微重力三维动态诱导骨髓间充质干细胞复合可注射型支架材料Pluronic F-127修复关节软骨缺损

目的:利用三维动态诱导的同种异体非软骨来源种植细胞,复合可注射型支架材料聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物Pluronic F-127修复关节软骨缺损。方法:实验于2005-06/2006-03在哈尔滨医科大学附属第一医院动物实验中心完成。①选取2个月龄新西兰大白兔27只,3只用于骨髓间充质干细胞的分离,剩余24只随机数字表法分为诱导细胞复合支架组、单纯支架组、空白对照组,8只(16膝)/组。可注射型支架材料Pluronic F-127为白色粉沫状,无味,其水溶液在低温4℃呈液态,37℃形成固态凝胶(sigma公司,产品批号P2443)。②兔麻醉后穿刺抽取胫骨骨髓,分离培养骨髓间充质干细胞,取3代细胞进行实验。③收集细胞,离心成团,分4组不同诱导条件。三维动态培养组:10g/L藻酸钠溶液洗涤并重新悬浮细胞,细胞浓度为5×1010L-1,滴入200mmol/L氯化钙溶液,立即形成藻酸钙凝胶微球,细胞被悬浮固定于球内部,静止5min,取出凝胶微球,置于旋转式细胞培养系统,微重力条件下动态诱导。二维动态培养组:细胞直接接种于旋转式细胞培养系统,微重力条件下动态诱导。三维静态培养组:藻酸钙凝胶微球悬浮细胞接种于培养瓶静态培养。二维静态培养组:细胞直接接种于平面培养瓶静态培养。各组细胞诱导培养2周,制备切片,分别行甲苯胺蓝染色及Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。柠檬酸钠溶液溶解藻酸钙凝胶微球,测定各组胶原和蛋白多糖含量。④各组兔的双膝均制备膝关节全层软骨缺损模型。诱导细胞复合支架组选取诱导分化最佳的骨髓间充质干细胞与25%可注射型支架材料Pluronic F-127在低温下混匀,重悬,细胞终浓度为5×1010L-1,注入股骨内髁软骨缺损区。单纯支架组只将25%Pluronic F-127注入股骨内髁软骨缺损区。空白对照组关节软骨缺损区不作任何处理。各组分别于术后4,8,12,24周取材,大体及镜下观察关节软骨表面缺损修复情况,同时进行组织学评分。结果:24只兔全部进入结果分析。①骨髓间充质干细胞体外诱导培养及鉴定结果:藻酸钠接触钙离子迅速形成透明凝胶微球,有光泽,凝胶微球中的细胞呈球形,核仁清晰,与正常软骨细胞立体结构相似。培养过程中各组细胞甲苯胺兰染色均呈阳性,并表达Ⅱ型胶原,但无明显Ⅰ型胶原表达。②不同体外诱导分化条件下细胞生化指标的表达:三维、二维动态培养组的胶原和蛋白多糖含量均明显高于三维、二维静态培养组,且以三维动态培养组效果最佳[(0.078±0.002),(0.048±0.002),(0.035±0.001)A,P<0.05;(0.111±0.003),(0.069±0.003),(0.058±0.002)A,P<0.05]。③关节软骨缺损修复情况:诱导细胞复合支架组术后12周修复软骨表面光滑,质地坚硬,为透明软骨组织结构,与周围软骨结合紧密,至24周仍保持透明软骨形态;而单纯支架组、空白对照组均未被修复。术后4,8,12,24周,诱导细胞复合支架组关节软骨组织学评分均优于单纯支架组、空白对照组(P<0.05),且术后时间越长,修复效果越佳。结论:微重力条件下三维动态诱导骨髓间充质干细胞可提高分化质量,获得的种植细胞复合可注射型支架材料修复关节软骨缺损能够取得稳定的长期修复效果。

微重力条件下动态三维诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞:与静态培养的比较

目的:观察微重力条件下动态三维诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化,并与静态培养作比较。方法:实验于2005-08/2006-04在哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验室完成。穿刺抽取2月龄新西兰大白兔骨髓,密度梯度离心法分离纯化,体外培养扩增。取第3代骨髓间充质干细胞分组诱导培养:三维动态培养组:1%藻酸钠溶液洗涤并重新悬浮细胞,细胞密度为5×1010L-1,滴入200mmol/L氯化钙溶液,立即形成藻酸钙凝胶微球,细胞被悬浮固定于球内部,静止5min,取出凝胶微球,磷酸盐缓冲液充分洗涤,置于旋转式细胞培养系统,微重力条件下动态诱导。二维动态培养组:细胞直接接种于平面培养瓶,置于旋转式细胞培养系统,微重力条件下动态诱导。三维静态培养组:藻酸钙凝胶微球悬浮细胞静态培养。二维静态培养组:细胞直接接种于平面培养瓶静态培养。诱导培养2周后取材,甲苯胺蓝染色、Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,测定胶原和蛋白多糖含量。结果:①藻酸钠接触钙离子迅速形成透明凝胶微球,直径约为1.0mm,均匀一致,有光泽,易于操作。倒置显微镜下见凝胶微球中的细胞呈球形,核仁清晰,动、静态培养后立体结构相似。甲苯胺蓝染色阳性,表达Ⅱ型胶原,无明显Ⅰ型胶原表达。平面培养组细胞形态由梭形向多角形、多边形转变,核周可见黑色颗粒。甲苯胺蓝染色弱阳性,仅少数细胞表达Ⅱ型胶原。②与静态培养相比,动态培养出现明显软骨分化,动态培养组胶原和蛋白多糖产量均高于静态培养培养组,以三维动态培养组效果最佳[胶原:0.078±0.004,0.069±0.003,0.048±0.002,0.035±0.004;蛋白多糖:0.111±0.003,0.092±0.002,0.069±0.003,0.058±0.002,(P<0.05)]。结论:立体诱导优于平面诱导,微重力动态培养可提高细胞诱导分化质量。

肱骨近段锁定板结合植骨治疗肱骨外科颈Ⅱ、Ⅲ型骨折疗效观察

目的评价切开复位内固定加植骨治疗肱骨外科颈Ⅱ、Ⅲ型骨折的疗效。方法采用肱骨近段锁定板结合植骨治疗肱骨外科颈骨折21例,根据Neer分型,Ⅱ型5例,Ⅲ型16例;其中二部分骨折5例,三部分骨折10例,四部分骨折6例。结果所有病例均随访6个月以上,骨折全部愈合,肩关节功能恢复满意,优良率85.7%。结论肱骨近段锁定板结合植骨有利于骨折断端愈合、肩关节功能的恢复,是治疗肱骨外科颈Ⅱ、Ⅲ型骨折的有效方法。

有限切开空心钉治疗青壮年股骨颈GardenⅢ、Ⅳ型骨折

目的观察有限切开空心钉内固定治疗青壮年股骨颈GardenⅢ、Ⅳ型骨折的疗效。方法 2009年9月至2011年7月,对26例青壮年股骨颈骨折采用有限切开空心钉内固定治疗,按Harris评分进行疗效评定。结果随访6个月至3年,平均1.6年。切口全部一期愈合,平均骨折愈合时间为7个月。按Harris评分:优13例,良8例,可4例,差1例,优良率为81%。结论有限切开空心钉内固定是治疗青壮年股骨颈GardenⅢ、Ⅳ型骨折的有效方法。

有限切开空心钉治疗青壮年股骨颈GardenⅢ、Ⅳ型骨折疗效观察

目的：探讨青壮年股骨颈骨折GardenⅢ、IV型的治疗方法与疗效。方法：对26例青壮年股骨颈骨折采用有限切开空心钉内固定治疗。结果：随访0．5～3．0年，平均1．6年，全部工期愈合，平均愈合时间为7个月。按Harris评定：优13例，良8例，可4例，差1例，优良率为81％。结论：有限切开空心钉内固定是治疗青壮年股骨颈GardenⅢ、Ⅳ型骨折的有效方法，具有创伤小、复位满意、并发症少、愈合率高、功能恢复好等特点。

新时期提高初中数学教学质量的方法与对策

初中数学作为我国义务教育体系的重要组成部分,在社会发展过程中具有非常重要的作用与意义。与其它课程相比,初中数学本身所具有的不同特性需要进行不同的教学方式,以便更好的提高教学质量。本文在相关文献分析的基础之上,从多个角度,进行系统的思考,通过运用多种方法,充分有效的利用课堂时间,挖掘每个学生的潜力,有效的提高课堂教学质量。

关于初中数学应用题的研究

1应用题教学的重要性 在初中数学教学过程中,教师应该注重学生对数学知识掌握的应用,要把数学知识运用到实际生活中去,解决日常生活中出现的问题,这是数学教学的目的。初中数学课程标准明确指出,要学生会应用所学知识解决简单的实际问题,能适应社会日常生活和生产劳动的基本需要。

肱骨髁上骨折切开复位内固定术治疗体会

目的 探讨肱骨髁上骨折切开复位内固定术的临床观察.方法 对2011年6月～2013年6月收治的30例行肱骨髁上骨折切开复位内固定术临床资料进行分析.结果 手术时间60～240 min,平均85 min;骨折全部愈合,愈合时间6～13周,平均6.5周;术后优10例,良16例,可4例,差0例,优良率86.66％.结论 移位不稳定性骨折或疑有血管神经损伤者,采用切开复位钢板内固定治疗,以利肘关节早期无痛功能锻炼.

2006年中考与生活中的数学

数学源于生活，数学中的公式、法则、定理反映了生活中的规律，学好数学离不开对我们周围遇到的事物的认识。有许多数学的问题都是我们身边常发生的事情。

尺神经和尺动脉损伤同时修复46例

尺神经在腕部的损伤尤为常见，并且通常合并有尺动脉的损伤。目前多数学者主张一期同时修复尺神经和尺动脉。自2000年1月至2004年9月间我院对46例尺神经合并尺动脉断裂伤患者行一期同时修复，手术前后检测掌指尺侧血流量改变，随访观察尺神经术后各项临床指标，提出修复尺动脉对尺神经功能恢复具有临床意义，现报道如下。

可诱导共刺激分子基因表达抑制降低大鼠T淋巴细胞活化增殖能力的研究

目的RNAi抑制大鼠T淋巴细胞可诱导共刺激分子（ICOS）基因表达，观察其对T淋巴细胞功能的影响。方法选择4个干扰位点，插入pSilencer4．1-CMV neo载体，转染大鼠淋巴细胞。RT-PCR检测ICOS基因的抑制程度，流式检测ICOS表达变化。MLR检测细胞的增殖能力，ELISA法检测细胞因子IFN-γ和IL4分泌水平。结果转染后，T淋巴细胞ICOS的mRNA和ICOS分子表达水平下降（P〈0.05），淋巴细胞增殖能力明显降低，同时IFN-γ和IL4的水平也减低。结论大鼠淋巴细胞ICOS基因的表达抑制，降低了T淋巴细胞活化增殖能力。

一期翻修对膝关节置换术后假体周围感染的影响

目的探讨一期翻修对膝关节置换术后假体周围感染的治疗效果,以减少感染率。方法回顾性分析2005-2011年71例膝关节置换术感染后行一期翻修的患者,将其随机分为3组:A组:9例行单侧髁膝关节置换;B组:40例行全膝关节置换;C组:22例行铰链式膝关节置换;所有患者均采用局部和全身抗菌药物治疗,术后随访两年,分析患者膝关节的KSS评分和OKS评分。结果 A、B两组患者术后膝关节无再感染,C组患者4例出现再次感染,感染率为18.2%;术后6个月,3组KSS评分、功能评分和Oxford评分差异均有统计学意义(P<0.05);术后1年3组的功能评分和Oxford评分差异均有统计学意义,A组功能评分最高、Oxford评分最低(P<0.05);术后两年3组功能评分、KSS评分和Oxford评分差异均无统计学意义。结论一期翻修手术能有效控制膝关节置换术后假体周围感染。