水稻与大黍不对称体细胞杂交再生植株

采用PEG(聚乙二醇)融合法,诱导水稻(Oryza sativa L.)原生质体与无融合生殖大黍(Panicummaximum Jacq.)原生质体融合,经过融合体筛选、培养,成功地获得了再生植株并移栽成活。在融合前,水稻原生质体经过2.5mmol/L碘乙酰胺(IOA)在室温(22～25℃)条件下处理15min,大黍原生质体经过60Kr软X射线照射处理。对获得的28株融合再生植株进行初步检查发现,在花器官形态、结构及生殖特性上与对照亲本水稻植株有显著的差异,出现多花药(一朵颖花具7～11枚甚至13枝花药)、多胚珠(1个子房内有2～3个胚珠)及“多胚囊”(1个胚珠内有2个以上类似胚囊的结构)等现象。雌、雄性育性显著降低或完全不育,仅有5株能够少量结实,I-KI溶液着色的花粉从0至68％不等。细胞胚胎学检查表明不能结实的植株雌性均不育,即不能分化出正常的胚囊结构。

盐生盐杆菌在不同营养条件下紫膜蛋白形成的差异

用四种培养基培养产生紫膜极端嗜盐菌盐生盐杆菌（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｌｏｂｉｕｍ）菌株Ｒ１，通过超速离心和蔗糖密度梯度纯化紫膜，ＳＤＳ－ＰＧＡＥ后用考马斯亮蓝染色的结果显示其合成的紫膜蛋白的形式有所差异。从蛋白胨培养基上获得的紫膜有三条蛋白带，分子量约２６～２７５ｋＤ，而从复合培养基、合成培养基和人工海水培养基上获得的紫膜，仅呈现一条蛋白带，分子量约２６ｋＤ，即蛋白胨培养基上的成熟紫膜蛋白形式。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ的结果证明，在以上四种培养基上获得的纯化紫膜经ＳＤＳ－ＰＧＡＥ后考马斯亮蓝染色的条带确系紫膜蛋白，但还存在含量低于考马斯亮蓝染色灵敏度的紫膜蛋白带，从复合培养基、合成培养基和人工海水培养基所得紫膜在２８ｋＤ左右有一条浅带，但从蛋白胨培养基所得紫膜无此带；四种培养基所得紫膜在２３５ｋＤ左右都有一条浅带。可见。

绿豆子叶衰老过程中线粒体膜对几种氨基酸的透性

采用线粒体膨胀技术就不同衰老程度的绿豆子叶线粒体膜对氨基酸的透性进行了测定，结果表明，随着绿豆子叶的衰老，离体线粒体膜在脯氨酸、丝氨酸和甘氨酸等渗溶液中的膨胀率从２ｄ龄至５ｄ龄子叶逐渐下降，５ｄ龄时．线粒体结构与功能已受到明显破坏。文中对膨胀率下降的原因进行了讨论。

被子植物的无融合生殖

被子植物的无融合生殖孙敬三刘永胜辛化伟（中国科学院植物研究所，北京１０００９３）ＡＰＯＭＩＸＩＳＩＮＡＮＧＩＯＳＰＥＲＭＳＳｕｎＪｉｎｇ－ｓａｎ，ＬｉｕＹｏｎｇ－ｓｈｅｎｇ，ＸｉｎＨｕａ－ｗｅｉ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ，ＡｃａｄｅｍｉａＳ...

利用染色体消除法获得太谷核不育小麦纯合体

太谷核不育小麦的育性受单个显性雄性不育基因（Ｔａ１）控制，其不育株总是杂合（Ｔａ１ｔａ１）的，纯合不育株（Ｔａ１Ｔａ１）并不存在。实验以太谷核不育小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）为母本和玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）杂交，利用杂合子和幼胚细胞分裂过程中父本玉米染色体自发消除的特点，经过激素处理、幼胚拯救和染色体人工加倍，成功地获得了自然界不存在的纯合显性太谷核不育小麦新种质（Ｔａ１Ｔａ１），并利用“玻璃化”超低温保存方法，将这一宝贵新种质长期保存下来。

甘肃蚤缀乙酸乙酯部位对肺纤维化小鼠肺组织的保护作用

目的探究藏药甘肃蚤缀乙酸乙酯部位对肺纤维化小鼠肺组织的保护作用。方法将50只小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(200 mg/kg比菲尼酮)和乙酸乙酯部位低、中、高剂量组(35、70、140 mg/kg),每组10只(雌雄各半)。假手术组小鼠气管内缓慢滴入生理盐水溶液(约100μL),其余各组小鼠气管内缓慢滴入等体积博来霉素(5 mg/kg),建立肺纤维化动物模型。连续给药28 d后,观察小鼠肺组织病理变化,检测肺系数、羟脯氨酸水平,采用ELISA法检测小鼠血清TNF-α、TGF-β1、MDA水平和SOD活性,免疫荧光法检测肺组织α-SMA蛋白表达,Western blot法检测肺组织NF-κB、Nrf2、Smad2蛋白表达。结果假手术组小鼠肺泡壁纤细,间质无炎性细胞浸润和胶原沉积。与假手术组比较,模型组小鼠肺组织间质有明显炎性细胞浸润,肺泡壁增厚,肺泡腔塌陷,胶原沉积明显,肺系数、肺泡炎症、肺纤维化评分升高(P<0.01);肺组织羟脯氨酸、TNF-α、TGF-β1、MDA水平升高(P<0.01),SOD活性降低(P<0.01);肺组织α-SMA、NF-κB、p-Smad2蛋白表达升高(P<0.01),Nrf2蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组比较,乙酸乙酯部位组小鼠肺组织炎性细胞浸润逐渐减轻,纤维化逐渐改善,胶原沉积减少,肺系数、肺泡炎症、肺纤维化评分降低(P<0.01);肺组织羟脯氨酸、TNF-α、TGF-β1、MDA水平降低(P<0.01),SOD活性升高(P<0.01);肺组织α-SMA、NF-κB、p-Smad2蛋白表达降低(P<0.01),Nrf2蛋白表达升高(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论甘肃蚤缀乙酸乙酯部位具有抗肺纤维化作用,并呈剂量依赖性,其作用机制可能与其抑制NF-κB和TGF-β1/Smads信号通路以及激活Nrf2信号通路有关。

单域抗体研究进展

单域抗体(single-domain antibody, sdAbs)是近年来利用基因工程技术从骆驼科动物和软骨鱼血清中克隆得到的只保留重链可变区的具有抗原结合活性的新型抗体,具有分子量小、特异性高、亲和性好、稳定性高、组织穿透力强、免疫原性低和制备成本低等优点,在诊断、治疗和检测等领域已取得一定成果并获得广泛关注。本文综述了单域抗体的发展历程、结构特征、表达纯化、理化性质及应用方向,特别是对进化上更早出现、抗原结合性能更加多样的鲨鱼sdAbs进行了详尽分析,并对其发展前景和可能面临的问题作了展望。

先天性端粒(缺陷)综合征的发病机制与治疗研究进展

端粒是真核生物(包括人类)细胞染色体末端的保护性结构,正常的端粒结构与功能是染色体稳定性和完整性的重要保障。先天性端粒(缺陷)综合征是由端粒相关基因突变引起的一组端粒维护缺陷疾病,通常被称为端粒缩短或短端粒综合征,广泛影响各种干细胞的功能,可累及多系统,临床表现包括先天性角化不良及相关疾病、再生障碍性贫血、肺纤维化、肝脏病变等病症。导致端粒缺陷的机制复杂,致病基因涉及端粒酶及其复合体组分、端粒蛋白复合体组分及其它端粒相关因子,具有X连锁隐性、常染色体显性和隐性遗传等多种遗传方式;临床表现有明显异质性,造成诊断困难,容易漏诊、误诊,耽误治疗。随着基因分析技术的临床应用,分子诊断方法可有效地提高诊断准确性;同时,开展针对性的治疗也有了进一步的进展。

抗大豆胰蛋白酶抑制剂单链抗体表达与纯化方法优化

[目的]利用大肠杆菌毒素蛋白VTB的五聚体化结构域（VT1B）及梭菌纤维素酶的纤维素结合结构域（CBD）,异源表达其与抗大豆胰蛋白酶抑制剂单链抗体（anti-BBI Sc Fv）的融合蛋白,对该单链抗体表达与纯化方法进行优化。[方法]构建CBD-VT1B-anti-BBI Sc Fv融合蛋白大肠杆菌表达系统;应用Ni-NTA树脂与微晶纤维素两步亲和层析法提纯单链抗体融合蛋白。[结果]单链抗体融合蛋白在大肠杆菌中得到大量表达,通过两步纯化法获得了高纯度的融合蛋白,纯度比Ni-NTA树脂一步纯化法提高约12~34%;五聚体融合蛋白与纤维素的结合能力及蛋白纯化效率比单体蛋白提高约1倍。[结论]通过增加纤维素标签和五聚体化结构域,抗大豆胰蛋白酶抑制剂五聚体化单链抗体融合蛋白的纯化效果得到提高。

一种通过GFP结合蛋白强化三分子荧光互补方法的建立

[目的]将改造后的GFP(super-fold GFP,简写为sf GFP)作为三分子荧光互补技术的基础,通过应用多种GFP结合蛋白(GFP binding protein,GBP),筛选并验证可强化荧光互补作用的GFP结合蛋白。[方法]将sf GFP拆分为三部分(GFP1-9,GFP10和GFP11),建立GFP三分子荧光互补技术体系,利用多种GFP结合蛋白对GFP三分子荧光互补技术进行试验,通过观察荧光变化筛选可强化荧光互补作用的GFP结合蛋白。[结果]发现DARPin-GFP、GFP-enhancer和Nbsf GFP这三种GFP结合蛋白能够与GFP共定位并对GFP三分子重组装有增强效果,其中GFP-enhancer与Nbsf GFP增强效果约为原荧光强度4倍,DARPin-GFP约为2倍。[结论]GFP结合蛋白可作为一种新手段,使以GFP三分子荧光互补技术为基础的蛋白质-蛋白质相互作用研究的检测效率和灵敏度得到提高。

银杏外种皮化学成分、生物活性和资源利用的研究进展

银杏外种皮提取物具有杀菌、杀虫、抗肿瘤、抗炎和抗过敏等药理作用,但在工业生产中多被废弃。现对银杏外种皮的化学成分、生物活性和资源利用进行综述,为其深入研究与产品开发提供参考。

利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体

本研究旨在人绒毛膜促性腺激素(hCG)的结合多肽的基础上应用嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体,简化单域抗体制备过程,提高多肽生化稳定性。利用单域抗体通用骨架(cAbBCII10),以hCG结合多肽取代互补决定区CDR1或CDR3,合成cAb BCII10嫁接抗体全基因序列并与sfGFP基因序列融合后,插入到带有His标签的原核表达载体pET30a(+)中,成功构建了pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR1/hCGBP1-sfGFP与pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR3/hCGBP3-sfGFP融合蛋白表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达融合蛋白,得到高表达量的可溶性融合蛋白。利用Ni-NTA亲和柱纯化得到纯蛋白,应用SDS-PAGE鉴定纯化的蛋白为正确表达的目标蛋白。通过抗原抗体结合实验,发现hCG结合多肽嫁接到单域抗体通用骨架的互补决定区CDR1或CDR3后都有抗原结合活性,具有相似的抗体滴度,且嫁接到CDR3后的抗原结合活性比CDR1要高(2–3倍)。嫁接抗体基本保留了所用单域抗体框架较为稳定的生化特性,具有一定的热稳定性和较好的碱耐受性,同时,所接入的hCG结合片段对hCG具有较特异的结合活性。

应用RAD多肽展示体系制备抗hCG类抗体分子

应用基于激烈火球菌Pyrococcus furiosus重组酶RadA的ATP酶结构域(RAD骨架)的多肽展示体系,通过嫁接人绒毛膜促性腺激素(hCG)结合多肽,制备抗hCG类抗体分子。通过合成hCG结合多肽插入RAD多肽展示位点的类抗体基因,成功构建了pET30a-RAD/hCGBP-sfGFP原核表达载体,在大肠杆菌中诱导蛋白表达,分离、纯化获得类抗体蛋白,通过亲和吸附-GFP荧光检测方法测定类抗体对hCG的结合活性,并与应用单域抗体通用骨架制备的嫁接抗体比较活性差异。结果显示,RAD类抗体分子对hCG分子具有较高的亲和性和特异性,显著优于单域嫁接抗体,并与商业单克隆抗体的活性相当;同时,利用RAD多肽展示骨架制备的抗hCG类抗体,具有较高的生化稳定性,是一种具有应用潜力的抗体替代分子。