利用双向电泳技术分离乳酸乳球菌N8菌体蛋白

乳酸乳球菌N8是工业上生产细菌素nisin的重要生产菌株.利用双向电泳技术对乳酸乳球菌N8的菌体蛋白质进行了有效地分离,分析双向电泳图谱获得584个蛋白质点.通过基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱分析以及蛋白数据库检索,成功鉴定出其中6种乳酸乳球菌蛋白,为后续乳酸乳球菌蛋白质组学研究奠定了基础.

Nisin生产菌株Lactococcus lactis N302的发酵优化

对一株Nisin生产菌株Lactococcus lactis N302现有培养基进行了氮源替代,并采用Plackett-Burman(PB)法和中心复合设计(Central Composite Design)对影响其发酵生产Nisin的6个培养条件进行筛选优化.PB实验表明,蔗糖、初始pH值和酵母粉是影响Nisin效价的三个关键因素.对三因素进行中心复合设计,经响应面法优化分析(RSM)确定了L.Lactis N302发酵生产Nisin的最优条件为:蔗糖13.7 g.L-1,初始pH值7.74,酵母粉25.7 g.L-1,大豆蛋白胨10.0 g.L-1,K2HPO410.0 g.L-1,接种量3%.优化后Nisin效价较优化前提高了7.2%.小试(10 L)研究表明,分批发酵18 h、补碱分批发酵16 h菌株L.lactis N302单位Nisin效价最高,分别为4 597.03 IU.mL-1和8 773.34 IU.mL-1.

ptsH基因过表达对乳酸乳球菌N8自身免疫耐受性及其生理代谢的影响

目的:通过基因工程方法提高HPr蛋白编码基因ptsH在乳链菌肽(nisin)高产野生乳酸乳球菌株N8中的表达,揭示ptsH基因与乳酸乳球菌乳链菌肽耐受性等相关生物学功能的关系。方法:构建ptsH过表达质粒pLEV16-ptsH并转化至N8,使其ptsH基因过量表达,进而对比分析ptsH过表达菌株与野生菌株在生长曲线、乳链菌肽耐受性、效价、Biolog等方面的差异。结果:N8-ptsH过表达菌株与N8菌株在菌落形态、大小、表面湿滑程度及生长曲线等方面没有明显差异;ptsH基因过表达使N8菌株的乳链菌肽耐受性提高了8.3%,2个乳链菌肽耐受性相关基因nisI和nisF的表达量分别提高了15.45倍和近45倍;ptsH基因过表达略微减缓了N8菌株中乳链菌肽的产生,但乳链菌肽的最终产量略有提高;ptsH基因过表达菌株中PTS系统糖苷和磷酸化糖类的利用率比原始菌株显著提高。结论:ptsH基因主要与乳酸乳球菌的乳链菌肽耐受性有关。