC贴壁、生长和分化良好;二种饲养层KC贴壁数和膜片完全融合时间无差异。结论人真皮FB饲养层能够分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原,促进人KC生长并形成复层细胞。

流动加速腐蚀对电站3~#高加管束影响的综述及换热管材质对FAC影响的分析

分析了流动加速腐蚀(FAC)现象对火电厂3~#高加换热管束的影响,主要通过研究FAC的腐蚀机理及对火电厂实际运行后高加管束易发生泄漏位置的分析,最终确定管束中Cr含量高于1%时,可将FAC对管束的影响降到最低。

高中数学解题反思能力的培养及研究

本文着手于反思性学习的概念及其重要意义,结合我国现阶段高中数学课堂教学中存在的问题进行分析,总结出高中数学解题反思能力培养的具体措施,为我国高中数学课堂教学提供可行性参考。

老年慢性支气管炎、肺气肿、肺源性心脏病患者并发低钾、低钠与低氯血症25例分析

1 临床资料 本组25例老年慢性支气管炎、肺气肿、肺源性心脏病患者.男17例,女8例;年龄60～76岁,平均64岁;病史均30年以上;心功能Ⅲ、Ⅳ级,无意识障碍.入院后血电解质:钾、钠、氯均低于正常,二氧化碳结合力轻-中度升高.血气分析:氧分压降低,二氧化碳分压轻-中度升高.

一种新型无细胞真皮基质的研制

目的:研制一种新型的无细胞真皮基质。方法:用高渗盐除去异体皮肤的表皮细胞,经戊二醛交联后以低浓度NaOH消蚀以除去真皮中的细胞成分,得到无细胞真皮基质。结果:皮肤中所有细胞成分都被消除,胶原纤维稍松散,结构完整,排列正常。结论:经高渗盐-NaOH消蚀法能完全去除皮肤中的细胞成分而不损伤胶原纤维的三维结构,制备过程简单,具有很大的临床应用价值。

病理学教学新模式刍议

随着信息技术的日新月异,传统的病理学教学已不适应现代化教学手段。我们通过优化教学结构、改革实验教学方法,提出数字化时代病理学教学新模式:在显微数码互动系统基础上,制备数字切片库,构建数字资源平台,通过BB教学平台和远程教学系统,将教学活动延伸到课外,旨在促进学生主动参与、探索性和创造性的学习。

麝香保心丸对一次性力竭运动大鼠心肌损伤标记物和C反应蛋白的影响

目的探讨麝香保心丸对一次性力竭运动大鼠心肌损伤标记物和C反应蛋白的影响。方法选择雄性Wistar大鼠52只,随机分成实验组和对照组,每组26只。两组大鼠每天自由进食饮水相同,实验组大鼠每天麝香保心丸2粒(每粒22.5 mg)分2次灌胃,共两周。两组均接受力竭游泳运动,制成力竭运动动物模型,分别测定和比较两组大鼠血清和心肌组织肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白T(Tn T)、B型脑钠肽(BNP)和C反应蛋白(CRP)水平。结果大鼠平均力竭运动游泳时间实验组较对照组明显延长(P<0.01)。实验组血清和心肌组织CK、CK-MB、Tn T、BNP和CRP水平均明显低于对照组(P<0.05)。结论麝香保心丸可显著降低力竭运动大鼠血清和心肌中CK、CK-MB、Tn T、BNP和CRP水平,能够减轻力竭运动后心肌损伤。

人体解剖学交互式彩色电子图库在Authorware下的实现

人体解剖学是一门形态学课程，解剖图片在教学过程有着不可替代的作用，是解剖学教学的灵魂。目前，电子版的解剖图片多以3种形式存在：第1种是解剖图片＋标注线＋结构名称，和印刷版图谱类似，供学生参考使用；第2种是单纯的解剖图片，未加标注线和结构名称，多用于制作PPT课件；第3种较前2种少见，具有交互性，当鼠标移动到解剖图片的相应位置时，显示该部位的解剖结构名称，增强了趣味性，但图片的重点结构未能突出。